| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-19页 |
| 缩写词 | 第19-21页 |
| 第1章 综述 | 第21-63页 |
| ·草坪草遗传转化研究进展概述 | 第21-36页 |
| ·草坪草组织培养和再生体系的建立 | 第21-25页 |
| ·外植体的来源 | 第21-22页 |
| ·愈伤组织的诱导 | 第22页 |
| ·悬浮细胞培养 | 第22-23页 |
| ·原生质体培养 | 第23-24页 |
| ·植株的再生培养 | 第24-25页 |
| ·草坪草基因转化体系的建立 | 第25-31页 |
| ·将DNA 直接导入原生质体 | 第25页 |
| ·碳硅纤维介导的转化 | 第25页 |
| ·基因枪法 | 第25-29页 |
| ·农杆菌介导的转化 | 第29-31页 |
| ·转基因草坪草的筛选和鉴定 | 第31-34页 |
| ·选择系统的建立 | 第31-32页 |
| ·报告基因的表达检测 | 第32-33页 |
| ·转基因草坪草的分子生物学检测 | 第33页 |
| ·转基因草坪草的性状鉴定 | 第33-34页 |
| ·其他转基因植物鉴定方法 | 第34页 |
| ·转基因技术在草坪草品种改良中的应用 | 第34-36页 |
| ·草坪草抗除草剂基因工程 | 第34页 |
| ·草坪草抗病虫基因工程 | 第34-35页 |
| ·草坪草抗逆基因工程 | 第35页 |
| ·调控花粉过敏原 | 第35页 |
| ·调控花期 | 第35-36页 |
| ·多年生黑麦草遗传转化研究进展概述 | 第36-40页 |
| ·多年生黑麦草组织培养和再生体系的建立 | 第36-38页 |
| ·外植体的选择 | 第36-37页 |
| ·悬浮培养体系的建立 | 第37页 |
| ·愈伤组织的诱导与分化 | 第37-38页 |
| ·基因型的影响 | 第38页 |
| ·多年生黑麦草的遗传转化 | 第38-40页 |
| ·基因枪转化法 | 第38-39页 |
| ·农杆菌介导转化法 | 第39页 |
| ·其它转化方法的应用 | 第39-40页 |
| ·本研究涉及到的相关基因概述 | 第40-47页 |
| ·DRE81A 基因的发现、改造以及功能的研究进展 | 第40-44页 |
| ·AP2/EREBP 转录因子家族 | 第40-41页 |
| ·DREB 转录因子与抗逆性 | 第41-44页 |
| ·BADH、CMO 基因的发现、改造及其功能的研究进展 | 第44-47页 |
| ·胆碱单氧化酶蛋白的分离纯化和特性研究 | 第45页 |
| ·胆碱单氧化酶的基因工程 | 第45-46页 |
| ·甜菜碱醛脱氢酶蛋白的分离纯化和特性研究 | 第46页 |
| ·甜菜碱醛脱氢酶的基因工程 | 第46-47页 |
| ·转基因植物的遗传稳定性 | 第47-49页 |
| ·转基因植物中外源基因的丢失 | 第47-48页 |
| ·转基因植物中外源基因的次生效应 | 第48页 |
| ·转基因植物中的基因沉默 | 第48页 |
| ·转基因生物中外源基因的逃逸 | 第48页 |
| ·外源基因在后代中的遗传多样性 | 第48-49页 |
| ·转基因植物的安全性 | 第49-59页 |
| ·转基因植物的应用现状及生物安全评价的必要性 | 第49-51页 |
| ·生物安全的概念和忧患 | 第49页 |
| ·转基因植物的应用现状 | 第49-50页 |
| ·转基因植物安全性评价的必要性 | 第50-51页 |
| ·国际社会对转基因生物安全的态度与规则 | 第51-53页 |
| ·科学界对转基因植物的态度 | 第51-52页 |
| ·部分国家、国家联盟和地区的转基因植物安全性管理 | 第52-53页 |
| ·中国转基因植物的管理办法 | 第53-55页 |
| ·中国科学界对转基因植物的争议 | 第54页 |
| ·中国转基因植物安全性管理的原则 | 第54页 |
| ·中国转基因植物安全评价方法的主要内容 | 第54-55页 |
| ·安全控制措施 | 第55页 |
| ·外源基因对受体植物的影响 | 第55-56页 |
