| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-24页 |
| ·位点特异性重组酶的概述 | 第10-17页 |
| ·常用定位重组系统 | 第10-13页 |
| ·常用定位重组酶的作用方式 | 第13-16页 |
| ·定位重组系统的应用 | 第16-17页 |
| ·PCR技术的定义及发展简史 | 第17-19页 |
| ·PCR技术的应用 | 第17-19页 |
| ·大规模PCR的现状 | 第19页 |
| ·DNA疫苗 | 第19-23页 |
| ·DNA疫苗的研究历史 | 第20页 |
| ·DNA疫苗的优点和缺点 | 第20-21页 |
| ·质粒DNA疫苗 | 第21-22页 |
| ·线性DNA疫苗 | 第22页 |
| ·DNA疫苗的免疫途径 | 第22页 |
| ·DNA疫苗的前景 | 第22-23页 |
| ·本文的研究目标与意义 | 第23-24页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第24-37页 |
| ·材料 | 第24-30页 |
| ·菌株和质粒 | 第24-25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·试剂和酶 | 第26页 |
| ·仪器和设备 | 第26页 |
| ·主要缓冲液 | 第26-28页 |
| ·引物 | 第28-30页 |
| ·方法 | 第30-37页 |
| ·质粒DNA的小量抽提 | 第30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·大肠杆菌的常规转化 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌的快速转化 | 第31页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的诱导与表达 | 第31页 |
| ·His融合蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| ·PCR产物的T4 DNA聚合酶处理 | 第32页 |
| ·SDS-PAGE检测目的蛋白 | 第32-33页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞制备 | 第33页 |
| ·毕赤酵母的电击转化 | 第33-34页 |
| ·外源基因在毕赤酵母中的高密度诱导表达 | 第34页 |
| ·酵母总DNA的提取 | 第34-35页 |
| ·PCR产物的无水乙醇沉淀 | 第35页 |
| ·线性DNA的体外环化 | 第35页 |
| ·晡乳动物细胞系Hda的传代培养 | 第35页 |
| ·哺乳动物细胞的转染 | 第35-37页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第37-52页 |
| ·Cre重组酶基因的合成及表达载体的构建 | 第37-40页 |
| ·Cre酶基因的合成 | 第37页 |
| ·Cre酶大肠杆菌重组表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·Cre酶毕赤酵母重组表达载体的构建 | 第38-40页 |
| ·FLP重组酶基因的获得及重组表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·FLP重组酶基因的获得 | 第40页 |
| ·FLP重组酶原核表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·Cre酶和FLP酶反应底物质粒的构建 | 第41-42页 |
| ·毕赤酵母的电击转化及重组菌株的鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组酶Cre、Flp的诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第43-44页 |
| ·大规模PCR技术的探索 | 第44-46页 |
| ·大规模PCR产物功能的验证 | 第46-47页 |
| ·细胞水平的验证 | 第46-47页 |
| ·动物体内功能的验证 | 第47页 |
| ·线性DNA的体外环化 | 第47-52页 |
| ·以plox2和ha-loxp为底物的环化 | 第47-49页 |
| ·以质粒Loxp-amp-PGMG为底物的环化反应 | 第49-52页 |
| 第四部分 讨论 | 第52-54页 |
| ·大规模PCR技术 | 第52页 |
| ·位点特异性重组酶的表达与线性DNA的体外环化 | 第52-53页 |
| ·DNA疫苗 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 致谢 | 第61页 |