| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 1 前言 | 第12-16页 |
| ·小儿肾母细胞瘤流行病学 | 第12-14页 |
| ·与小儿肾母细胞瘤发病密切相关基因-WT1 基因 | 第14-16页 |
| 2 实验材料的制备 | 第16-20页 |
| ·实验材料 | 第16-17页 |
| ·基因、动物及肿瘤组织 | 第16页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第16页 |
| ·常用溶液的配置 | 第16-17页 |
| ·主要仪器 | 第17页 |
| ·实验方法 | 第17-18页 |
| ·小儿肾母细胞瘤细胞系的建立 | 第17页 |
| ·小儿肾母细胞瘤裸鼠动物模型的建立 | 第17-18页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第18页 |
| ·实验结果 | 第18-20页 |
| ·小儿肾母细胞瘤细胞系的建立我们已经成功的建立了肿瘤细胞系，建立的细胞系已经进行了冻存，以后实验备用，以下是细胞系建立时不同时间的镜下观 | 第18-19页 |
| ·小儿肾母细胞瘤动物模型的建立 | 第19-20页 |
| ·小儿肾母细胞瘤多克隆抗体的制备 | 第20页 |
| 3 小儿肾母细胞瘤DNA 免疫的初步研究 | 第20-32页 |
| ·实验材料 | 第20-22页 |
| ·质粒、细胞、动物 | 第20页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第20-21页 |
| ·常用溶液的配置 | 第21-22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-28页 |
| ·PCR 引物设计及经过修饰的 | 第22-23页 |
| ·HBc 基因的获得上海生物工程公司合成 | 第23页 |
| ·HLA-A~*0201-HBc、HLA-A~*2402-HBc DNA 片断的扩增 | 第23页 |
| ·PCR 片段胶回收（PCR 片段快速胶回收试剂盒北京博大生物公司）.. | 第23页 |
| ·PCR 产物与T 载体连接 | 第23-24页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第24页 |
| ·转化 | 第24页 |
| ·鉴定重组质粒 | 第24页 |
| ·质粒DNA 的小量提取 | 第24-25页 |
| ·质粒的酶切鉴定 | 第25页 |
| ·测序 | 第25页 |
| ·重组真核表达质粒的构建 | 第25页 |
| ·真核重组质粒转染COS-7 细胞进行瞬时表达 | 第25-26页 |
| ·真核重组质粒转染COS-7 细胞后的免疫细胞化学鉴定 | 第26页 |
| ·真核重组质粒的大量制备和纯化（大体质粒试剂盒北京博大生物公司 | 第26-27页 |
| ·紫外分光法测定DNA 的含量 | 第27页 |
| ·候选DNA 疫苗免疫动物 | 第27页 |
| ·脾脏淋巴细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·脾脏T 淋巴细胞亚群分析 | 第28页 |
| ·MTS 测定淋巴细胞增殖 | 第28页 |
| ·统计学分析数据以均数±标准差( ±s)表示，组间显著性差异采用Excel 2000 软件进行单因素方差分析 | 第28页 |
| ·实验结果 | 第28-32页 |
| ·HLA-A*0201-HBc/pcDNA3.1(+)、HLA-A~*2402-HBc/pcDNA3.1(+)PCR 及双酶切鉴定（图3） | 第28-29页 |
| ·HLA-A*0201-HBc/pcDNA3.1(+)、HLA-A~*2402-HBc/pcDNA3.1(+)COS-7 细胞瞬时表达免疫细胞化学结果（图4） | 第29-30页 |
| ·候选DNA 疫苗免疫小鼠淋巴细胞亚群分析 | 第30页 |
| ·候选DNA 疫苗免疫小鼠脾淋巴细胞增殖实验MTS 检测结果 | 第30-32页 |
| 4 以VLP 为呈现载体小儿肾母细胞瘤新型疫苗的研究 | 第32-53页 |
| ·病毒样颗粒 | 第32-35页 |
| ·杆状病毒表达载体系统(baculovirus expression system) | 第35-36页 |
| ·实验材料 | 第36-38页 |
| ·菌株﹑质粒及动物 | 第36-37页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37-38页 |
| ·实验动物及分组 | 第38页 |
| ·抗体 | 第38页 |
| ·常用溶液配制 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-45页 |
| ·HLA-A~*2402-HBc/ pFastBac~(TM)构建 | 第38-39页 |
| ·HLA-A~*2402-HBc/ pFastBac~(TM)与杆粒基因重组 | 第39-41页 |
| ·昆虫细胞Sf9 中重组杆状病毒的产生 | 第41-42页 |
| ·HLA-A~*2402-HBc 重组蛋白的表达及纯化 | 第42-43页 |
| ·HLA-A~*2402-HBc 重组蛋白、DNA 疫苗动物实验 | 第43-45页 |
| ·HLA-A~*2402 重组蛋白、DNA 疫苗细胞实验 | 第45页 |
| ·统计学处理数据以均数±标准差（±s）表示，组间显著性差异采用Excel2000 软件进行单因素方差分析 | 第45页 |
| ·实验结果 | 第45-53页 |
| ·HLA-A~*2402-HBc/ pFastBac~(TM) 双酶切鉴定结果(图6) | 第45-46页 |
| ·HLA-A~*2402-HBc/ pFastBac~(TM)测序结果 经测序证实所扩增到的片段为乙型肝炎HBc 蛋白编码基因和HLA-A*2402-HBc 锚定点编码基因，所测序列与Genebank 登录的完全一致 | 第46页 |
| ·HLA-A~*2402-HBc/ bacmid 重组质粒PCR 鉴定结果（图7） | 第46页 |
| ·HLA-A~*2402-HBc/ bacmid 转染Sf9 细胞病变结果（图8） | 第46-47页 |
| ·纯化的HLA-A~*2402-HBc 重组蛋白SDS-PAGE 结果（图9） | 第47页 |
| ·HLA-A~*2402-HBc 重组蛋白WB 鉴定结果 | 第47-48页 |
| ·HLA-A~*2402-HBc 重组蛋白电镜结果（图11） | 第48页 |
| ·HLA-A~*2402-HBc 重组蛋白、DNA 疫苗动物实验 | 第48-52页 |
| ·HLA-A~*2402 重组蛋白、DNA 疫苗细胞实验结果 | 第52-53页 |
| 5 讨论 | 第53-60页 |
| 全文结论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 作者简介 | 第66页 |
