| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第1章 绪论 | 第9-25页 |
| ·蛇毒概述 | 第9页 |
| ·SVSPs研究概述 | 第9-14页 |
| ·SVSPs的分类及生物活性 | 第9-13页 |
| ·SVSPs的分子生物学研究 | 第13-14页 |
| ·SVSPs的应用前景 | 第14页 |
| ·巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)表达系统研究概述 | 第14-24页 |
| ·巴斯德毕赤酵母简介 | 第14-16页 |
| ·毕赤酵母表达系统的构成 | 第16-18页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中表达的影响因素 | 第18-23页 |
| ·毕赤酵母表达系统的应用前景及展望 | 第23-24页 |
| ·本论文的选题依据和研究内容 | 第24-25页 |
| 第2章 真核表达载体的构建 | 第25-35页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·菌种及质粒 | 第25页 |
| ·实验试剂 | 第25-26页 |
| ·实验仪器 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-31页 |
| ·引物设计及PCR扩增 | 第26-27页 |
| ·PCR产物回收及双酶切 | 第27-28页 |
| ·真核表达载体的双酶切及回收 | 第28页 |
| ·连接 | 第28-29页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞制备 | 第29页 |
| ·转化 | 第29-30页 |
| ·质粒的小量制备 | 第30页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第30-31页 |
| ·实验结果 | 第31-35页 |
| ·PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·载体双酶切 | 第32-33页 |
| ·重组载体的构建及鉴定 | 第33-35页 |
| 第3章 重组载体电转化毕赤酵母及高抗性转化子的筛选及阳性克隆的鉴定 | 第35-41页 |
| ·实验材料 | 第35页 |
| ·菌种及质粒 | 第35页 |
| ·实验试剂 | 第35页 |
| ·实验仪器 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-38页 |
| ·重组载体线性化 | 第35-36页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第36页 |
| ·电转化 | 第36-37页 |
| ·高抗性转化子的筛选 | 第37页 |
| ·整型鉴定 | 第37页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第37-38页 |
| ·实验结果 | 第38-41页 |
| ·线性化载体 | 第38页 |
| ·高抗性菌株的筛选 | 第38-39页 |
| ·GS115宿主菌整型结果 | 第39-40页 |
| ·PCR筛选阳性克隆 | 第40-41页 |
| 第4章 蛋白的初步表达及表达条件优化和生物活性的检测 | 第41-49页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·宿主菌种 | 第41页 |
| ·实验试剂 | 第41页 |
| ·实验仪器 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-45页 |
| ·外源蛋白的初步诱导表达 | 第41-44页 |
| ·表达条件的优化 | 第44页 |
| ·生物活性的初步检测 | 第44-45页 |
| ·实验结果 | 第45-49页 |
| ·GS115宿主菌表达情况分析 | 第45-47页 |
| ·KM71宿主菌表达情况分析 | 第47-48页 |
| ·酰胺水解酶活性的定性检测 | 第48-49页 |
| 第5章 讨论 | 第49-55页 |
| ·目的基因的特点 | 第49页 |
| ·真核表达载体的选择 | 第49页 |
| ·宿主菌的选择 | 第49-50页 |
| ·重组载体的线性化 | 第50-51页 |
| ·转化方式的选择 | 第51页 |
| ·酵母基因组提取方法的选择 | 第51-52页 |
| ·表达条件的优化 | 第52-53页 |
| ·GS115和KM71表达情况的比较 | 第53-54页 |
| ·活性的初步检测 | 第54-55页 |
| 第6章 小结 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 附录 | 第65-71页 |
| 致谢 | 第71-73页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第73页 |
