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高脂饲料诱导的肥胖鼠肠道内硫酸盐还原菌的定量检测与分离鉴定

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-14页
第一章 绪论第14-28页
   ·硫酸盐还原菌(Sulfate-reducing Bacteria,SRB)综述第14-18页
     ·SRB 的定义、分类与分布第14-15页
       ·SRB 的定义与分类第14页
       ·SRB 的分布第14-15页
     ·SRB 的代谢第15-17页
       ·电子供体代谢第15-16页
       ·电子受体代谢第16-17页
     ·SRB 的检测及多样性研究方法第17-18页
   ·肥胖、代谢综合征(Metabolic Syndrome,MS)与 SRB第18-24页
     ·肥胖与 MS第18-19页
     ·肠道菌群的结构第19-20页
     ·肠道菌群的功能第20-21页
     ·肠道菌群与肥胖、MS第21-22页
     ·SRB 与肥胖、MS第22页
     ·硫化氢(H2S)对结肠上皮细胞的影响第22-24页
   ·本研究所用分子生态学技术介绍第24-26页
     ·荧光定量 PCR 技术第24-25页
       ·SYBR green I 定量第24页
       ·荧光探针定量第24-25页
     ·细菌的菌株多样性分析方法第25-26页
       ·ARDRA 技术第25页
       ·ERIC-PCR 指纹图谱技术第25-26页
   ·课题总思路第26-28页
第二章 实验鼠肠道内 SRB 的定量检测第28-42页
 引言第28-29页
   ·材料与方法第29-35页
     ·动物实验第29-30页
       ·高脂饲料诱导的肥胖大鼠实验第29页
       ·高脂饲料诱导的肥胖小鼠实验第29-30页
     ·粪样菌群总 DNA 提取第30-32页
       ·Inv iMag Stool DNA Kit 提取粪样总 DNA第30-31页
       ·Bead beater 法提取粪样总 DNA第31-32页
     ·DNA 浓度测定第32-33页
     ·粪样菌群总 DNA 内 SRB 的定量检测第33-35页
       ·粪样菌群总 DNA 内 SRB 的特异性实时定量 PCR第33-34页
       ·粪样菌群总 DNA 内 16S rRNA 基因片段的实时定量 PCR第34-35页
   ·结果第35-40页
     ·动物实验第35-36页
       ·高脂饲料诱导的肥胖大鼠实验第35-36页
       ·高脂饲料诱导的肥胖小鼠实验第36页
     ·定量质粒标准品的制备第36页
     ·高脂饲料诱导的肥胖大鼠肠道内 SRB 的定量检测第36-38页
       ·单位质量粪便 DNA 内 SRB 的数量(aprA 基因拷贝数)变化第36-37页
       ·大鼠肠道内 SRB 数量占总菌数量的比例变化第37-38页
     ·高脂饲料诱导的肥胖小鼠肠道内 SRB 的定量检测第38-40页
       ·单位质量粪便 DNA 内 SRB 的数量(aprA 基因拷贝数)变化第38-39页
       ·小鼠肠道内 SRB 数量占总菌数量的比例变化第39-40页
   ·讨论第40-41页
   ·本章小结第41-42页
第三章 C57BL/6J 小鼠肠道内 SRB 的分离鉴定第42-58页
 引言第42页
   ·材料与方法第42-49页
     ·样品来源第42-43页
     ·SRB 的富集培养与分离第43页
       ·富集培养第43页
       ·富集液的稀释涂布第43页
       ·菌株挑取与划线纯化第43页
       ·菌种保存第43页
     ·纯菌分离物的基因组总 DNA 提取第43页
     ·纯菌分离物的 aprA 片段扩增第43-44页
     ·纯菌分离物的 16S rRNA 基因片段扩增第44页
     ·纯菌分离物 16S rRNA 基因扩增产物的 ARDRA 分型第44-45页
     ·纯菌分离物全基因组 DNA 的 ERIC-PCR 指纹图谱分析第45页
     ·ERIC 代表型的 16S rRNA 基因片段测序分析第45-47页
       ·16S rRNA 基因片段克隆测序第45-47页
       ·16S rRNA 基因序列分析第47页
     ·鼠源 SRB 菌株 FB8 的利福平抗性筛选第47-49页
       ·FB8 菌悬液的制备第47-48页
       ·抗性菌株的筛选与分子鉴定第48页
       ·C57BL/6J 鼠源 SRB 对利福平抗性的验证第48-49页
   ·结果第49-55页
     ·小鼠肠道内 SRB 的分离培养第49-50页
       ·粪悬液内 SRB 的富集培养第49-50页
       ·SRB 富集液的稀释涂布、划线纯化与菌种保存第50页
     ·小鼠肠道内 SRB 纯菌分离物的分子鉴定第50-54页
       ·SRB 纯菌分离物的 aprA 基因扩增第50页
       ·SRB 纯菌分离物的 16S rRNA 基因片段扩增第50页
       ·SRB 纯菌分离物 16S rRNA 基因片段的 ARDRA 分型第50-51页
       ·SRB 纯菌分离物的 ERIC-PCR 分型第51-52页
       ·SRB 纯菌分离物 16S rRNA 基因片段的序列分析结果第52-54页
     ·FB8 菌株的利福平抗性筛选第54-55页
       ·抗性菌株的筛选与分子鉴定第54页
       ·C57BL/6J 鼠源 SRB 对利福平抗性的验证第54-55页
   ·讨论第55-57页
     ·小鼠肠道内 SRB 的分离培养第55-56页
     ·鼠源 SRB 菌株 FB8 的利福平抗性筛选第56-57页
   ·本章小结第57-58页
第四章 结束语第58-59页
   ·主要工作与创新点第58页
   ·后续研究工作第58-59页
参考文献第59-70页
附章 鼠源 SRB 菌株 FB8 的小檗碱抑菌实验第70-74页
 引言第70页
   ·材料与方法第70-71页
     ·菌株来源第70页
     ·小檗碱母液的配制与稀释剂的选择第70页
     ·FB8 的小檗碱抑菌实验第70-71页
       ·菌液涂布含不同浓度小檗碱的 Postgate 改进培养基平板第70-71页
       ·抑菌圈实验第71页
   ·结果第71-72页
   ·讨论第72页
   ·本章小结第72-73页
   ·参考文献第73-74页
附录 1 试剂、缓冲液与培养基配方第74-78页
附录 2 仪器设备第78-79页
附录 3 缩写与全称第79-81页
附录 4 SRB 实时定量 PCR 数据汇总第81-86页
附录 5 已测序的 SRB 菌株 16S 核糖体 RNA 基因序列第86-96页
致谢第96-97页
攻读硕士学位期间已发表或录用的论文第97页

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