| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 符号表(缩略语表) | 第8-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-28页 |
| 1 徐淮山羊 | 第15页 |
| 2 不饱和脂肪酸与肉品质 | 第15-18页 |
| 3 脂肪酸饱和度与人类健康 | 第18页 |
| 4 硬脂酰辅酶A脱氢酶基因概述 | 第18-25页 |
| ·硬脂酰辅酶A脱氢酶基因的发现 | 第18-19页 |
| ·硬脂酰辅酶A脱氢酶基因的分类及组织表达特点 | 第19页 |
| ·硬酰辅酶A脱氢酶基因的结构 | 第19-20页 |
| ·硬酰辅酶A脱氢酶基因的功能研究进展 | 第20-25页 |
| ·SCD基因在脂肪代谢中的作用 | 第20-22页 |
| ·SCD基因在脂蛋白分泌中的作用 | 第22-23页 |
| ·SCD基因在脂肪酸合成中的作用 | 第23-24页 |
| ·SCD基因在脂肪酸氧化中的作用 | 第24-25页 |
| 5 动物转基因技术 | 第25-27页 |
| 6 本研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 第二章 克隆徐淮山羊SCD1基因、生物信息学分析及构建真核重组表达载体 | 第28-42页 |
| 1 材料与方法 | 第28-34页 |
| ·实验材料 | 第28-30页 |
| ·材料来源 | 第28-29页 |
| ·工具酶与试剂 | 第29页 |
| ·设计、合成引物 | 第29页 |
| ·配制其他常用试剂 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-34页 |
| ·克隆徐淮山羊SCD1基因 | 第30-32页 |
| ·提取徐淮山羊脂肪组织中总RNA | 第30页 |
| ·扩增SCD1基因cDNA | 第30-31页 |
| ·SCD1基因的T-A克隆 | 第31-32页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第32页 |
| ·菌液PCR检测目的基因 | 第32页 |
| ·酶切鉴定重组pMD19-T-SCD1载体 | 第32页 |
| ·融合重组表达载体pEGFP-C1-SCD1的构建 | 第32-33页 |
| ·SCD1基因生物信息学分析 | 第33-34页 |
| ·SCD1基因同源性分析 | 第33页 |
| ·SCD1蛋白信号肽预测 | 第33页 |
| ·SCD1蛋白疏水性预测 | 第33页 |
| ·SCD1蛋白磷酸化和糖基化位点预测 | 第33-34页 |
| ·SCD1蛋白二级结构预测 | 第34页 |
| ·SCD1蛋白功能结构域的预测 | 第34页 |
| ·SCD1蛋白亚细胞定位预测 | 第34页 |
| 2 结果 | 第34-40页 |
| ·SCD1基因的克隆 | 第34-35页 |
| ·融合重组表达载体pEGFP-C1-SCD1的鉴定 | 第35-36页 |
| ·SCD1基因生物学信息分析 | 第36-40页 |
| ·SCD1基因序列分析 | 第36页 |
| ·SCD1基因同源性分析 | 第36页 |
| ·SCD1蛋白信号肽预测结果 | 第36-37页 |
| ·SCD1蛋白疏水性预测结果 | 第37-38页 |
| ·SCD1蛋白磷酸化和糖基化位点预测结果 | 第38-39页 |
| ·SCD1蛋白二级结构预测结果 | 第39页 |
| ·SCD1蛋白功能结构域的预测结果 | 第39-40页 |
| ·SCD1蛋白亚细胞定位预测结果 | 第40页 |
| 3 讨论 | 第40-41页 |
| 4 结论 | 第41-42页 |
| 第三章 重组SCD1基因体外表达及其亚细胞定位的研究 | 第42-51页 |
| 1 材料和方法 | 第43-47页 |
| ·材料与试剂 | 第43页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-47页 |
| ·重组质粒pEGFP-C1-SCD1转染NIH-3T3细胞 | 第43-44页 |
| ·RT-PCR检测目的基因在NIH-3T3细胞中的表达 | 第44-45页 |
| ·鼠抗徐淮山羊SCD1基因多克隆抗体的制备 | 第45-46页 |
| ·重组真核表达载体pcDNA3.1-SCD1的构建 | 第45页 |
| ·重组质粒的大量制备 | 第45-46页 |
| ·免疫方法 | 第46页 |
| ·重组质粒转染细胞 | 第46页 |
| ·间接免疫荧光(IFA)检测抗体血清 | 第46-47页 |
| 2 结果 | 第47-49页 |
| ·重组质粒pEGFP-C1-SCD1转染NIH-3T3细胞的检测结果 | 第47页 |
| ·RT-PCR检测目的基因表达结果 | 第47-48页 |
| ·重组载体pcDNA3.1-SCD1的构建 | 第48页 |
| ·IFA对多克隆抗体血清效价的检测结果 | 第48-49页 |
| 3 讨论 | 第49-50页 |
| 4 结论 | 第50-51页 |
| 第四章 睾丸注射法制备携带徐淮山羊SCD1基因的转基因小鼠 | 第51-63页 |
| 1 材料和方法 | 第52-57页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·实验动物和材料 | 第52页 |
| ·主要试剂 | 第52页 |
| ·其他主要配制试剂 | 第52-53页 |
| ·方法 | 第53-57页 |
| ·小鼠睾丸注射重组质粒 | 第53页 |
| ·小鼠尾静脉注射重组质粒暂态表达检测 | 第53页 |
| ·转染效果检测 | 第53-54页 |
| ·PCR检测目的基因在F_1代中表达情况 | 第54-55页 |
| ·Western blot检测目的蛋白在F_1代中表达情况 | 第55-56页 |
| ·检测目的基因稳定遗传给F_2代的情况 | 第56页 |
| ·F_1代和F_2代肌间脂肪含量检测 | 第56-57页 |
| 2 结果 | 第57-61页 |
| ·小鼠尾静脉注射重组质粒冰冻组织切片荧光检测暂态表达 | 第57-58页 |
| ·转染效果及精子DNA检测 | 第58页 |
| ·F_1代小鼠尾组织DNA水平检测 | 第58-59页 |
| ·F_1代小鼠尾组织蛋白水平检测 | 第59页 |
| ·F_2代小鼠尾组织DNA水平检测 | 第59-60页 |
| ·F_2代小鼠尾组织蛋白水平检测 | 第60页 |
| ·F_1代和F_2代肌间脂肪含量检测 | 第60-61页 |
| 3 讨论 | 第61-62页 |
| 4 结论 | 第62-63页 |
| 第五章 睾丸注射法制备携带徐淮山羊SCD1基因的转基因绵羊 | 第63-69页 |
| 1 材料和方法 | 第64-66页 |
| ·材料 | 第64-65页 |
| ·实验动物和材料 | 第64页 |
| ·主要试剂 | 第64页 |
| ·其他主要配制试剂 | 第64-65页 |
| ·方法 | 第65-66页 |
| ·重组质粒的制备及线性化 | 第65页 |
| ·脂质体包裹重组质粒及睾丸注射 | 第65-66页 |
| ·F_1代羔羊DNA水平检测 | 第66页 |
| ·F_1代羔羊蛋白水平检测 | 第66页 |
| 2 结果 | 第66-67页 |
| ·F_1代羔羊DNA水平检测结果 | 第66-67页 |
| ·F_1代羔羊蛋白水平检测结果 | 第67页 |
| 3 讨论 | 第67-68页 |
| 4 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 附录 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-80页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第80-81页 |
