| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-26页 |
| 1 番茄与叶霉菌的互作 | 第12-16页 |
| ·引言 | 第12页 |
| ·番茄抗叶霉菌基因(Cf) | 第12-13页 |
| ·番茄叶霉菌Avr基因 | 第13-14页 |
| ·番茄Cf蛋白对叶霉菌Avr蛋白的识别 | 第14-15页 |
| ·Cf/Avr互作下游信号传导和防卫反应的激活 | 第15-16页 |
| 2 病毒诱导的基因沉默及其在植物基因功能鉴定中的作用 | 第16-22页 |
| ·引言 | 第16-17页 |
| ·病毒诱导的基因沉默(VIGS) | 第17-20页 |
| ·VIGS的发现与建立 | 第17-19页 |
| ·VIGS的作用机制 | 第19-20页 |
| ·VIGS的优势 | 第20页 |
| ·VIGS在植物基因功能鉴定中的应用现状 | 第20-22页 |
| ·利用VIGS研究发育和代谢基因 | 第20-21页 |
| ·利用VIGS研究植物抗病途径中信号基因 | 第21-22页 |
| ·展望 | 第22页 |
| 3 基因沉默抑制子 | 第22-24页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·基因沉默抑制子的发现和鉴定 | 第22-23页 |
| ·基因沉默抑制子的作用机理 | 第23-24页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 第二章 6个cDNA-AFLP差异表达片段相应基因在番茄抗叶霉病中作用的基因沉默分析 | 第26-43页 |
| 1 材料与方法 | 第27-35页 |
| ·材料 | 第27-28页 |
| ·植物材料 | 第27页 |
| ·菌种和质粒 | 第27页 |
| ·PCR检验引物 | 第27页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第27-28页 |
| ·方法 | 第28-32页 |
| ·PCR技术 | 第28-29页 |
| ·常规PCR反应 | 第28页 |
| ·RT-PCR | 第28-29页 |
| ·PCR产物纯化 | 第29页 |
| ·DNA克隆技术 | 第29-30页 |
| ·酶切 | 第29-30页 |
| ·连接 | 第30页 |
| ·转化 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌热击转化 | 第30页 |
| ·农杆菌电击转化 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第31-32页 |
| ·碱裂解法提取重组质粒 | 第31-32页 |
| ·PCR鉴定 | 第32页 |
| ·酶切鉴定 | 第32页 |
| ·植物总RNA提取和电泳 | 第32页 |
| ·器皿和容器的处理 | 第32页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第32页 |
| ·实验方案 | 第32-35页 |
| ·cDNA-AFLP差异表达片段基因沉默结构的构建 | 第33页 |
| ·农杆菌接种液的准备 | 第33-34页 |
| ·农杆菌接种 | 第34页 |
| ·HR检验 | 第34页 |
| ·VIGS靶标基因转录本在植株体内积累量的检测 | 第34-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-41页 |
| ·pYL156∷ACE片段的亚克隆及鉴定 | 第35-37页 |
| ·pYL156∷ACE基因沉默处理对生长发育和Cf-4/Avr4介导的过敏性坏死反应的影响 | 第37-40页 |
| ·病毒诱导基因沉默的RT-PCR检测 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 pTRV1中16K ORF对TRV介导基因沉默的影响分析 | 第43-58页 |
| 1 材料与方法 | 第44-49页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·植物材料 | 第44页 |
| ·菌种和质粒 | 第44页 |
| ·PCR扩增引物 | 第44页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第44-45页 |
| ·方法 | 第45-46页 |
| ·PCR技术 | 第45页 |
| ·梯度PCR | 第45页 |
| ·RT-PCR | 第45页 |
| ·DNA克隆技术 | 第45页 |
| ·转化 | 第45页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第45页 |
| ·植物总RNA提取和电泳 | 第45-46页 |
| ·实验方案 | 第46-49页 |
| ·缺失16K ORF的pTRV1结构的构建 | 第46-48页 |
| ·pTRV1的结构 | 第46页 |
| ·pTRV1△16K的构建 | 第46-48页 |
| ·农杆菌接种液的准备 | 第48页 |
| ·农杆菌接种 | 第48-49页 |
| ·VIGS靶标基因转录本在植株体内积累量的检测 | 第49页 |
| ·植株体内TRV病毒积累量的检测 | 第49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-56页 |
| ·pTRV1 MP3′端(1/2MP)的克隆 | 第49-51页 |
| ·序列测定与分析 | 第51页 |
| ·pTRV1△16K的构建 | 第51-53页 |
| ·16K ORF缺失型TRV与野生型TRV介导基因沉默效果比较分析 | 第53-55页 |
| ·VIGS靶标基因PDS转录本在植株体内积累量的检测 | 第55页 |
| ·本氏烟植株体内TRV病毒积累量的检测 | 第55-56页 |
| 3 讨论 | 第56-58页 |
| 第四章 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 致谢 | 第67-69页 |
| 附录 | 第69-70页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第70页 |