| ·标记基因对受体植物的影响 | 第55页 |
| ·外源基因对受体植物的影响 | 第55-56页 |
| ·转基因植物的生态安全性 | 第56-58页 |
| ·转基因植物的杂草化问题 | 第56页 |
| ·农田生态系统的潜在风险 | 第56页 |
| ·自然生态系统的潜在风险 | 第56-57页 |
| ·基因污染和转基因逃逸 | 第57页 |
| ·可能诱发害虫和野草抗性 | 第57-58页 |
| ·可能诱发自然生物种群改变 | 第58页 |
| ·转基因植物的健康安全性 | 第58-59页 |
| ·毒性 | 第58-59页 |
| ·过敏性反应 | 第59页 |
| ·抗药性 | 第59页 |
| ·有益成分 | 第59页 |
| ·免疫力 | 第59页 |
| ·本研究的意义和内容 | 第59-63页 |
| ·选题背景和研究意义 | 第59-60页 |
| ·研究内容 | 第60-61页 |
| ·技术路线 | 第61-63页 |
| 第2章 多年生黑麦草高频再生体系的建立 | 第63-76页 |
| ·材料与方法 | 第63-65页 |
| ·植物材料 | 第63页 |
| ·外植体的消毒与接种 | 第63页 |
| ·培养基 | 第63-64页 |
| ·愈伤组织的诱导与继代培养 | 第64页 |
| ·愈伤组织的分化培养与移栽 | 第64页 |
| ·试验设计 | 第64-65页 |
| ·外植体的选择 | 第64页 |
| ·基因型对愈伤诱导和分化的影响 | 第64页 |
| ·植物激素对愈伤诱导的影响 | 第64页 |
| ·酸水解酪蛋白对愈伤组织诱导的影响 | 第64页 |
| ·植物激素对植株分化的影响 | 第64-65页 |
| ·数据统计 | 第65页 |
| ·结果与分析 | 第65-72页 |
| ·外植体对愈伤诱导的影响 | 第65-66页 |
| ·D、J 不同外植体愈伤诱导的比较 | 第65-66页 |
| ·七个品种不同外植体愈伤诱导的比较 | 第66页 |
| ·基因型对愈伤组织诱导及分化的影响 | 第66-67页 |
| ·七个品种愈伤诱导的比较 | 第66-67页 |
| ·品种间综合比较 | 第67页 |
| ·植物激素对愈伤诱导的影响 | 第67-70页 |
| ·植物激素对D、J 愈伤诱导的影响 | 第67-69页 |
| ·植物激素对A、Ds 愈伤诱导的影响 | 第69-70页 |
| ·酸水解酪蛋白对愈伤诱导的影响 | 第70页 |
| ·植物激素对植株分化的影响 | 第70-72页 |
| ·D、J 植株再生正交试验 | 第70-71页 |
| ·A、Ds 植株再生的正交试验 | 第71-72页 |
| ·结论与讨论 | 第72-74页 |
| ·外植体的选择 | 第72页 |
| ·基因型对愈伤组织诱导及分化的影响 | 第72-73页 |
| ·愈伤组织的诱导和继代 | 第73页 |
| ·愈伤组织的再生培养 | 第73-74页 |
| ·微量元素及有机附加物的影响 | 第74页 |
| ·小结 | 第74-76页 |
| 第3章 多年生黑麦草的遗传转化 | 第76-96页 |
| ·材料与方法 | 第76-83页 |
| ·受体植物材料 | 第76页 |
| ·表达载体 | 第76页 |
| ·培养基 | 第76-77页 |
| ·质粒DNA 的制备 | 第77-79页 |
| ·大肠杆菌受体细菌的培养 | 第77-78页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第78页 |
| ·质粒的转化 | 第78页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第78-79页 |
| ·DNA 浓度和纯度检测 | 第79页 |
| ·重组质粒由大肠杆菌向农杆菌中转移 | 第79页 |
| ·土壤农杆菌感受态的制备 | 第79页 |
| ·农杆菌的转化 | 第79页 |
| ·阳性农杆菌的鉴定及用于转化的阳性农杆菌的制备 | 第79页 |
| ·筛选系统的建立 | 第79页 |
| ·基因枪法转化 | 第79-81页 |
| ·金粉DNA 复合体的制备 | 第79-80页 |
