摘要 | 第1-7页 |
ABSTRACT | 第7-14页 |
第一章 绪论 | 第14-28页 |
·硫酸盐还原菌(Sulfate-reducing Bacteria,SRB)综述 | 第14-18页 |
·SRB 的定义、分类与分布 | 第14-15页 |
·SRB 的定义与分类 | 第14页 |
·SRB 的分布 | 第14-15页 |
·SRB 的代谢 | 第15-17页 |
·电子供体代谢 | 第15-16页 |
·电子受体代谢 | 第16-17页 |
·SRB 的检测及多样性研究方法 | 第17-18页 |
·肥胖、代谢综合征(Metabolic Syndrome,MS)与 SRB | 第18-24页 |
·肥胖与 MS | 第18-19页 |
·肠道菌群的结构 | 第19-20页 |
·肠道菌群的功能 | 第20-21页 |
·肠道菌群与肥胖、MS | 第21-22页 |
·SRB 与肥胖、MS | 第22页 |
·硫化氢(H2S)对结肠上皮细胞的影响 | 第22-24页 |
·本研究所用分子生态学技术介绍 | 第24-26页 |
·荧光定量 PCR 技术 | 第24-25页 |
·SYBR green I 定量 | 第24页 |
·荧光探针定量 | 第24-25页 |
·细菌的菌株多样性分析方法 | 第25-26页 |
·ARDRA 技术 | 第25页 |
·ERIC-PCR 指纹图谱技术 | 第25-26页 |
·课题总思路 | 第26-28页 |
第二章 实验鼠肠道内 SRB 的定量检测 | 第28-42页 |
引言 | 第28-29页 |
·材料与方法 | 第29-35页 |
·动物实验 | 第29-30页 |
·高脂饲料诱导的肥胖大鼠实验 | 第29页 |
·高脂饲料诱导的肥胖小鼠实验 | 第29-30页 |
·粪样菌群总 DNA 提取 | 第30-32页 |
·Inv iMag Stool DNA Kit 提取粪样总 DNA | 第30-31页 |
·Bead beater 法提取粪样总 DNA | 第31-32页 |
·DNA 浓度测定 | 第32-33页 |
·粪样菌群总 DNA 内 SRB 的定量检测 | 第33-35页 |
·粪样菌群总 DNA 内 SRB 的特异性实时定量 PCR | 第33-34页 |
·粪样菌群总 DNA 内 16S rRNA 基因片段的实时定量 PCR | 第34-35页 |
·结果 | 第35-40页 |
·动物实验 | 第35-36页 |
·高脂饲料诱导的肥胖大鼠实验 | 第35-36页 |
·高脂饲料诱导的肥胖小鼠实验 | 第36页 |
·定量质粒标准品的制备 | 第36页 |
·高脂饲料诱导的肥胖大鼠肠道内 SRB 的定量检测 | 第36-38页 |
·单位质量粪便 DNA 内 SRB 的数量(aprA 基因拷贝数)变化 | 第36-37页 |
·大鼠肠道内 SRB 数量占总菌数量的比例变化 | 第37-38页 |
·高脂饲料诱导的肥胖小鼠肠道内 SRB 的定量检测 | 第38-40页 |
·单位质量粪便 DNA 内 SRB 的数量(aprA 基因拷贝数)变化 | 第38-39页 |
·小鼠肠道内 SRB 数量占总菌数量的比例变化 | 第39-40页 |
·讨论 | 第40-41页 |
·本章小结 | 第41-42页 |
第三章 C57BL/6J 小鼠肠道内 SRB 的分离鉴定 | 第42-58页 |
引言 | 第42页 |
·材料与方法 | 第42-49页 |
·样品来源 | 第42-43页 |
·SRB 的富集培养与分离 | 第43页 |
·富集培养 | 第43页 |
·富集液的稀释涂布 | 第43页 |
·菌株挑取与划线纯化 | 第43页 |
·菌种保存 | 第43页 |
·纯菌分离物的基因组总 DNA 提取 | 第43页 |
·纯菌分离物的 aprA 片段扩增 | 第43-44页 |
·纯菌分离物的 16S rRNA 基因片段扩增 | 第44页 |
·纯菌分离物 16S rRNA 基因扩增产物的 ARDRA 分型 | 第44-45页 |
·纯菌分离物全基因组 DNA 的 ERIC-PCR 指纹图谱分析 | 第45页 |
·ERIC 代表型的 16S rRNA 基因片段测序分析 | 第45-47页 |
·16S rRNA 基因片段克隆测序 | 第45-47页 |
·16S rRNA 基因序列分析 | 第47页 |
·鼠源 SRB 菌株 FB8 的利福平抗性筛选 | 第47-49页 |
·FB8 菌悬液的制备 | 第47-48页 |
·抗性菌株的筛选与分子鉴定 | 第48页 |
·C57BL/6J 鼠源 SRB 对利福平抗性的验证 | 第48-49页 |
·结果 | 第49-55页 |
·小鼠肠道内 SRB 的分离培养 | 第49-50页 |
·粪悬液内 SRB 的富集培养 | 第49-50页 |
·SRB 富集液的稀释涂布、划线纯化与菌种保存 | 第50页 |
·小鼠肠道内 SRB 纯菌分离物的分子鉴定 | 第50-54页 |
·SRB 纯菌分离物的 aprA 基因扩增 | 第50页 |
·SRB 纯菌分离物的 16S rRNA 基因片段扩增 | 第50页 |
·SRB 纯菌分离物 16S rRNA 基因片段的 ARDRA 分型 | 第50-51页 |
·SRB 纯菌分离物的 ERIC-PCR 分型 | 第51-52页 |
·SRB 纯菌分离物 16S rRNA 基因片段的序列分析结果 | 第52-54页 |
·FB8 菌株的利福平抗性筛选 | 第54-55页 |
·抗性菌株的筛选与分子鉴定 | 第54页 |
·C57BL/6J 鼠源 SRB 对利福平抗性的验证 | 第54-55页 |
·讨论 | 第55-57页 |
·小鼠肠道内 SRB 的分离培养 | 第55-56页 |
·鼠源 SRB 菌株 FB8 的利福平抗性筛选 | 第56-57页 |
·本章小结 | 第57-58页 |
第四章 结束语 | 第58-59页 |
·主要工作与创新点 | 第58页 |
·后续研究工作 | 第58-59页 |
参考文献 | 第59-70页 |
附章 鼠源 SRB 菌株 FB8 的小檗碱抑菌实验 | 第70-74页 |
引言 | 第70页 |
·材料与方法 | 第70-71页 |
·菌株来源 | 第70页 |
·小檗碱母液的配制与稀释剂的选择 | 第70页 |
·FB8 的小檗碱抑菌实验 | 第70-71页 |
·菌液涂布含不同浓度小檗碱的 Postgate 改进培养基平板 | 第70-71页 |
·抑菌圈实验 | 第71页 |
·结果 | 第71-72页 |
·讨论 | 第72页 |
·本章小结 | 第72-73页 |
·参考文献 | 第73-74页 |
附录 1 试剂、缓冲液与培养基配方 | 第74-78页 |
附录 2 仪器设备 | 第78-79页 |
附录 3 缩写与全称 | 第79-81页 |
附录 4 SRB 实时定量 PCR 数据汇总 | 第81-86页 |
附录 5 已测序的 SRB 菌株 16S 核糖体 RNA 基因序列 | 第86-96页 |
致谢 | 第96-97页 |
攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 | 第97页 |