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嵌合型猪圆环病毒的构建与猪圆环病毒2型新转录产物的表达

摘要第1-8页
ABSTRACT第8-13页
文献综述第13-32页
 第一章 猪圆环病毒研究进展第13-23页
   ·病毒及相关疾病第13-14页
   ·病毒基因组第14-15页
   ·病毒蛋白第15-16页
   ·PCV 的转录第16-17页
   ·病毒进入细胞第17-19页
   ·PCV 的复制第19-20页
   ·病毒与宿主的相互作用第20-22页
   ·小结第22-23页
 第二章 猪圆环病毒 2 型疫苗研究进展第23-32页
   ·商品化疫苗第24-26页
     ·现有的商品化疫苗第24-25页
     ·现有商品化疫苗的免疫效果第25-26页
   ·实验性疫苗第26-31页
     ·以 RNA 为基础的抗病毒疗法第26页
     ·改良减毒活疫苗第26-28页
     ·DNA 疫苗第28页
     ·载体疫苗第28-30页
     ·标记疫苗第30-31页
   ·展望第31-32页
试验研究第32-66页
 第三章 嵌合型猪圆环病毒(PCV1-2b)的构建及增殖特性研究第32-44页
   ·材料第33-34页
     ·病毒和细胞第33页
     ·主要试剂和抗体第33页
     ·主要仪器第33页
     ·主要溶液及培养基的配制第33-34页
   ·方法第34-36页
     ·总 RNA 的提取第34页
     ·嵌合质粒 PCV1-2b 在 PK-15 细胞中的转染第34页
     ·间接免疫荧光(IFA)检测嵌合病毒第34-35页
     ·PCR检测嵌合病毒第35页
     ·嵌合病毒的透射电镜(TEM)观察第35页
     ·Western blot检测嵌合病毒 Cap 蛋白的表达第35页
     ·嵌合病毒在不同细胞上的增殖差异第35-36页
     ·氯化铵对病毒增殖效果的影响第36页
   ·结果第36-41页
     ·转染后细胞形态变化第36页
     ·间接免疫荧光(IFA)检测嵌合病毒第36页
     ·PCR检测嵌合病毒第36-38页
     ·嵌合病毒的透射电镜观察第38页
     ·Westen blot检测嵌合病毒 Cap 蛋白的表达第38-39页
     ·嵌合病毒在不同细胞上的增殖差异第39-40页
     ·氯化铵对病毒增殖效果的影响第40-41页
   ·讨论第41-43页
   ·小结第43-44页
 第四章 猪圆环病毒1型和2型a与b基因型三重PCR鉴别方法的建立及应用第44-55页
   ·材料第45页
     ·病毒、菌株、载体和细胞第45页
     ·主要试剂及试剂盒第45页
     ·主要仪器第45页
     ·主要溶液及培养基的配制第45页
   ·方法第45-47页
     ·引物设计与合成第45-46页
     ·模板制备第46页
     ·单PCR扩增第46页
     ·PCR产物的鉴定第46-47页
     ·单PCR敏感性、特异性试验第47页
     ·双重PCR扩增条件的优化第47页
     ·三重PCR扩增条件的优化第47页
     ·三重PCR的敏感性、特异性试验、重复性试验第47页
     ·临床样品检测第47页
   ·结果第47-53页
     ·单重PCR扩增结果第47-48页
     ·PCR产物的鉴定第48页
     ·单PCR敏感性、特异性试验结果第48-49页
     ·双重PCR扩增条件的优化结果第49-50页
     ·三重PCR扩增条件的优化第50-51页
     ·三重PCR的敏感性、特异性试验、重复性试验第51-52页
     ·临床样品的检测结果第52-53页
   ·讨论第53-54页
   ·小结第54-55页
 第五章 PCV2 新转录产物的表达及其功能的初步研究第55-66页
   ·材料第55-56页
     ·菌株和载体第55页
     ·主要试剂及抗体第55-56页
     ·主要仪器第56页
   ·方法第56-58页
     ·真核表达载体 GFP-ORF5 和 GFP-ORF6 的构建第56-57页
     ·重组质粒的细胞转染与鉴定第57-58页
     ·ORF5与OFR6蛋白过表达后细胞凋亡影响的初步研究第58页
   ·结果第58-63页
     ·PCV2 ORF与ORF6的PCR扩增第58-59页
     ·重组质粒的鉴定第59-60页
     ·重组质粒的细胞转染第60-61页
     ·重组质粒表达产物的RT-PCR鉴定第61-62页
     ·表达产物的 Western blot 鉴定第62页
     ·ORF5与OFR6蛋白过表达后对细胞凋亡影响的初步研究第62-63页
   ·讨论第63-64页
   ·小结第64-66页
结论第66-67页
参考文献第67-77页
缩略词第77-78页
致谢第78-79页
作者简介第79页

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