| 中文摘要 | 第1-18页 |
| ABSTRACT | 第18-23页 |
| 符号说明 | 第23-25页 |
| 第一章 绪论 | 第25-41页 |
| ·醛缩酶的催化机理及其分类 | 第25-27页 |
| ·醛缩酶的催化机理 | 第25-26页 |
| ·醛缩酶的分类 | 第26-27页 |
| ·磷酸二羟基丙酮(DHAP)依赖型醛缩酶 | 第27-32页 |
| ·D-果糖-1,6-二磷酸醛缩酶 | 第29-30页 |
| ·L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶 | 第30-31页 |
| ·L-墨角藻糖-1-磷酸醛缩酶 | 第31页 |
| ·D-塔格糖-1,6-二磷酸醛缩酶 | 第31-32页 |
| ·DHAP的合成 | 第32-35页 |
| ·DHAP的化学法合成 | 第32-34页 |
| ·DHAP的酶法合成 | 第34-35页 |
| ·从二羟基丙酮合成DHAP | 第34页 |
| ·从甘油合成DHAP | 第34-35页 |
| ·偶联反应 | 第35页 |
| ·丙酮酸和磷酸烯醇式丙酮酸依赖型醛缩酶 | 第35-36页 |
| ·乙醛依赖型醛缩酶 | 第36页 |
| ·甘氨酸依赖型醛缩酶 | 第36页 |
| ·二羟基丙酮依赖型醛缩酶 | 第36-37页 |
| ·稀有糖及其应用 | 第37-38页 |
| ·合成生物学 | 第38-41页 |
| ·合成生物学在代谢工程中的应用 | 第38-39页 |
| ·构建新的代谢途径 | 第38页 |
| ·对代谢途径中关键酶的改造 | 第38-39页 |
| ·多基因的表达调控 | 第39页 |
| ·合成生物学和系统生物学的结合 | 第39-41页 |
| 第二章 利用磷酸二羟基丙酮依赖型醛缩酶在体外进行稀有单糖的合成 | 第41-101页 |
| ·利用L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶(RhaD)在体外进行稀有单糖的合成 | 第41-62页 |
| ·引言 | 第41-42页 |
| ·实验材料 | 第42-44页 |
| ·实验方法 | 第44-51页 |
| ·重组质粒pET28a-rhaD的构建 | 第44-45页 |
| ·RhaD的表达和纯化 | 第45-47页 |
| ·RhaD的酶活测定 | 第47-48页 |
| ·D-山梨糖和D-阿洛酮糖的小量制备 | 第48-50页 |
| ·D-山梨糖和D-阿洛酮糖的大量制备 | 第50-51页 |
| ·L-果糖的大量制备 | 第51页 |
| ·分析方法 | 第51页 |
| ·实验结果与讨论 | 第51-61页 |
| ·重组质粒pET28a-rhaD的构建 | 第51-52页 |
| ·RhaD醛缩酶的表达与纯化 | 第52-53页 |
| ·RhaD的酶活测定 | 第53-54页 |
| ·D-山梨糖和D-阿洛酮糖的小量制备 | 第54-57页 |
| ·D-山梨糖和D-阿洛酮糖的大量制备 | 第57-60页 |
| ·L-果糖的大量制备 | 第60-61页 |
| ·小结 | 第61-62页 |
| ·利用L-墨角藻糖-1-磷酸醛缩酶(FucA)在体外进行稀有单糖的合成 | 第62-78页 |
| ·引言 | 第62页 |
| ·实验材料 | 第62-63页 |
| ·实验方法 | 第63-68页 |
| ·重组质粒pET28a-fucA_(E.coli),pET28a-fucA_(T.HB8)以及pET28a-yqaB的构建 | 第63-66页 |
| ·FucA_(E.coli)(FucA_(T.HB8))醛缩酶及YqaB磷酸酶的表达和纯化 | 第66页 |
| ·FucA_(E.coli)(FucA_(T.HB8))醛缩酶及YqaB磷酸酶的酶活测定 | 第66-67页 |
| ·D-阿洛酮糖的大量制备 | 第67页 |
| ·L-果糖和L-塔格糖的大量制备 | 第67-68页 |
| ·分析方法 | 第68页 |
| ·结果与讨论 | 第68-77页 |
| ·重组质粒pET28a-fucA_(E.coli,)pET28a-fucA_(T.HB8)和pET28a-yqaB的构建 | 第68-69页 |
| ·FucA_(E.coli),FucA_(T.HB8)以及YqaB的表达和纯化 | 第69-71页 |
| ·FucA_(E.coil)FucA_(T.HB8)以及YqaB的酶活测定 | 第71-73页 |
| ·D-阿洛酮糖的大量制备 | 第73-75页 |
| ·L-果糖和L-塔格糖的大量制备 | 第75-77页 |
| ·小结 | 第77-78页 |
| ·利用D-果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(FruA)在体外合成各种酮糖 | 第78-92页 |
| ·引言 | 第78页 |
| ·实验材料 | 第78-79页 |
| ·实验方法 | 第79-81页 |
| ·重组质粒pET28a-fda的构建 | 第79-80页 |
| ·FruA_(S.car)的表达和纯化 | 第80页 |
| ·FruA_(S.car)的酶活测定 | 第80页 |
| ·D-果糖和L-山梨糖的大量制备 | 第80-81页 |
| ·其它多种酮糖的大量制备 | 第81页 |
| ·结果与讨论 | 第81-91页 |
| ·重组质粒pET28a-fda的构建 | 第81-82页 |
