摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-12页 |
第一章 绪论 | 第12-26页 |
·可持续农业与生物固氮 | 第12-13页 |
·氮素在可持续农业生产中的应用 | 第12页 |
·生物固氮的研究进展 | 第12-13页 |
·细菌的运动机制 | 第13-21页 |
·细菌的趋化性机制 | 第14-16页 |
·细菌的运动器官——鞭毛 | 第16-18页 |
·细菌鞭毛的合成调控 | 第18-21页 |
·对斯氏假单胞菌A1501 鞭毛的研究进展 | 第21页 |
·细菌的趋化定殖 | 第21-22页 |
·细菌的生物膜 | 第22-24页 |
·立题依据 | 第24-26页 |
第二章 材料与方法 | 第26-37页 |
·菌株与质粒 | 第26页 |
·培养基 | 第26-27页 |
·酶、试剂及常规操作 | 第27页 |
·方法 | 第27-37页 |
·A1501 菌株基因组DNA的分离 | 第27-28页 |
·PCR(Polymerase Chain Reaction) | 第28-29页 |
·琼脂糖凝胶电泳 | 第29-30页 |
·酶切及连接反应 | 第30页 |
·琼脂糖凝胶中DNA片段的回收 | 第30-31页 |
·高效率转化感受态细胞的制备、转化 | 第31页 |
·碱裂解法小量提取细菌质粒DNA | 第31-32页 |
·菌种的保存 | 第32页 |
·三亲接合实验 | 第32-33页 |
·野生型与突变株生长曲线的测定 | 第33页 |
·菌株固氮活性测定 | 第33-34页 |
·总蛋白的测定 | 第34页 |
·电镜观察鞭毛染色法 | 第34页 |
·趋化圈实验 | 第34页 |
·生物膜测定 | 第34-35页 |
·细菌RNA的提取 | 第35页 |
·RNA反转为cDNA | 第35-37页 |
第三章 结果与讨论 | 第37-52页 |
·斯氏假单胞菌A1501 鞭毛调控基因fleQ、fleS、fleR启动子验证 | 第37-39页 |
·fleQSR的序列分析 | 第37-38页 |
·RT-PCR验证fleQSR共转录单元 | 第38-39页 |
·斯氏假单胞菌A1501 鞭毛调控基因fleQ整合突变株的构建及验证 | 第39-41页 |
·fleQ基因5’端DNA同源片段的扩增 | 第39页 |
·将fleQ基因5’端DNA同源片段克隆到pK18mob上 | 第39-41页 |
·三亲接合和整合突变体的验证 | 第41页 |
·fleQ突变株(△FleQ)的功能互补菌株的构建 | 第41-43页 |
·互补基因片段的扩增 | 第42页 |
·将互补片段克隆到广宿主载体pLAFR3 | 第42-43页 |
·三亲接合和互补菌株的验证 | 第43页 |
·生理生化实验测定 | 第43-46页 |
·野生型A1501、△FleQ和FleQComp在A15 限制培养基中的生长情况分析 | 第43-44页 |
·野生型A1501、△FleQ以及FleQComp对固氮活性的影响 | 第44-45页 |
·野生型A1501、△FleQ以及FleQComp的趋化圈实验 | 第45页 |
·野生型A1501、△FleQ以及FleQComp的生物膜测定 | 第45-46页 |
·fleQ基因对鞭毛基因合成调控研究 | 第46-50页 |
·野生型A1501 和△FleQ总RNA的提取及cDNA的合成 | 第46页 |
·RT-PCR验证FleQ对鞭毛蛋白的调控 | 第46-47页 |
·荧光定量PCR验证FleQ对鞭毛蛋白的调控 | 第47-50页 |
·小结 | 第50页 |
·野生型A1501、△FleQ和FleQComp的透射电镜实验 | 第50-52页 |
第四章 总结与讨论 | 第52-53页 |
附录 1 突变株趋化、定殖补充实验 | 第53-58页 |
·透射电镜观察结果 | 第53-54页 |
·突变株趋化圈实验 | 第54-55页 |
·水稻定殖的初步研究 | 第55-57页 |
·菌株和水稻培养基 | 第55页 |
·水稻的试管种植 | 第55-56页 |
·水稻生长情况的观测 | 第56页 |
·水稻根表定殖电镜扫描 | 第56-57页 |
·小结 | 第57-58页 |
附录2 | 第58-60页 |
参考文献 | 第60-70页 |
致谢 | 第70-71页 |
作者简介 | 第71页 |