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疏绵状嗜热丝孢菌热稳定纤维素酶的分离纯化和基因克隆

中文摘要第1-13页
ABSTRACT第13-15页
英文缩略词及中文对照表第15-16页
第一章 纤维素酶的研究进展第16-55页
 引言第16-17页
 1. 纤维素的降解第17-18页
 2. 纤维素酶的研究进展第18-53页
   ·纤维素酶系的组成第19-21页
   ·纤维素酶的主要来源第21-23页
     ·纤维素酶的来源第21-22页
     ·产纤维素酶微生物的分泌特点第22页
     ·产纤维素酶的微生物选育第22-23页
   ·纤维素酶的生产第23页
   ·纤维素酶的结构第23-27页
     ·纤维素酶的分子结构第24-26页
     ·纤维素酶的蛋白质结构第26-27页
   ·纤维素酶的作用机理第27-30页
     ·纤维素酶对不同基质的作用第27-28页
     ·纤维素酶的降解机理第28-30页
   ·纤维素酶的应用第30-32页
     ·纤维素酶在农业上的应用第30页
     ·纤维素酶在饲料工业上的应用第30-31页
     ·纤维素酶在食品业上的应用第31页
     ·纤维素酶在发酵、酿酒工业上的应用第31页
     ·纤维素酶在环境保护方面的应用第31页
     ·纤维素酶在植物遗传工程中的应用第31-32页
     ·纤维素酶在纺织、洗涤剂、纸浆等其他工业上的应用第32页
   ·纤维素酶的纯化研究第32-33页
   ·纤维素酶的主要性质第33-37页
     ·纤维素酶的分子量大小第33-35页
     ·纤维素酶的等电点pI第35页
     ·纤维素酶的最适反应pH 值第35页
     ·纤维素酶的最适反应温度与热稳定性第35-36页
     ·金属离子对纤维素酶活性的影响第36-37页
   ·纤维素酶的活力测定第37-39页
     ·外切葡聚糖纤维二糖水解酶(CBH)活力测定第38页
     ·β-葡萄糖苷酶(BG)的活力测定第38-39页
     ·内切葡聚糖酶(EG)的活力测定第39页
   ·纤维素酶基因的克隆第39-45页
   ·纤维素酶基因的表达第45-51页
   ·纤维素酶研究展望第51-53页
 3. 本研究的立题依据意义与研究内容第53-55页
   ·研究的目的意义第53页
   ·研究的主要的研究内容第53-54页
   ·技术路线第54-55页
第二章 疏绵状嗜热丝孢菌(THERMOMYCES LANUGINOSUS)热稳定外切Β-葡聚糖纤维二糖水解酶的纯化及特性第55-80页
 1. 材料和方法第56-65页
   ·实验材料第56-57页
     ·供试菌株第56页
     ·培养基第56页
     ·主要仪器和试剂第56-57页
   ·实验方法第57-65页
     ·培养条件第57页
     ·酶活性测定第57页
     ·酶的分离纯化第57-58页
     ·蛋白质含量测定第58-60页
     ·纯度鉴定第60-62页
     ·蛋白质分子量的测定第62-63页
     ·外切β-葡聚糖纤维二糖水解酶的性质研究第63-65页
 2 结果与分析第65-73页
   ·不同培养时间对外切β-葡聚糖纤维二糖水解酶酶活性的影响第65页
   ·疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)外切β-葡聚糖纤维二糖水解酶的分离纯化及鉴定第65-68页
     ·DEAE-Sepharose 阴离子交换柱层析第65-66页
     ·Phenyl-Sepharose 疏水柱层析第66-67页
     ·外切β-葡聚糖纤维二糖水解酶纯化过程总表第67-68页
   ·外切β-葡聚糖纤维二糖水解酶的主要性质第68-73页
     ·外切β-葡聚糖纤维二糖水解酶的分子量和纯度鉴定第68页
     ·凝胶过滤层析测定酶的分子量第68-69页
     ·外切β-葡聚糖纤维二糖水解酶反应最适温度第69-70页
     ·外切β-葡聚糖纤维二糖水解酶反应最适pH 值第70页
     ·外切β-葡聚糖纤维二糖水解酶的热稳定性第70-71页
     ·外切β-葡聚糖纤维二糖水解酶的pH 稳定性第71-72页
     ·不同金属离子对外切β-葡聚糖纤维二糖水解酶活性的影响第72页
     ·外切β-葡聚糖纤维二糖水解酶的反应动力学曲线第72-73页
 3 讨论第73-79页
   ·关于研究结果第74-75页
   ·关于Thermomyces lanuginosus 外切β-葡聚糖纤维二糖水解酶的纯化方法第75-78页