| ·受体材料的处理 | 第80页 |
| ·受体材料的轰击 | 第80页 |
| ·基因枪转化体系各影响因素的确定 | 第80-81页 |
| ·gus 基因表达的检测 | 第81页 |
| ·农杆菌介导法转化 | 第81-82页 |
| ·农杆菌的培养与活化 | 第81-82页 |
| ·抑菌素浓度的确定 | 第82页 |
| ·供体菌株培养 | 第82页 |
| ·侵染 | 第82页 |
| ·抗性筛选和植株再生 | 第82-83页 |
| ·基因枪转化后的过度、筛选培养和植株再生 | 第82页 |
| ·农杆菌介导转化后的筛选培养和植株再生 | 第82-83页 |
| ·抗性苗的生根培养和移栽 | 第83页 |
| ·数据统计 | 第83页 |
| ·结果与分析 | 第83-90页 |
| ·筛选系统的建立 | 第83-84页 |
| ·gus 基因的瞬时和稳定表达 | 第84-85页 |
| ·基因枪转化体系的建立 | 第85-88页 |
| ·受体材料的影响 | 第85页 |
| ·DNA 包被物质和轰击次数的选择 | 第85页 |
| ·金粉直径和轰击高度的选择 | 第85-86页 |
| ·抗性植株的获得 | 第86-87页 |
| ·基因型对基因枪转化效率的影响 | 第87页 |
| ·多年生黑麦草基因枪转化体系 | 第87-88页 |
| ·农杆菌介导转化体系的建立 | 第88-90页 |
| ·抑菌素浓度的确定 | 第88页 |
| ·菌液浓度、侵染时间和共培养时间对转化效率的影响 | 第88-89页 |
| ·抗性植株的获得 | 第89页 |
| ·多年生黑麦草农杆菌介导遗传转化体系 | 第89-90页 |
| ·结论与讨论 | 第90-95页 |
| ·筛选系统 | 第90-91页 |
| ·多年生黑麦草基因枪遗传转化体系 | 第91-93页 |
| ·受体材料 | 第91页 |
| ·DNA 包被物质 | 第91页 |
| ·轰击次数 | 第91-92页 |
| ·金粉直径 | 第92页 |
| ·轰击高度 | 第92页 |
| ·基因型对基因枪转化体系的影响 | 第92页 |
| ·其它影响因素 | 第92-93页 |
| ·多年生黑麦草农杆菌介导遗传转化体系 | 第93-95页 |
| ·受体材料 | 第93页 |
| ·菌液浓度 | 第93页 |
| ·侵染方式与侵染时间 | 第93-94页 |
| ·共培养时间 | 第94页 |
| ·乙酰丁香酮的影响 | 第94-95页 |
| ·小结 | 第95-96页 |
| 第4章 抗性植株的分子检测 | 第96-112页 |
| ·材料与方法 | 第96-103页 |
| ·植物材料 | 第96页 |
| ·植物DNA 的提取 | 第96-98页 |
| ·SDS 法提取植物DNA | 第96-97页 |
| ·试剂盒（CTAB）法提取植物DNA | 第97页 |
| ·DNA 的纯化 | 第97页 |
| ·DNA 质量检测 | 第97-98页 |
| ·抗性植株的PCR 分析 | 第98-99页 |
| ·PCR 扩增引物 | 第98页 |
| ·PCR 扩增体系 | 第98页 |
| ·PCR 反应条件 | 第98-99页 |
| ·Southern 印迹杂交 | 第99-101页 |
| ·试剂配制 | 第99页 |
| ·探针标记 | 第99-100页 |
| ·Southern 杂交方法 | 第100-101页 |
| ·植物RNA 的提取 | 第101-102页 |
| ·准备工作 | 第101页 |
| ·RNA 的提取步骤 | 第101页 |
| ·RNA 完整性及纯度检测 | 第101-102页 |
| ·Northern 印迹杂交 | 第102-103页 |
| ·按大小分离RNA，进行RNA 甲醛电泳 | 第102页 |
| ·RNA 的转膜 | 第102-103页 |
| ·探针标记 | 第103页 |
| ·Northern 杂交方法 | 第103页 |
| ·酶联免疫显色 | 第103页 |
| ·结果与分析 | 第103-109页 |
| ·植物DNA 的提取 | 第103-104页 |
| ·SDS 法提取植物DNA | 第103-104页 |
