| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-40页 |
| 第一章 哺乳动物核移植研究概述 | 第14-28页 |
| ·哺乳动物核移植研究的进展 | 第14页 |
| ·哺乳动物体细胞核移植的基本技术环节 | 第14-20页 |
| ·受体细胞的选择与去核 | 第14-17页 |
| ·供体细胞的准备 | 第17-18页 |
| ·供体细胞和受体细胞的重组 | 第18-19页 |
| ·重组胚的激活 | 第19页 |
| ·重组胚的培养 | 第19-20页 |
| ·哺乳动物体细胞核移植技术的机理及核移植异常的可能原因 | 第20-27页 |
| ·受体细胞和供体细胞的核质互作 | 第20-22页 |
| ·体细胞供体核重新程序化 | 第22-27页 |
| ·影响核移植效率的主要因素 | 第27-28页 |
| 第二章 转基因动物研究概述 | 第28-35页 |
| ·转基因动物的研究进展 | 第28-29页 |
| ·转基因动物制作方法 | 第29-31页 |
| ·显微注射法 | 第29页 |
| ·逆转录病毒感染法 | 第29页 |
| ·精子载体法 | 第29-30页 |
| ·胚胎干细胞介导法 | 第30页 |
| ·人工酵母染色体法 | 第30页 |
| ·体细胞核移植法 | 第30-31页 |
| ·转基因动物的应用 | 第31-33页 |
| ·生物制药 | 第31页 |
| ·建立诊断和治疗人类疾病的动物模型 | 第31-32页 |
| ·生产可用于人体器官移植的动物器官 | 第32页 |
| ·动物抗病育种和改良动物生产性能 | 第32-33页 |
| ·转基因动物技术存在的问题 | 第33-35页 |
| 第三章 人乳铁蛋白研究概述 | 第35-40页 |
| ·乳铁蛋白的结构及特性 | 第35页 |
| ·乳铁蛋白的代谢 | 第35-36页 |
| ·乳铁蛋白的生物学功能 | 第36-38页 |
| ·参与铁代谢 | 第36页 |
| ·参与机体抗病 | 第36-37页 |
| ·免疫调节作用 | 第37页 |
| ·调控细胞繁殖作用 | 第37页 |
| ·调控基因表达 | 第37页 |
| ·抗肿瘤作用 | 第37页 |
| ·抗氧化作用 | 第37-38页 |
| ·其它功能 | 第38页 |
| ·乳铁蛋白的开发应用及前景 | 第38-40页 |
| 第二部分 实验研究 | 第40-85页 |
| 第四章 ITS 对山羊卵细胞体外成熟及胚胎发育的影响 | 第42-47页 |
| ·材料和方法 | 第42-43页 |
| ·卵母细胞成熟培养液及胚胎培养液配制 | 第42-43页 |
| ·卵丘-卵母细胞复合体的回收 | 第43页 |
| ·卵母细胞的体外成熟培养 | 第43页 |
| ·成熟卵母细胞孤雌激活及培养 | 第43页 |
| ·统计分析 | 第43页 |
| ·结果 | 第43-44页 |
| ·ITS 对卵母细胞体外成熟的影响 | 第43-44页 |
| ·ITS 对山羊孤雌激活胚胎早期发育的影响 | 第44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| ·小结 | 第46-47页 |
| 第五章 山羊体细胞核移植电融合方案的优化 | 第47-54页 |
| ·材料与方法 | 第47-51页 |
| ·微电极的制作与连接 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·供体细胞的准备 | 第47-48页 |
| ·卵母细胞的体外成熟及核移植 | 第48-49页 |
| ·电融合 | 第49-50页 |
| ·克隆胚的激活与体外培养 | 第50-51页 |
| ·试验数据的统计分析 | 第51页 |
| ·结果 | 第51-52页 |
| ·微电极组合方案及增强膜接触面压力对融合效率的影响 | 第51-52页 |
| ·微电极挤压融合法对重组胚融合率及早期发育力的影响 | 第52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| 第六章 提高山羊乳腺上皮细胞核移植重组体融合效率的研究 | 第54-62页 |