   ·今后还应开展的工作第78-79页
 4 结论第79-80页
第三章 疏绵状嗜热丝孢菌(THERMOMYCES LANUGINOSUS)热稳定Β-葡萄糖苷酶的纯化及特性第80-96页
 引言第80-81页
 1 材料与方法第81-82页
   ·实验材料第81页
   ·实验方法第81-82页
     ·菌丝体的培养第81页
     ·酶活力测定第81页
     ·β-葡萄糖苷酶的分离纯化第81页
     ·蛋白质含量测定第81页
     ·蛋白质纯度的鉴定第81页
     ·蛋白质分子量的测定第81页
     ·β-葡萄糖苷酶的性质研究第81-82页
 2. 结果与分析第82-90页
   ·不同培养时间对疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)产生β-葡萄糖苷酶的影响第82-83页
   ·疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)β-葡萄糖苷酶的分离纯化及鉴定第83-85页
     ·DEAE-Sepharose 阴离子交换柱层析第83页
     ·Phenyl-Sepharose 疏水柱层析第83-84页
     ·β-葡萄糖苷酶纯化过程总表第84-85页
   ·β-葡萄糖苷酶的一般性质第85-90页
 3 讨论第90-95页
   ·关于研究方法第91-93页
   ·关于纯化研究结果第93页
   ·关于Thermomyces lanuginosus β-葡萄糖苷酶的稳定性第93-94页
   ·关于Thermomyces lanuginosus β-葡萄糖苷酶的活性与金属离子的关系第94页
   ·今后还应开展的工作第94-95页
 4 结论第95-96页
第四章 疏绵状嗜热丝孢菌THERMOMYCES LANUGINOSUS 热稳定外切Β-葡聚糖纤维二糖水解酶基因的CDNA 克隆及其序列分析第96-129页
 引言第96-97页
 1 材料与方法第97-112页
   ·实验材料第97-99页
     ·供试菌株第97页
     ·菌株与质粒第97页
     ·酶和生化试剂第97页
     ·主要仪器第97页
     ·培养基第97-98页
     ·溶液配制第98页
     ·PCR 引物设计第98-99页
   ·实验方法第99-112页
     ·总RNA 的提取(Trizol 法)第99页
     ·紫外检测RNA 产率和纯度第99-100页
     ·反转录cDNA 第一链的合成第100页
     ·目的基因cDNA 中间片段的分离第100-107页
     ·目的基因5’末端的分离(5’-RACE)第107-111页
     ·目的基因全长cDNA 的克隆第111-112页
     ·全长序列的生物信息学分析第112页
 2 结果与分析第112-126页
   ·Thermomyces lanuginosus 总RNA 的提取第112页
   ·Thermomyces lanuginosus 外切β-葡聚糖纤维二糖水解酶基因的分离第112-118页
     ·Thermomyces lanuginosus 外切β-葡聚糖纤维二糖水解酶基因中间片段的分离第112-114页
     ·Thermomyces lanuginosus外切β-葡聚糖纤维二糖水解酶基因3’-末端cDNA的分离第114-116页
     ·Thermomyces lanuginosus 外切β-葡聚糖纤维二糖水解酶基因cDNA 5’-末端的分离第116-117页
     ·Thermomyces lanuginosus外切β-葡聚糖纤维二糖水解酶基因全长cDNA的分离及扩增片断的序列拼接第117-118页
   ·外切β-葡聚糖纤维二糖水解酶基因的核苷酸序列和氨基酸序列分析第118-126页
     ·外切β-葡聚糖纤维二糖水解酶基因的核苷酸序列分析第120-121页
     ·外切β-葡聚糖纤维二糖水解酶基因的氨基酸序列分析第121-125页
     ·外切β-葡聚糖纤维二糖水解酶氨基酸组成第125-126页
 3 讨论第126-129页
   ·外切β-葡聚糖纤维二糖水解酶cbh 的结构第126页
   ·利用RACE 技术分离基因第126-129页
第五章 结论和建议第129-131页
 结论第129-130页
 建议第130-131页
参考文献第131-151页
攻读学位期间发表论文情况第151-152页
致谢第152页

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