| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略语表 | 第13-14页 |
| 1 前言 | 第14-39页 |
| ·苏云金素概况 | 第14-24页 |
| ·苏云金芽胞杆菌简介 | 第14-16页 |
| ·苏云金素的特性与结构 | 第16-17页 |
| ·苏云金素的杀虫机理 | 第17-18页 |
| ·苏云金素的分离与纯化 | 第18-19页 |
| ·苏云金素的安全性鉴定 | 第19-21页 |
| ·苏云金素合成基因的研究现状 | 第21-24页 |
| ·苏云金素的发现 | 第21-22页 |
| ·苏云金素的合成与质粒间的关系 | 第22-23页 |
| ·苏云金素的合成及分泌途径的研究 | 第23-24页 |
| ·苏云金素蛋白质组水平的研究 | 第24页 |
| ·抗生素的合成途径 | 第24-30页 |
| ·抗生素的分类 | 第24-25页 |
| ·抗生素的作用方式 | 第25页 |
| ·抗生素的合成方式 | 第25-30页 |
| ·非核糖体肽合成途径 | 第25-27页 |
| ·聚酮合成途径 | 第27-29页 |
| ·聚酮合成酶-非核糖体肽合成酶杂合合成途径 | 第29-30页 |
| ·细菌素 | 第30-36页 |
| ·细菌素的定义 | 第30页 |
| ·细菌素的分类 | 第30-31页 |
| ·细菌素的生物合成途径 | 第31-33页 |
| ·细菌素的转录后修饰、激活和运输 | 第33-35页 |
| ·细菌素生物合成的调控 | 第35页 |
| ·细菌素操纵子的免疫性 | 第35-36页 |
| ·细菌素与抗生素的区别 | 第36页 |
| ·苏云金芽胞杆菌菌株CT-43简介 | 第36-37页 |
| ·本课题的研究意义 | 第37-39页 |
| 2 材料与方法 | 第39-57页 |
| ·实验材料 | 第39-46页 |
| ·菌株、质粒 | 第39-45页 |
| ·培养基 | 第45页 |
| ·试剂和仪器 | 第45-46页 |
| ·试剂 | 第45-46页 |
| ·仪器 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-57页 |
| ·DNA常规操作 | 第46-49页 |
| ·苏云金芽胞杆菌质粒的制备 | 第46-47页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第47页 |
| ·DNA的体外重组操作 | 第47页 |
| ·大肠杆菌的常规转化 | 第47-48页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的电转化 | 第48页 |
| ·大肠杆菌转化子的筛选 | 第48-49页 |
| ·苏云金芽胞杆菌重组菌的筛选 | 第49页 |
| ·PCR扩增 | 第49页 |
| ·穿梭载体pEMB0557的构建 | 第49-50页 |
| ·复制子ori60和红霉素基因的克隆 | 第49页 |
| ·多余酶切位点的定点突变 | 第49页 |
| ·重组质粒pEMB0557的构建 | 第49-50页 |
| ·菌株CT-43基因组大肠杆菌人工染色体文库(BAC文库)的构建 | 第50-52页 |
| ·基因组DNA片段的制备 | 第50页 |
| ·细菌人工染色体载体的制备 | 第50-51页 |
| ·大肠杆菌DH10B电转化感受态细胞的制备 | 第51页 |
| ·连接与转化 | 第51-52页 |
| ·文库的筛选与保存 | 第52页 |
| ·菌株CT-43质粒BAC文库的构建 | 第52页 |
| ·菌株CT-43基因组苏云金芽胞杆菌BAC文库的构建 | 第52页 |
| ·Southern杂交 | 第52-53页 |
| ·含有cry1B基因的苏云金芽胞杆菌大质粒pBMB0558的克隆 | 第53-54页 |
| ·含有cry1B基因的BAC克隆子的筛选 | 第53页 |