| ·材料与方法 | 第54-57页 |
| ·试剂 | 第54页 |
| ·山羊卵母细胞的回收、培养及体外成熟 | 第54-55页 |
| ·卵母细胞的激活及孤雌胚的体外培养 | 第55页 |
| ·PHA 对孤雌激活胚体外发育的影响 | 第55页 |
| ·山羊乳腺上皮细胞的培养 | 第55-56页 |
| ·核移植、PHA 处理和细胞融合 | 第56页 |
| ·PHA 处理时间对重组体融合率的影响 | 第56页 |
| ·PHA 处理及电融合方案对融合效率及克隆胚胎发育力的影响 | 第56页 |
| ·试验数据的统计分析 | 第56-57页 |
| ·结果 | 第57-60页 |
| ·PHA 浓度对孤雌激活胚胎体外发育力的影响 | 第57页 |
| ·PHA 处理时间对孤雌激活胚胎体外发育力的影响 | 第57-58页 |
| ·PHA 处理时间对NT 重组体融合率的影响 | 第58页 |
| ·PHA 处理及电融合方案对融合效率及克隆胚胎发育力的影响 | 第58-60页 |
| ·讨论 | 第60页 |
| ·小结 | 第60-62页 |
| 第七章 转基因体细胞单克隆的制备及扩大培养 | 第62-71页 |
| ·材料 | 第62-63页 |
| ·质粒和菌种 | 第62页 |
| ·主要试剂 | 第62-63页 |
| ·方法 | 第63-66页 |
| ·载体pBLM-C1 质粒DNA 的制备及纯化 | 第63页 |
| ·细胞培养（组织块培养法） | 第63-64页 |
| ·细胞转染 | 第64-65页 |
| ·染色体Giemsa 染色的核型分析 | 第65-66页 |
| ·试验数据的统计分析 | 第66页 |
| ·结果 | 第66-69页 |
| ·适应性条件培养液对转染细胞单克隆生长的影响 | 第66-67页 |
| ·共培养对转基因细胞单克隆扩大培养的影响 | 第67-68页 |
| ·转染细胞PCR 检测结果 | 第68页 |
| ·染色体核型分析 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-70页 |
| ·小结 | 第70-71页 |
| 第八章 转HLF 基因山羊乳腺上皮细胞诱导表达及产物检测 | 第71-77页 |
| ·材料 | 第71页 |
| ·方法 | 第71-73页 |
| ·LTF 在山羊乳腺上皮细胞中的诱导表达及浓缩处理 | 第71-72页 |
| ·诱导产物的检测 | 第72-73页 |
| ·结果 | 第73-74页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果 | 第73页 |
| ·Western blot 结果 | 第73-74页 |
| ·讨论 | 第74-76页 |
| ·小结 | 第76-77页 |
| 第九章 用优化的核移植方案生产转HLF 基因山羊 | 第77-85页 |
| ·材料与方法 | 第78-79页 |
| ·卵母细胞的采集 | 第78页 |
| ·体外成熟卵母细胞的去核 | 第78页 |
| ·供体细胞的准备 | 第78页 |
| ·核移植 | 第78-79页 |
| ·克隆胚的激活及体外培养 | 第79页 |
| ·克隆胚外源基因的检测 | 第79页 |
| ·转基因克隆胚的胚胎移植和妊娠鉴定 | 第79页 |
| ·试验数据处理 | 第79页 |
| ·结果 | 第79-82页 |
| ·转染及筛选操作转基因克隆胚的体外发育的影响 | 第79-80页 |
| ·克隆胚外源基因的检测 | 第80-81页 |
| ·转基因克隆胚的胚胎移植 | 第81-82页 |
| ·讨论 | 第82-83页 |
| ·小结 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-100页 |
| 附录 | 第100-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 个人简历 | 第104-105页 |