| ·FruA_(S.car)的表达和纯化 | 第82-83页 |
| ·FruA_(S.car)的酶活测定 | 第83-84页 |
| ·D-果糖和L-山梨糖的大量制备 | 第84-86页 |
| ·其他多种酮糖的大量制备 | 第86-91页 |
| ·小结 | 第91-92页 |
| ·利用D-塔格糖-1,6-二磷酸醛缩酶在体外进行稀有单糖的合成 | 第92-98页 |
| ·引言 | 第92页 |
| ·实验材料 | 第92-93页 |
| ·实验方法 | 第93页 |
| ·重组质粒pET28a-agaY,pET28a-gatY,pET28a-1acD的构建 | 第93页 |
| ·TagA的表达和纯化 | 第93页 |
| ·TagA的酶活测定 | 第93页 |
| ·结果与讨论 | 第93-98页 |
| ·重组质粒pET28a-agaY,pET28a-gatY,pET28a-1acD的构建 | 第93-95页 |
| ·TagA的表达和纯化 | 第95-97页 |
| ·TagA的酶活测定 | 第97-98页 |
| ·小结 | 第98页 |
| ·本章小结 | 第98-101页 |
| 第三章 利用磷酸二羟基丙酮依赖型醛缩酶在大肠杆菌进行稀有单糖的合成 | 第101-137页 |
| ·引言 | 第101-107页 |
| ·利用L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶(RhaD)在大肠杆菌内合成D-山梨糖和D-阿洛酮糖 | 第107-121页 |
| ·引言 | 第107-108页 |
| ·实验材料 | 第108-109页 |
| ·实验方法 | 第109-113页 |
| ·利用RhaD醛缩酶、yqaB磷酸酶“一锅法”合成D-山梨糖和D-阿洛酮糖 | 第109-110页 |
| ·重组质粒pSK-rhaD-yqaB的构建 | 第110-112页 |
| ·重组质粒pCDF-rhaD-yqaB的构建 | 第112页 |
| ·小量发酵制备D-山梨糖和D-阿洛酮糖 | 第112-113页 |
| ·大量发酵制备D-山梨糖和D-阿洛酮糖 | 第113页 |
| ·发酵液中产物的分离纯化 | 第113页 |
| ·分析方法 | 第113-114页 |
| ·结果和讨论 | 第114-120页 |
| ·利用RhaD醛缩酶,yqaB磷酸酶“一锅法”合成D-山梨糖和D-阿洛酮糖 | 第114-115页 |
| ·重组质粒pSK-rhaD-yqaB的构建 | 第115-117页 |
| ·重组质粒pCDF-rhaD-yqaB的构建 | 第117-118页 |
| ·小量发酵制备D-山梨糖和D-阿洛酮糖 | 第118-120页 |
| ·大量发酵制备D-山梨糖和D-阿洛酮糖 | 第120页 |
| ·小结 | 第120-121页 |
| ·利用来源于嗜热栖热菌HB8的L-墨角藻糖-1-磷酸醛缩酶(FucA_(T.HB8))在大肠杆菌内合成D-阿洛酮糖 | 第121-126页 |
| ·引言 | 第121页 |
| ·实验材料 | 第121-122页 |
| ·实验方法 | 第122-123页 |
| ·重组质粒pCDF-fucA_(T.HB8-yqaB)的构建 | 第122-123页 |
| ·大量发酵制备D-阿洛酮糖 | 第123页 |
| ·分析方法 | 第123页 |
| ·结果和讨论 | 第123-125页 |
| ·重组质粒pCDF-fucA_(T.HB8-yqa)B的构建 | 第123-124页 |
| ·大量发酵制备D-阿洛酮糖 | 第124-125页 |
| ·小结 | 第125-126页 |
| ·利用来源于肉葡萄球菌的D-果糖1,6-二磷酸醛缩酶(FruA_(S.car))在大肠杆菌内合成D-果糖和其他酮糖 | 第126-135页 |
| ·引言 | 第126页 |
| ·实验材料 | 第126-127页 |
| ·实验方法 | 第127-128页 |
| ·重组质粒pCDF-fda-yqaB的构建 | 第127页 |
| ·以D-甘油醛为受体大量发酵制备D-果糖 | 第127页 |
| ·以丙醛(丁醛)为醛受体大量发酵制备酮糖 | 第127-128页 |
| ·同位素标记实验 | 第128页 |
| ·分析方法 | 第128页 |
| ·结果和讨论 | 第128-134页 |
| ·重组质粒pCDF-fda-yqaB的构建 | 第128-129页 |
| ·以D-甘油醛为受体大量发酵制备D-果糖 | 第129-130页 |
| ·以丙醛(丁醛)为醛受体大量发酵制备酮糖 | 第130-133页 |
| ·同位素标记实验 | 第133-134页 |
| ·小结 | 第134-135页 |
| ·本章小结 | 第135-137页 |
| 第四章 总结与展望 | 第137-145页 |
| ·总结 | 第137-140页 |
| ·展望 | 第140-145页 |
| 附图 | 第145-155页 |
| 参考文献 | 第155-167页 |
| 致谢 | 第167-169页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及获奖情况 | 第169-170页 |
| 外文论文 | 第170-171页 |
| 附件 | 第171-195页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第195页 |
