| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一部分 苦荞再生体系的建立农杆菌介导的遗传转化研究 | 第11-66页 |
| Ⅰ 文献综述 | 第11-30页 |
| 1 农杆菌遗传转化的研究进展 | 第12-25页 |
| ·根癌农杆菌介导的遗传转化 | 第13-21页 |
| ·根癌农杆菌的Ti质粒特点 | 第13-15页 |
| ·根癌农杆菌遗传转化的机制 | 第15-16页 |
| ·Ti质粒的改造和载体构建 | 第16-18页 |
| ·根癌农杆菌的转化方法 | 第18-21页 |
| ·发根农杆菌介导的遗传转化 | 第21-25页 |
| ·发根农杆菌遗传转化的原理 | 第21页 |
| ·发根农杆菌Ri质粒分子生物学特征 | 第21-22页 |
| ·发根农杆菌转化细胞的机制 | 第22-23页 |
| ·Ri载体的构建 | 第23页 |
| ·发根农杆菌的转化方法 | 第23页 |
| ·Ri质粒的应用 | 第23-25页 |
| ·毛状根的鉴定 | 第25页 |
| 2 植物耐盐基因工程研究进展 | 第25-28页 |
| ·盐胁迫的发生机制 | 第25-26页 |
| ·盐胁迫对植株生理生化特性的影响 | 第26-27页 |
| ·植物的盐胁迫适应机制 | 第27-28页 |
| ·植物液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因的研究进展 | 第28页 |
| 3 本研究的内容、目的和意义 | 第28-30页 |
| 第一章 苦荞离体培养体系的建立 | 第30-47页 |
| Ⅰ 材料与方法 | 第30页 |
| 1 植物材料 | 第30页 |
| 2 培养基 | 第30页 |
| 3 试验仪器 | 第30页 |
| 4 试验设计与分析方法 | 第30页 |
| Ⅱ 试验步骤 | 第30-32页 |
| 1 通过胚壮体发生途径诱导再生苗 | 第30-32页 |
| ·无菌苗培养 | 第30页 |
| ·愈伤组织诱导 | 第30-31页 |
| ·继代培养 | 第31页 |
| ·分化培养 | 第31页 |
| ·生根培养 | 第31页 |
| ·练苗和移栽 | 第31页 |
| ·培养基的组成 | 第31-32页 |
| 2 通过器官发生途径诱导再生苗 | 第32页 |
| Ⅲ 结果与分析 | 第32-44页 |
| 1 不同激素组合的对不同的外植体愈伤组织诱导的影响 | 第32-34页 |
| 2 影响胚性愈伤组织形成的因素 | 第34-36页 |
| ·不同激素组合对形成胚状体的影响 | 第34-35页 |
| ·外植体生长天数对胚性愈伤组织诱导的影响 | 第35-36页 |
| ·光照和黑暗培养对胚性愈伤组织诱导率的影响 | 第36页 |
| 3 胚性愈伤组织形态分化的影响因素 | 第36-39页 |
| ·不同激素组合对子叶和下胚轴胚性愈伤组织形态分化的影响 | 第36-38页 |
| ·继代次数对子叶和下胚轴胚性愈伤组织形态分化的影响 | 第38-39页 |
| 4 不同激素浓度对根诱导的影响 | 第39-40页 |
| 5 器官发生途径形成再生苗 | 第40-41页 |
| 6 愈伤组织褐变的抑制 | 第41-44页 |
| Ⅳ 讨论 | 第44-47页 |
| 第二章 根癌农杆菌介导的遗传转化 | 第47-66页 |
| Ⅰ 试验材料 | 第47-48页 |
| 1 无菌外植体培养 | 第47页 |
| 2 农杆菌菌株的制备 | 第47页 |
| 3 主要试剂的配制 | 第47-48页 |
| Ⅱ 试验方法 | 第48-55页 |
| 1 根癌农杆菌侵染、共培养 | 第48页 |
| 2 选择培养及转化植株再生 | 第48-49页 |
| 3 转基因苦荞再生植株的分子生物学鉴定 | 第49-55页 |
| ·转基因苦荞再生植株总DNA的微量提取 | 第49-50页 |
| ·质粒DNA小量提取 | 第50页 |
| ·质粒DNA的酶切分析 | 第50-51页 |
| ·DNA、质粒的电泳检测 | 第51页 |
| ·转基因愈伤组织RNA的提取 | 第51-52页 |
| ·PCR扩增反应检测 | 第52页 |
| ·RT-PCR分析 | 第52-53页 |
| ·转基因植株的Southern杂交分析 | 第53-55页 |
| 4 转基因苦荞对NaCl胁迫的抗性分析 | 第55页 |
| ·转基因苦荞愈伤组织对NaCl胁迫的抗性分析 | 第55页 |
| ·转基因苦荞再生苗对NaCl胁迫的抗性分析 | 第55页 |
| Ⅲ 结果与分析 | 第55-63页 |
| 1 根癌农杆菌对不同外植体转染频率的影响 | 第55-56页 |
| 2 不同转染时间对愈伤组织生长的影响 | 第56页 |
| 3 筛选体系的优化 | 第56-57页 |
| 4 苦荞基因组DNA提取 | 第57-58页 |
| 5 转基因愈伤组织的PCR检测 | 第58-59页 |
| 6 转基因再生植株的RT-PCR检测 | 第59-61页 |
| 7 转基因再生植株的Southern印记检测 | 第61-62页 |
| 8 转化愈伤组织和转基因再生植株对NaCl的抗性研究 | 第62-63页 |
| Ⅳ 讨论 | 第63-66页 |
| 第二部分 苦荞再生苗和遗传转化苗芦丁含量的研究 | 第66-74页 |
| Ⅰ 文献综述 | 第66-69页 |
| 1 苦养中芦丁的研究进展 | 第66-67页 |
| 2 芦丁含量的分析方法 | 第67-69页 |
| Ⅱ 材料与方法 | 第69-70页 |
| 1 试验仪器 | 第69页 |
| 2 药品试剂 | 第69页 |
| 3 标准曲线测定 | 第69页 |
| 4 样品的测定 | 第69页 |
| 5 苦荞愈伤组织中芦丁含量的测定 | 第69页 |
| 6 苦荞再生苗与大田植株各组织芦丁含量 | 第69页 |
| 7 苦荞转化植株和大田植株在盐胁迫下芦丁含量分析 | 第69-70页 |
| Ⅲ 结果与讨论 | 第70-73页 |
| 1 标准曲线的绘制 | 第70-71页 |
| 2 不同培养天数的愈伤组织中芦丁含量的变化 | 第71页 |
| 3 苦荞再生苗与大田植株各组织芦丁含量的分析 | 第71-72页 |
| 4 盐胁迫下苦荞转化苗与大田植株各组织的芦丁含量分析 | 第72-73页 |
| Ⅲ 结果与分析 | 第73-74页 |
| 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
