| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-12页 |
| 目录 | 第12-14页 |
| 缩略词简表 | 第14-16页 |
| 论文正文 | 第16-65页 |
| 第一章 前言 | 第16-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-35页 |
| 1 材料 | 第22-25页 |
| ·细胞 | 第22页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第22-23页 |
| ·试剂 | 第23-24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| 2 方法 | 第25-35页 |
| ·真核表达载体构建 | 第25-28页 |
| ·目的片段的扩增 | 第25-26页 |
| ·胶回收目的片段 | 第26页 |
| ·亚克隆目的片段至T-A载体 | 第26页 |
| ·双酶切载体pcDNA3.1(+)和目的片段 | 第26-27页 |
| ·用T_4DNA Ligase连接目的片段及载体 | 第27页 |
| ·连接产物的转化 | 第27-28页 |
| ·挑选克隆,提取质粒 | 第28页 |
| ·双酶切鉴定及DNA测序 | 第28页 |
| ·培养细胞的蛋白质制备 | 第28-30页 |
| ·制备用于Western blot的总蛋白质 | 第28-29页 |
| ·培养细胞的胞浆及胞核蛋白制备 | 第29页 |
| ·BCA测蛋白浓度 | 第29-30页 |
| ·Western Blot检测Wnt通路下游靶分子的表达 | 第30页 |
| ·RT-PCR检测NGX6在各种细胞中的表达 | 第30-32页 |
| ·细胞总RNA的抽提 | 第30-31页 |
| ·用DNase-Ⅰ消化RNA中痕量DNA | 第31页 |
| ·差异RT-PCR | 第31-32页 |
| ·基因的瞬时转染 | 第32-33页 |
| ·TOPflash荧光素酶报告质粒测定 | 第33-35页 |
| 第三章 结果 | 第35-54页 |
| 第一部分 NGX6对Wnt/β-catenin信号通路的下游靶分子的影响 | 第35-47页 |
| 1.NGX6转染对Wnt/β-catenin信号通路下游靶分子的影响 | 第35-38页 |
| ·pCMV-myc-NGX6及TCF-4荧光素酶报告质粒的酶切及测序鉴定 | 第35-36页 |
| ·NGX6转染对Wnt/β-catenin信号通路下游靶分子的影响 | 第36-38页 |
| 2.抑制Wnt/β-catenin信号通路对NGX6表达的影响 | 第38-47页 |
| ·构建真核表达载体pcDNA3.1-LEF1~(DN) | 第38-42页 |
| ·Topflash luciferase assay检测β-catenin/TCF/LEF转录因子的活性 | 第42-43页 |
| ·Western Blotting检测c-Jun、cyclinD1、c-myc的表达 | 第43-46页 |
| ·RT-PCR检测Wnt通路被抑制后NGX6的表达 | 第46-47页 |
| 第二部分 NGX6与β-catenin/TCF/LEF转录活化之间的关系 | 第47-54页 |
| 1.构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-β-catenin(WT) | 第47-49页 |
| 2.Topflash luciferase assay检测NGX6对β-catenin/TCF/LEF转录活化的影响 | 第49-52页 |
| ·转染NGX6和外源β-catenin | 第49-50页 |
| ·转染NGX6,无外源β-catenin | 第50-52页 |
| 3.Western Blotting检测NGX6转染前后SW620细胞及COS-7核内β-catenin,TCF-4的表达 | 第52-54页 |
| 第四章 讨论 | 第54-65页 |
| 第一部分 NGX6对Wnt信号通路的下游靶分子的影响 | 第55-59页 |
| 第二部 NGX6与β-catenin/TCF/LEF转录活化之间的关系 | 第59-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 综述(一) Wnt/Beta-catenin/Tcf信号传导通路——大肠癌癌变的一条关键通路 | 第74-92页 |
| 综述(二) 大肠癌的分子遗传学研究进展 | 第92-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第111页 |
