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兔骨髓间充质干细胞向胰岛细胞分化的研究

致谢第1-11页
中文摘要第11-13页
文献综述第13-22页
 1 骨髓间充质干细胞的研究进展第13-22页
   ·骨髓间充质干细胞的发现及其命名第13-14页
   ·骨髓间充质干细胞的分离和纯化第14-15页
   ·骨髓间充质干细胞的生物学特性第15-16页
   ·骨髓间充质干细胞的鉴定第16-17页
     ·形态学第16页
     ·BMSCs的表面标志第16-17页
     ·免疫细胞化学技术第17页
     ·流式细胞技术术第17页
   ·骨髓间充质干细胞的多项分化潜能第17-20页
     ·BMSCs向成骨细胞的定向诱导分化第18页
     ·BMSCs向软骨细胞的定向诱导分化第18页
     ·BMSCs向脂肪细胞的定向诱导分化第18页
     ·BMSCs向神经细胞的定向诱导分化第18-19页
     ·BMSCs向肝细胞的定向诱导分化第19页
     ·BMSCs向肌腱组织分化第19页
     ·BMSCs向表皮细胞分化第19页
     ·BMSCs向胰岛细胞分化第19-20页
   ·骨髓间充质干细胞的临床应用中的优点及存在的问题第20-22页
     ·应用前景第20-21页
       ·BMSCs在细胞治疗中的应用第20页
       ·BMSCs在基因治疗中的的应用第20-21页
     ·存在的问题第21-22页
试验一 兔骨髓间充质干细胞分离、培养、纯化及鉴定的研究第22-30页
 引言第22页
 1 材料与方法第22-25页
   ·试验材料第22-23页
     ·试验动物第22页
     ·主要试剂第22页
     ·主要仪器与器械第22-23页
   ·主要溶液配制第23页
     ·无钙镁磷酸缓冲液第23页
     ·胰蛋白酶消化液第23页
     ·DMEM/F-12培养液第23页
   ·试验方法第23-25页
     ·兔骨髓间充质干细胞的分离培养第23-24页
     ·细胞计数第24页
     ·兔骨髓间充质干细胞的传代第24页
     ·免疫细胞化学法鉴定兔骨髓间充质干细胞第24-25页
       ·细胞爬片的制备第24页
       ·兔骨髓间充质干细胞表面标志的鉴定第24-25页
 2 结果与分析第25-28页
   ·原代培养第25-26页
   ·传代培养第26-27页
   ·兔骨髓间充质干细胞的免疫细胞化学鉴定第27-28页
 3 讨论第28-29页
   ·兔骨髓间充质干细胞的分离培养第28-29页
   ·兔骨髓间充质干细胞的鉴定第29页
 4 小结第29-30页
试验二 DMSO体外诱导兔骨髓间充质干细胞分化为胰岛细胞的研究第30-39页
 引言第30页
 1 材料与方法第30-33页
   ·试验材料第30-31页
     ·试验对象第30页
     ·主要试剂第30-31页
     ·主要仪器与与器械第31页
   ·主要试剂配制第31-32页
     ·含1%DMSO的无血清DMEM/F-12第31页
     ·含10%FBS的H-DMEM培养液第31页
     ·双硫腙染色剂第31页
     ·0.2%TritonX-100第31-32页
     ·DAB显色液第32页
   ·试验方法第32-33页
     ·DMSO联合高糖诱导兔骨髓间充质干细胞定向分化第32页
     ·双硫腙染色第32页
     ·免疫细胞化学染色第32-33页
     ·ELISA检测第33页
 2 结果与分析第33-36页
   ·细胞形态学观察第33-34页
   ·双硫腙染色结果第34-35页
   ·免疫细胞化学检测结果第35-36页
   ·ELISA检测结果第36页
 3 讨论第36-37页
   ·BMSCs在DMSO诱导作用下的形态学变化第36-37页
   ·BMSCs在DMSO诱导作用下细胞内胰岛素分泌情况第37页
   ·BMSCs在DMSO诱导作用下分泌到培养基中的胰岛素情况第37页
 4 小结第37-39页
试验三 细胞生长因子联合诱导兔骨髓间充质干细胞分化为胰岛细胞的研究第39-47页
 引言第39-40页
 1 材料与方法第40-43页
   ·试验材料第40-41页
     ·试验对象第40页
     ·主要试剂第40页
     ·主要仪器与器械第40-41页
   ·主要试剂配置第41-42页
     ·bFGF的配制第41页
     ·EGF的配制第41页
     ·HGF的配制第41页
     ·β-cellulin的配制第41页
     ·ActivinA的配制第41页
     ·尼克酰胺的配制第41页
     ·第一阶段诱导剂的配制第41页
     ·第二阶段诱导剂的配置第41-42页
   ·试验方法第42-43页
     ·细胞生长因子联合诱导兔骨髓间充质干细胞向分化第42页
     ·双硫腙染色第42页
     ·免疫组织化学染色第42-43页
 2 结果与分析第43-45页
   ·细胞生长因子诱导兔BMSCs分化的形态学变化第43-44页
   ·双硫腙染色结果第44页
   ·免疫细胞化学检测结果第44-45页
 3 讨论第45-46页
   ·BMSCs在细胞生长因子诱导作用下的形态学变化第45-46页
   ·BMSCs在细胞生长因子诱导作用下的DTZ染色情况第46页
   ·BMSCs在细胞生长因子诱导作用下胰岛素分泌情况第46页
 4 小结第46-47页
试验四 尼克酰胺诱导兔骨髓间充质干细胞分化为胰岛细胞的研究第47-55页
 引言第47页
 1 材料与方法第47-49页
   ·试验材料第47-48页
     ·主要试剂第47页
     ·主要仪器与器械第47-48页
     ·试验对象第48页
   ·主要试剂配置第48页
     ·含1%DMSO的无血清DMEM/F-12培养液第48页
     ·含10mmol/L尼克酰胺及1%DMSO的无血清DMEM/F-12培养液第48页
     ·含10%FBS的H-DMEM培养液第48页
     ·含10mmol/L尼克酰胺的H-DMEM培养液第48页
     ·含10mmol/L尼克酰胺及10%FBS的DMEM/F-12培养液第48页
     ·胰蛋白酶消化液第48页
     ·双硫腙染色剂第48页
   ·试验方法第48-49页
 2 结果与分析第49-53页
   ·兔骨髓间充质干细胞的形态学变化第49-50页
   ·双硫腙染色结果第50-52页
   ·ELISA检测结果第52-53页
 3 讨论第53-54页
   ·BMSCs诱导后的形态学变化第53页
   ·BMSCs诱导后细胞内的胰岛素分泌情况第53页
   ·BMSCs诱导后分泌到培养基中的胰岛素情况第53-54页
 4 小结第54-55页
结论第55-56页
参考文献第56-64页
中英文缩写词表第64-65页
英文摘要第65-67页
作者简介第67页

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