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重组家蚕素Ⅱ对哺乳细胞胰岛素样作用及其机制的体外研究

中文摘要第1-7页
ABSTRACT第7-17页
第1篇 前言第17-19页
第2篇 实验研究第19-81页
 第1章 重组家蚕素Ⅱ对哺乳细胞胰岛素样作用的研究第19-57页
  第1节 重组家蚕素Ⅱ对 HepG2 细胞胰岛素样作用的研究第19-42页
   ·实验材料与仪器第19-21页
     ·主要材料第19-20页
     ·主要仪器第20-21页
   ·实验方法第21-35页
     ·细胞培养第21-22页
     ·重组真核表达载体 pcDNA3.1(+)-BbxⅡ/His 稳定转染 HepG2 细胞第22-24页
     ·重组家蚕素Ⅱ基因在细胞内 mRNA 水平表达的检测第24-26页
     ·免疫细胞化学检测细胞中重组家蚕素Ⅱ蛋白的表达第26-27页
     ·Western blot 检测细胞和上清中重组家蚕素Ⅱ在蛋白水平的表达第27-31页
     ·MTT 方法检测细胞增殖第31-32页
     ·流式细胞术检测细胞周期第32-33页
     ·重组家蚕素Ⅱ基因对 HepG2 细胞葡萄糖消耗的影响第33页
     ·重组家蚕素Ⅱ基因对 HepG2 细胞糖原合成作用的影响第33-34页
     ·统计学分析第34-35页
   ·实验结果第35-42页
     ·本研究所用质粒载体基本框架第35页
     ·稳定基因转染细胞的筛选结果第35-36页
     ·重组家蚕素Ⅱ基因在 HepG2 细胞中 mRNA 水平表达的检测结果第36页
     ·重组家蚕素Ⅱ基因在 HepG2 蛋白水平的表达检测结果第36-38页
     ·重组家蚕素Ⅱ对 HepG2 增殖影响的结果第38页
     ·重组家蚕素Ⅱ对 HepG2 细胞周期影响的结果第38-39页
     ·重组家蚕素Ⅱ基因对 HepG2 细胞葡萄糖消耗的影响第39-40页
     ·重组家蚕素Ⅱ基因对 HepG2 细胞糖原合成作用的影响第40-42页
  第2节 重组家蚕素Ⅱ对 3T3-L1 细胞胰岛素样作用的研究第42-52页
   ·实验材料与仪器第42页
     ·主要材料第42页
     ·主要仪器第42页
   ·实验方法第42-46页
     ·3T3-L1 细胞培养第42页
     ·重组真核表达载体 pcDNA3.1(+)-BbxⅡ/His 稳定转染 3T3-L1 细胞第42-43页
     ·重组家蚕素Ⅱ基因在 3T3-L1 细胞内 mRNA 水平表达检测第43页
     ·免疫细胞化学检测 3T3-L1 细胞中重组家蚕素Ⅱ基因蛋白表达第43-44页
     ·Western blot 检测细胞和上清中重组家蚕素Ⅱ基因蛋白水平的表达第44页
     ·重组家蚕素Ⅱ对 3T3-L1 细胞增殖的影响第44-45页
     ·重组家蚕素Ⅱ基因对 3T3-L1 细胞周期的影响第45页
     ·重组家蚕素Ⅱ基因对 3T3-L1 成脂细胞葡萄糖消耗情况的影响第45-46页
     ·统计学分析第46页
   ·实验结果第46-52页
     ·稳定基因转染细胞的筛选结果第46页
     ·重组家蚕素Ⅱ基因在 3T3-L1 细胞中 mRNA 水平的表达第46-47页
     ·重组家蚕素Ⅱ基因在 3T3-L1 细胞内蛋白水平的表达第47-48页
     ·MTT 方法检测细胞增殖结果第48-49页
     ·流式细胞术检测细胞周期结果第49-50页
     ·油红 O 脂滴染色检测成脂分化结果第50页
     ·重组家蚕素Ⅱ对 3T3-L1 成脂细胞葡萄糖消耗情况的影响第50-52页
  第3节 讨论第52-56页
   ·重组家蚕素Ⅱ基因在细胞内的稳定表达第52-53页
   ·重组家蚕素Ⅱ对肝细胞糖代谢影响第53-54页
   ·重组家蚕素Ⅱ对脂肪细胞糖代谢影响第54页
   ·重组家蚕素Ⅱ对细胞增殖的影响第54-56页
  第4节 小结第56-57页
 第2章 重组家蚕素Ⅱ对哺乳动物细胞胰岛素样作用通路的研究第57-81页
  第1节 重组家蚕素Ⅱ对哺乳动物细胞糖代谢 PI3K 通路作用的研究第57-70页
   ·材料与仪器第57-58页
     ·主要材料第57-58页
     ·主要仪器第58页
   ·实验方法第58-61页
     ·细胞培养及诱导第58-59页
     ·PI3K 抑制剂对重组家蚕素Ⅱ作用细胞葡萄糖消耗的影响第59页
     ·PI3K 抑制剂对重组家蚕素Ⅱ作用 HepG2 细胞糖原合成的影响第59-60页
     ·PI3K 抑制剂对重组家蚕素Ⅱ胰岛素样作用通路中分子蛋白磷酸化水平的影响第60-61页
     ·统计学分析第61页
   ·实验结果第61-70页
     ·PI3K 抑制剂对重组家蚕素Ⅱ作用细胞葡萄糖消耗的影响第61-64页
     ·PI3K 抑制剂对 HepG2 细胞糖原合成作用的影响第64-65页
     ·重组家蚕素Ⅱ对 PI3K 通路中分子蛋白磷酸化水平的影响第65-70页
  第2节 重组家蚕素Ⅱ对 MAPK 通路作用的研究第70-77页
   ·材料与仪器第70-71页
     ·主要材料第70页
     ·主要仪器第70-71页
   ·实验方法第71-72页
     ·MAPK 抑制剂对 3T3-L1 细胞增殖的影响第71-72页
     ·流式细胞术检测 MAPK 抑制剂对各组 3T3-L1 细胞周期的影响第72页
     ·重组家蚕素Ⅱ对 MAPK 通路中分子蛋白磷酸化水平的影响第72页
     ·统计学分析第72页
   ·实验结果第72-77页
     ·MAPK 抑制剂对各组 3T3-L1 细胞增殖的影响第72-73页
     ·MAPK 抑制剂对各组 3T3-L1 细胞周期的影响第73-75页
     ·重组家蚕素Ⅱ对 MAPK 通路中蛋白磷酸化水平的影响第75-77页
  第3节 讨论第77-80页
   ·重组家蚕素Ⅱ对 PI3K 通路作用第77-78页
   ·重组家蚕素Ⅱ对 MAPK 通路作用第78-80页
  第4节 小结第80-81页
第3篇 实验结论第81-83页
参考文献第83-87页
综述第87-112页
 参考文献第100-112页
作者简介及在学期间所取得的科研成果第112-114页
致谢第114页

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