| ·大质粒pBMB0558重叠连锁群图谱的绘制 | 第53页 |
| ·可以覆盖整个pBMB0558质粒的BAC克隆子的亚克隆文库的构建 | 第53页 |
| ·亚克隆文库的测序及序列拼接 | 第53-54页 |
| ·苏云金素合成基因簇thuABCDEFG的异源表达 | 第54页 |
| ·苏云金芽胞杆菌CT-43菌株基因中断突变株的筛选 | 第54页 |
| ·苏云金素的分离纯化 | 第54-55页 |
| ·有机溶剂萃取法(用于高效液相色谱-HPLC检测) | 第54-55页 |
| ·直接过滤法 | 第55页 |
| ·胞内物质的提取 | 第55页 |
| ·苏云金素和胞内代谢物的检测 | 第55-56页 |
| ·苏云金素的高效液相色谱检测 | 第55页 |
| ·苏云金素和胞内代谢物的飞行质谱检测 | 第55-56页 |
| ·序列测定和序列分析 | 第56-57页 |
| 3 结果与分析 | 第57-90页 |
| ·苏云金素合成基因所在的大质粒的定位 | 第57-60页 |
| ·苏云金芽胞杆菌菌株CT-43质粒消除突变株的筛选 | 第57-58页 |
| ·苏云金芽胞杆菌菌株CT-43及其突变株与cry1B基因之间的关系 | 第58-59页 |
| ·cry1B基因所在的大质粒的定位 | 第59-60页 |
| ·含有cry1B基因的大质粒pBMB0558的克隆 | 第60-72页 |
| ·穿梭载体pEMB0557的构建 | 第60-64页 |
| ·苏云金芽胞杆菌菌株CT-43大肠杆菌BAC文库的构建 | 第64-66页 |
| ·菌株CT-43基因组穿梭BAC文库的构建 | 第64-65页 |
| ·菌株CT-43质粒穿梭BAC文库的构建 | 第65-66页 |
| ·含有cry1B基因的大质粒pBMB0558重叠连锁群图谱的绘制 | 第66-69页 |
| ·含有cry1B基因的BAC克隆子的筛选 | 第66页 |
| ·大质粒pBMB0558重叠连锁群图谱的绘制 | 第66-69页 |
| ·质粒pBMB0558的序列测定 | 第69-72页 |
| ·能够覆盖质粒pBMB0558的BAC克隆子的亚克隆文库的构建 | 第69-70页 |
| ·质粒pBMB0558序列的拼接 | 第70-71页 |
| ·质粒pBMB0558的序列分析 | 第71-72页 |
| ·菌株CT-43苏云金芽胞杆菌BAC文库 | 第72-73页 |
| ·苏云金素表达子的筛选 | 第73-76页 |
| ·大肠杆菌BAC文库的HPLC筛选 | 第73页 |
| ·苏云金芽胞杆菌BAC文库的HPLC-MS筛选 | 第73页 |
| ·功能域的缩短 | 第73-76页 |
| ·苏云金素合成基因簇thuABCDEFG的生物信息学分析 | 第76-78页 |
| ·苏云金素合成途径的推导 | 第78-80页 |
| ·苏云金素合成途径的初步验证 | 第80-90页 |
| ·基因簇中的thuE基因的中断实验 | 第80-84页 |
| ·中断载体的构建 | 第81-82页 |
| ·thuE基因中断突变株的筛选 | 第82-84页 |
| ·thuE基因中断突变株的飞行质谱(TOF-MS)检测 | 第84-86页 |
| ·thuE基因中断突变株的胞外检测 | 第84-86页 |
| ·thuE基因中断突变株的胞内检测 | 第86页 |
| ·苏云金素生物合成途径的验证 | 第86-90页 |
| 4 讨论 | 第90-98页 |
| ·与苏云金素合成相关的基因 | 第90-94页 |
| ·thuA基因 | 第90-91页 |
| ·与组装相关的蛋白 | 第91-92页 |
| ·苏云金素的产量调控因子 | 第92页 |
| ·苏云金素的分泌 | 第92-93页 |
| ·苏云金素的免疫机制 | 第93-94页 |
| ·苏云金素合成基因簇所在大质粒的功能分析 | 第94-98页 |
| 5 总结和创新点 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 附录 已发表和待发表论文及专利 | 第109页 |
