致谢 | 第1-4页 |
摘要 | 第4-5页 |
Abstract | 第5-10页 |
第一章 植物花发育基因研究进展 | 第10-19页 |
1 成花诱导 | 第10-12页 |
·环境外因及自身内因 | 第11页 |
·相关基因的调控 | 第11-12页 |
2 花分生组织的形成 | 第12页 |
3 花器官形成 | 第12-17页 |
·MADS-box 基因 | 第12-13页 |
·ABC 模型 | 第13-14页 |
·ABCD 模型 | 第14-15页 |
·ABCDE 模型及四因子模型 | 第15-17页 |
4 百合MADS-BOX 基因的克隆 | 第17-18页 |
5 小结 | 第18-19页 |
第二章 植物基因功能研究方法 | 第19-27页 |
1 生物信息学在基因功能研究中的应用 | 第19-20页 |
·基因功能初步发掘过程中生物信息学的应用 | 第19页 |
·分子进化的研究 | 第19-20页 |
·表达序列标签(expressed sequence tag, EST) | 第20页 |
2 基因功能的转录和翻译水平的研究 | 第20-22页 |
·基因表达系列分析 | 第20-22页 |
·DNA 微阵列 | 第22页 |
3 从遗传学角度分析基因功能 | 第22-26页 |
·基因诱变 | 第23页 |
·基因功能敲除 | 第23-25页 |
·基因超表达 | 第25页 |
·RNA 干扰技术(RNA interfereing, RNAi) | 第25-26页 |
4 展望 | 第26-27页 |
第三章 RNAi 技术在植物研究中的运用 | 第27-37页 |
1 RNAi 研究历史 | 第27-28页 |
2 RNA 沉默的的机理 | 第28-29页 |
3 RNAi 技术的要点和流程 | 第29-32页 |
·实现RNA 沉默的方法 | 第30页 |
·植物中常用的RNAi 载体 | 第30-31页 |
·ihpRNA 中intron 片段的作用 | 第31-32页 |
4 RNAi 在植物研究中的应用 | 第32-36页 |
·RNAi 是植物功能基因组学研究的有效工具 | 第32-33页 |
·RNAi 作为作物改良和增产的有效工具 | 第33-35页 |
·RNAi 用于植物病毒研究 | 第35-36页 |
5 小节 | 第36-37页 |
·RNAi 技术与反义技术的区别 | 第36页 |
·RNAi 技术的前景 | 第36-37页 |
第四章 百合花发育相关基因LLAG1 和LLGLO1 的功能分析 | 第37-53页 |
1 实验材料 | 第37-38页 |
·植物材料 | 第37页 |
·菌种及质粒 | 第37页 |
·引物 | 第37-38页 |
2 实验方法 | 第38-44页 |
·实验流程 | 第38页 |
·总RNA 的提取 | 第38-39页 |
·RNA 的检测 | 第39页 |
·反转录 | 第39-40页 |
·PCR 扩增LLAG1 和LLGLO1 cDNA 片断 | 第40页 |
·目的片断的回收纯化 | 第40页 |
·回收产物与T-Vecor 的连接 | 第40-41页 |
·连接产物的转化 | 第41页 |
·转化子的筛选和鉴定 | 第41-43页 |
·序列测定和分析 | 第43页 |
·表达载体的构建 | 第43页 |
·农杆菌的转化 | 第43页 |
·烟草的转化 | 第43-44页 |
·转基因烟草的阳性检测和表型变异 | 第44页 |
3 结果分析 | 第44-50页 |
·总RNA 的提取 | 第44-45页 |
·反转录及基因cDNA 片断的扩增 | 第45-46页 |
·T.vector-gene 的PCR 验证和酶切验证 | 第46页 |
·测序分析 | 第46-48页 |
·表达载体的构建 | 第48页 |
·烟草转化 | 第48页 |
·LLGLO1-pBI121 转基因烟草的PCR 检测及表型分析 | 第48-50页 |
4 讨论 | 第50-53页 |
第五章 百合LLAG1 和LLGLO1 基因的RNAI 载体构建 | 第53-64页 |
1 材料 | 第53页 |
2 实验方法 | 第53-56页 |
·实验流程 | 第53页 |
·总RNA 的提取等方法 | 第53页 |
·ihpRNA 片断的克隆 | 第53-56页 |
·RNAi 载体构建 | 第56页 |
3 结果分析 | 第56-60页 |
·总RNA 的提取 | 第56页 |
·质粒图 | 第56-57页 |
·LLAGMLIKE-P1/P1 和LLGLO1-P1/P2 cDNA 片断的扩增 | 第57-58页 |
·序列分析 | 第58页 |
·RNA 干扰载体的PCR 及酶切验证 | 第58-60页 |
4 讨论 | 第60-62页 |
·植物RNA 干扰载体中ihpRNA 片断的选择 | 第60-61页 |
·ihpRNA 片断的获得 | 第61页 |
·实验中的对照 | 第61-62页 |
·RNAi 效应检测 | 第62页 |
5 下一步研究展望 | 第62-64页 |
参考文献 | 第64-75页 |
详细摘要 | 第75-78页 |