| 致谢 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-19页 |
| 1. miRNA 及其在植物中的研究进展 | 第9-13页 |
| ·miRNA 的特点 | 第9-10页 |
| ·miRNA 的形成与作用机制 | 第10-12页 |
| ·植物 miRNA 的形成 | 第10-12页 |
| ·miRNA 的作用机制 | 第12页 |
| ·miRNA 在植物抗病中的作用与功能 | 第12-13页 |
| 2. miRNA 及其靶基因的鉴定方法 | 第13-17页 |
| ·miRNA 的鉴定方法 | 第13-16页 |
| ·定向克隆法 | 第13页 |
| ·Northern Blot | 第13-14页 |
| ·实时定量 PCR 检测法 | 第14页 |
| ·基因芯片 | 第14-15页 |
| ·Solexa 测序技术 | 第15-16页 |
| ·miRNA 靶基因的鉴定 | 第16-17页 |
| 3. 杨树黑斑病的研究进展 | 第17-18页 |
| ·杨树黑斑病发生情况 | 第17-18页 |
| ·杨树黑斑病分子免疫研究进展 | 第18页 |
| 4. 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 杨树抗黑斑病相关 miRNA 的鉴定与克隆 | 第19-32页 |
| 1. 实验材料 | 第19-21页 |
| ·真菌材料 | 第19页 |
| ·植物材料 | 第19页 |
| ·菌株及载体 | 第19页 |
| ·实验试剂 | 第19-20页 |
| ·缓冲液及培养基 | 第20页 |
| ·仪器设备 | 第20-21页 |
| 2. 实验方法 | 第21-24页 |
| ·杨生褐盘二孢菌继代培养及接种 | 第21页 |
| ·植物 RNA 的提取及纯化 | 第21-22页 |
| ·Trizol 法提取 RNA | 第21页 |
| ·RNA 的纯化 | 第21-22页 |
| ·RNA 的浓度、纯度及完整性检测 | 第22页 |
| ·miRNA 表达分析 | 第22-23页 |
| ·茎环法反转录 miRNA | 第22-23页 |
| ·qRT-PCR | 第23页 |
| ·miRNA 基因的克隆 | 第23-24页 |
| 3. 结果与分析 | 第24-31页 |
| ·总 RNA 质量分析 | 第24-25页 |
| ·miRNA 的 qRT-PCR 检测 | 第25-28页 |
| ·杨树 MIR164a 基因的克隆和序列分析 | 第28-31页 |
| 4. 讨论 | 第31-32页 |
| 第三章 miR164a 靶基因的克隆和表达分析 | 第32-49页 |
| 1. 实验材料 | 第32-33页 |
| ·真菌及植物材料 | 第32页 |
| ·菌株及载体 | 第32页 |
| ·实验试剂 | 第32页 |
| ·缓冲液及培养基 | 第32-33页 |
| ·仪器设备 | 第33页 |
| 2. 实验方法 | 第33-42页 |
| ·miRNA 靶基因的预测 | 第33页 |
| ·RACE 技术进行靶基因全长的克隆 | 第33-40页 |
| ·RNA 的提取及纯化 | 第34页 |
| ·3’RACE 巢式 PCR | 第34-35页 |
| ·3’RACE 反转录反应 | 第34页 |
| ·3’RACE Outer PCR | 第34-35页 |
| ·3’RACE Inner PCR | 第35页 |
| ·5’RACE 巢式 PCR | 第35-39页 |
| ·去磷酸化反应 | 第35-36页 |
| ·去帽子反应 | 第36-37页 |
| ·5’RACE Adaptor 的连接 | 第37页 |
| ·反转录反应 | 第37-38页 |
| ·5’RACE Outer PCR | 第38页 |
| ·5’RACE Inner PCR | 第38-39页 |
| ·目的片段回收及载体连接 | 第39页 |
| ·大肠杆菌 Top10 转化及阳性克隆的 PCR 验证 | 第39-40页 |
| ·qRT-PCR 进行靶基因的表达分析 | 第40-41页 |
| ·杨生褐盘二孢菌继代培养及接种 | 第40页 |
| ·RNA 的提取及纯化 | 第40页 |
| ·RNA 反转录 cDNA | 第40-41页 |
| ·qRT-PCR | 第41页 |
| ·杨树原生质体分离及转化 | 第41-42页 |
| ·杨树叶肉原生质体分离 | 第41-42页 |
| ·PEG 法转化原生质体 | 第42页 |
| 3. 结果与分析 | 第42-48页 |
| ·杨树 miR164a 靶基因的预测 | 第42页 |
| ·靶基因 NAC1 的克隆和序列分析 | 第42-46页 |
| ·PdNAC1 基因的表达分析 | 第46-47页 |
| ·PdNAC1 基因的亚细胞定位 | 第47-48页 |
| 4. 讨论 | 第48-49页 |
| 第四章 miR164a 与靶基因 PdNAC1 的相互作用机制验证 | 第49-58页 |
| 1. 实验材料 | 第49-50页 |
| ·植物材料 | 第49页 |
| ·菌株及载体 | 第49页 |
| ·实验试剂 | 第49页 |
| ·缓冲液及培养基 | 第49-50页 |
| ·仪器设备 | 第50页 |
| 2. 实验方法 | 第50-53页 |
| ·基因编码区克隆及载体构建 | 第50-52页 |
| ·基因编码区克隆 | 第50-52页 |
| ·目的片段连接入门载体 | 第52页 |
| ·载体构建 | 第52页 |
| ·靶基因 NAC1 的多位点突变 | 第52-53页 |
| ·杨树原生质体分离与转化 | 第53页 |
| 3. 结果与分析 | 第53-56页 |
| ·靶基因的多位点突变 | 第53-55页 |
| ·基因表达载体的构建 | 第55页 |
| ·miR164a 与靶基因的相互作用 | 第55-56页 |
| 4. 讨论 | 第56-58页 |
| 第五章 主要结论与展望 | 第58-60页 |
| 1. 主要结论 | 第58-59页 |
| ·南林 895 抗黑斑病过程中的 miRNA 响应 | 第58页 |
| ·靶基因与 miRNA 表达水平间的关系 | 第58-59页 |
| ·miRNA 与靶基因的互作机制 | 第59页 |
| 2. 问题与展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