| ·试剂盒（CTAB）法提取植物DNA | 第104页 |
| ·抗性植株的PCR 扩增 | 第104-106页 |
| ·基因枪法转DRE81A 基因多年生黑麦草的PCR 扩增 | 第104-105页 |
| ·农杆菌介导法转DRE81A 基因多年生黑麦草的PCR 扩增 | 第105页 |
| ·基因枪法转BADH-CMO 基因多年生黑麦草的PCR 扩增 | 第105-106页 |
| ·抗性植株的PCR-Southern 印迹杂交 | 第106-108页 |
| ·探针标记效率 | 第106-107页 |
| ·转基因植株的PCR-Southern 杂交 | 第107-108页 |
| ·抗性植株的Northern 印迹杂交 | 第108页 |
| ·转基因植株的获得 | 第108-109页 |
| ·结论与讨论 | 第109-111页 |
| ·植物DNA 的提取 | 第109-110页 |
| ·PCR 扩增 | 第110-111页 |
| ·Southern 印迹杂交 | 第111页 |
| ·Northern 印迹杂交 | 第111页 |
| ·小结 | 第111-112页 |
| 第5章 转基因植株的性状鉴定和田间观测 | 第112-130页 |
| ·材料与方法 | 第112-116页 |
| ·植物材料 | 第112页 |
| ·盆栽转基因植株生长状况的观测 | 第112页 |
| ·盆栽转基因植株的管理 | 第112页 |
| ·盆栽转基因植株生长速度观测 | 第112页 |
| ·盆栽转基因植株的抗旱性检测 | 第112-114页 |
| ·抗旱试验植物材料 | 第112页 |
| ·测试方法和测量指标 | 第112-114页 |
| ·转基因植株的田间观测 | 第114-116页 |
| ·试验地点介绍 | 第115页 |
| ·田间管理和观测 | 第115页 |
| ·田间病虫害观测 | 第115页 |
| ·田间抗逆性观测 | 第115-116页 |
| ·结果与分析 | 第116-126页 |
| ·盆栽转基因多年生黑麦草的生长状况 | 第116页 |
| ·盆栽转基因植株抗旱能力的提高 | 第116-122页 |
| ·基因枪法转DRE81A 基因多年生黑麦草抗旱能力的提高 | 第116-121页 |
| ·农杆菌介导法转DRE81A 基因多年生黑麦草抗旱能力的提高 | 第121-122页 |
| ·转基因多年生黑麦草的田间生长状况 | 第122-126页 |
| ·田间生长和发育状况观测 | 第123-124页 |
| ·田间抗病虫害能力的观测 | 第124-125页 |
| ·田间抗性观测 | 第125-126页 |
| ·结论与讨论 | 第126-129页 |
| ·外源基因的表达对转基因多年生黑麦草生长状况的影响 | 第126-127页 |
| ·外源基因的表达对转基因多年生黑麦草抗性的影响 | 第127-128页 |
| ·外源基因在不同基因型中的表达 | 第128页 |
| ·转化方法对外源基因表达的影响 | 第128-129页 |
| ·小结 | 第129-130页 |
| 第6章 转基因多年生黑麦草子代研究 | 第130-155页 |
| ·材料与方法 | 第130-132页 |
| ·植物材料 | 第130页 |
| ·人工授粉方法与组合 | 第130页 |
| ·种子的收获 | 第130页 |
| ·子代种子的发芽试验 | 第130页 |
| ·子代种子萌发期的筛选 | 第130-131页 |
| ·多年生黑麦草种子对潮霉素的敏感度试验 | 第130-131页 |
| ·多年生黑麦草种子对PEG 胁迫的敏感度试验 | 第131页 |
| ·T1 代种子萌发期的干旱筛选 | 第131页 |
| ·T1 代盆栽干旱筛选 | 第131页 |
| ·叶片抗潮霉素筛选 | 第131-132页 |
| ·6-BA 浓度的选择 | 第131页 |
| ·多年生黑麦草离体叶片段对潮霉素的敏感度测试 | 第131页 |
| ·转基因植株对潮霉素敏感度测试 | 第131-132页 |
| ·T1 代叶片的潮霉素筛选 | 第132页 |
| ·T1 代的分子检测 | 第132页 |
