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固氮斯氏假单胞菌A1501鞭毛调控基因fleQ的功能研究

摘要第1-7页
Abstract第7-12页
第一章 绪论第12-26页
   ·可持续农业与生物固氮第12-13页
     ·氮素在可持续农业生产中的应用第12页
     ·生物固氮的研究进展第12-13页
   ·细菌的运动机制第13-21页
     ·细菌的趋化性机制第14-16页
     ·细菌的运动器官——鞭毛第16-18页
     ·细菌鞭毛的合成调控第18-21页
     ·对斯氏假单胞菌A1501 鞭毛的研究进展第21页
   ·细菌的趋化定殖第21-22页
   ·细菌的生物膜第22-24页
   ·立题依据第24-26页
第二章 材料与方法第26-37页
   ·菌株与质粒第26页
   ·培养基第26-27页
   ·酶、试剂及常规操作第27页
   ·方法第27-37页
     ·A1501 菌株基因组DNA的分离第27-28页
     ·PCR(Polymerase Chain Reaction)第28-29页
     ·琼脂糖凝胶电泳第29-30页
     ·酶切及连接反应第30页
     ·琼脂糖凝胶中DNA片段的回收第30-31页
     ·高效率转化感受态细胞的制备、转化第31页
     ·碱裂解法小量提取细菌质粒DNA第31-32页
     ·菌种的保存第32页
     ·三亲接合实验第32-33页
     ·野生型与突变株生长曲线的测定第33页
     ·菌株固氮活性测定第33-34页
     ·总蛋白的测定第34页
     ·电镜观察鞭毛染色法第34页
     ·趋化圈实验第34页
     ·生物膜测定第34-35页
     ·细菌RNA的提取第35页
     ·RNA反转为cDNA第35-37页
第三章 结果与讨论第37-52页
   ·斯氏假单胞菌A1501 鞭毛调控基因fleQ、fleS、fleR启动子验证第37-39页
     ·fleQSR的序列分析第37-38页
     ·RT-PCR验证fleQSR共转录单元第38-39页
   ·斯氏假单胞菌A1501 鞭毛调控基因fleQ整合突变株的构建及验证第39-41页
     ·fleQ基因5’端DNA同源片段的扩增第39页
     ·将fleQ基因5’端DNA同源片段克隆到pK18mob上第39-41页
     ·三亲接合和整合突变体的验证第41页
   ·fleQ突变株(△FleQ)的功能互补菌株的构建第41-43页
     ·互补基因片段的扩增第42页
     ·将互补片段克隆到广宿主载体pLAFR3第42-43页
     ·三亲接合和互补菌株的验证第43页
   ·生理生化实验测定第43-46页
     ·野生型A1501、△FleQ和FleQComp在A15 限制培养基中的生长情况分析第43-44页
     ·野生型A1501、△FleQ以及FleQComp对固氮活性的影响第44-45页
     ·野生型A1501、△FleQ以及FleQComp的趋化圈实验第45页
     ·野生型A1501、△FleQ以及FleQComp的生物膜测定第45-46页
   ·fleQ基因对鞭毛基因合成调控研究第46-50页
     ·野生型A1501 和△FleQ总RNA的提取及cDNA的合成第46页
     ·RT-PCR验证FleQ对鞭毛蛋白的调控第46-47页
     ·荧光定量PCR验证FleQ对鞭毛蛋白的调控第47-50页
     ·小结第50页
   ·野生型A1501、△FleQ和FleQComp的透射电镜实验第50-52页
第四章 总结与讨论第52-53页
附录 1 突变株趋化、定殖补充实验第53-58页
   ·透射电镜观察结果第53-54页
   ·突变株趋化圈实验第54-55页
   ·水稻定殖的初步研究第55-57页
     ·菌株和水稻培养基第55页
     ·水稻的试管种植第55-56页
     ·水稻生长情况的观测第56页
     ·水稻根表定殖电镜扫描第56-57页
   ·小结第57-58页
附录2第58-60页
参考文献第60-70页
致谢第70-71页
作者简介第71页

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