| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-20页 |
| ·生物砖技术及研究进展 | 第11-14页 |
| ·生物砖的概念和特点 | 第11页 |
| ·生物砖研究发展概况 | 第11-12页 |
| ·生物砖的装配 | 第12-13页 |
| ·生物砖技术在合成生物学中的应用 | 第13-14页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第14-17页 |
| ·大肠杆菌表达系统简述 | 第14页 |
| ·表达载体 | 第14-15页 |
| ·mRNA的稳定性对蛋白表达的影响 | 第15-16页 |
| ·蛋白酶对目的蛋白产量的影响 | 第16-17页 |
| ·大肠杆菌表达的局限性及改进策略 | 第17页 |
| ·基因多拷贝策略 | 第17-19页 |
| ·构建多拷贝基因表达载体的意义 | 第17-18页 |
| ·多拷贝基因表达载体构建方法 | 第18页 |
| ·生物砖表达载体串联多拷贝基因的优点 | 第18-19页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第19-20页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第20-32页 |
| ·材料 | 第20-22页 |
| ·菌株和质粒 | 第20页 |
| ·培养基 | 第20页 |
| ·酶和试剂 | 第20-21页 |
| ·仪器和设备 | 第21页 |
| ·主要Buffer | 第21-22页 |
| ·PCR引物 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-32页 |
| ·SDS-PAGE回收DNA | 第22-23页 |
| ·琼脂糖凝胶回收目的DNA片段 | 第23-24页 |
| ·SDS碱裂解法制备质粒DNA | 第24-27页 |
| ·外源基因在E.coli中的表达 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第29-30页 |
| ·SDS-PAGE检测蛋白质的表达 | 第30-32页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第32-47页 |
| ·大肠杆菌生物砖载体PBAD/HIS的构建 | 第32-35页 |
| ·甘露聚糖酶(mannanase)生物砖表达载体的构建 | 第35-41页 |
| ·大肠杆菌表达甘露聚糖酶基因的制备 | 第35-36页 |
| ·生物砖载体pBAD/His的制备 | 第36-37页 |
| ·1 拷贝甘露聚糖酶基因表达载体的构建 | 第37页 |
| ·生物砖法构建man基因多拷贝表达载体 | 第37-41页 |
| ·PBAD/HIS-MAN在大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中的表达 | 第41-47页 |
| ·诱导4小时不同拷贝数甘露聚糖酶表达量分析 | 第41-44页 |
| ·诱导1小时不同拷贝数甘露聚糖酶表达量分析 | 第44-45页 |
| ·诱导30分钟不同拷贝数甘露聚糖酶表达量分析 | 第45-47页 |
| 第四部分 讨论与展望 | 第47-49页 |
| ·讨论 | 第47页 |
| ·展望 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 致谢 | 第53页 |