| ·T1 代的田间生长观测及T2 代种子的获得 | 第132页 |
| ·T1 代在田间的出苗状况 | 第132页 |
| ·T1 代田间生长状况的观测 | 第132页 |
| ·T2 代种子的获得 | 第132页 |
| ·结果与分析 | 第132-148页 |
| ·转基因多年生黑麦草子代的获得 | 第132-133页 |
| ·T1 代发芽状况分析 | 第133-135页 |
| ·子代种子萌发期的筛选 | 第135-137页 |
| ·潮霉素对多年生黑麦草种子萌发的影响 | 第135-136页 |
| ·干旱胁迫对多年生黑麦草种子萌发的影响 | 第136页 |
| ·T1 代种子萌发期的干旱胁迫筛选 | 第136-137页 |
| ·T1 代盆栽生长观测和干旱胁迫 | 第137-138页 |
| ·叶片抗潮霉素筛选 | 第138-144页 |
| ·6-BA 浓度的选择 | 第138页 |
| ·多年生黑麦草离体叶片段对潮霉素敏感度的测试 | 第138-139页 |
| ·转基因植株对潮霉素敏感度测试 | 第139-144页 |
| ·快速检测转基因多年生黑麦草潮霉素抗性方法的建立 | 第144页 |
| ·快速检测转基因多年生黑麦草潮霉素抗性方法的应用 | 第144页 |
| ·T1 代分子检测 | 第144-146页 |
| ·T1 代的田间生长状况和T2 代的获得 | 第146-148页 |
| ·T1 代的田间生长状况 | 第146-147页 |
| ·T2 代的获得 | 第147-148页 |
| ·结论与讨论 | 第148-153页 |
| ·人工授粉、杂交与子代的获得 | 第148页 |
| ·转基因子代种子萌发期的特征 | 第148-150页 |
| ·子代种子的发芽 | 第148-149页 |
| ·潮霉素对种子萌发的影响 | 第149页 |
| ·模拟干旱对种子萌发的影响 | 第149-150页 |
| ·叶片法筛选转基因多年生黑麦草转基因植株 | 第150-151页 |
| ·6-BA 的持绿作用 | 第150页 |
| ·快速检测转基因多年生黑麦草潮霉素抗性的方法 | 第150-151页 |
| ·外源基因的分离规律和遗传稳定性 | 第151-152页 |
| ·转基因子代植株苗期及田间的生长 | 第152-153页 |
| ·小结 | 第153-155页 |
| 第7章 转基因多年生黑麦草的安全性评价 | 第155-163页 |
| ·材料与方法 | 第155-156页 |
| ·植物材料 | 第155页 |
| ·试验地点 | 第155页 |
| ·安全措施 | 第155-156页 |
| ·安全评价方法和评价体系 | 第156页 |
| ·结果与分析 | 第156-161页 |
| ·受体植物的安全性评价 | 第156-159页 |
| ·受体植物的历史背景 | 第156页 |
| ·受体植物的生物学特性 | 第156页 |
| ·受体植物在我国的分布、生长发育的生态环境条件 | 第156-157页 |
| ·受体植物与相关物种的关系 | 第157页 |
| ·受体植物的综述 | 第157-159页 |
| ·基因操作的安全性评价 | 第159-160页 |
| ·目的基因的用途及基因产物的功能 | 第159页 |
| ·载体的名称、来源和致病性 | 第159页 |
| ·启动子和终止子及其来源 | 第159页 |
| ·标记基因和报告基因的名称及其来源 | 第159-160页 |
| ·转基因方法 | 第160页 |
| ·转基因植物选择筛选系统 | 第160页 |
| ·转基因植物及其产品的安全性评价 | 第160-161页 |
| ·目的基因的发育特异性、组织特异性 | 第160页 |
| ·遗传稳定性 | 第160页 |
| ·转基因植物及其产品的特征变化 | 第160-161页 |
| ·讨论 | 第161-162页 |
| ·小结 | 第162-163页 |
| 第8章 结论 | 第163-166页 |
| 参考文献 | 第166-181页 |
| 附图 | 第181-190页 |
| 个人简介 | 第190-192页 |
| 导师简介 | 第192-193页 |
| 致谢 | 第193页 |
