| 中文摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 引言 | 第9-11页 |
| 第一部分 综述 | 第11-31页 |
| 1 蛋白质的化学修饰 | 第11-16页 |
| ·原理和意义 | 第11-12页 |
| ·蛋白质化学修饰方法 | 第12-13页 |
| ·蛋白质的性质 | 第12页 |
| ·修饰剂的选择 | 第12-13页 |
| ·反应条件的选择 | 第13页 |
| ·化学修饰对蛋白质性质的影响 | 第13-16页 |
| ·保护活性部位和抗抑制剂 | 第13-14页 |
| ·增强稳定性和耐热性 | 第14-15页 |
| ·维持完整性与抗蛋白水解酶 | 第15页 |
| ·消除抗原性和稳定微环境 | 第15-16页 |
| ·蛋白质化学修饰的展望 | 第16页 |
| 2 聚乙二醇偶联 | 第16-25页 |
| ·PEG修饰的原理与方法 | 第16-21页 |
| ·氨基的修饰 | 第17-19页 |
| ·半胱氨酸(巯基)的修饰 | 第19-20页 |
| ·氧化的糖或N端的修饰 | 第20-21页 |
| ·修饰过程 | 第21页 |
| ·液相反应 | 第21页 |
| ·固相反应 | 第21页 |
| ·反应产物的鉴定和检测 | 第21-23页 |
| ·蛋白质或多肽的平均修饰度 | 第21页 |
| ·修饰位点和位置异构体的检测 | 第21-22页 |
| ·偶合物的均一性 | 第22-23页 |
| ·PEG修饰蛋白药物的开发与临床应用状况 | 第23-25页 |
| 3 尿酸酶介绍 | 第25-31页 |
| ·尿酸酶概述 | 第25-27页 |
| ·尿酸酶的反应机制 | 第27-28页 |
| ·尿酸酶与嘌呤代谢 | 第28页 |
| ·灵长动物中尿酸酶分子进化 | 第28-29页 |
| ·尿酸酶在临床检测和治疗上的应用 | 第29-31页 |
| ·尿酸酶在临床检测上的应用 | 第29-30页 |
| ·尿酸酶在临床治疗上的应用 | 第30-31页 |
| 第二部分 实验 | 第31-66页 |
| 第一章 PEG修饰尿酸酶反应的条件优化 | 第31-46页 |
| ·试剂和仪器 | 第31-32页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·仪器设备 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-41页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第32-34页 |
| ·SDS-PAGE | 第34-35页 |
| ·PAGE电泳 | 第35-36页 |
| ·分子筛电泳 | 第36-37页 |
| ·尿酸酶分子量和结构分析 | 第37-38页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶的碘染色 | 第38-39页 |
| ·尿酸酶PEG修饰反应进程分析 | 第39页 |
| ·尿酸酶浓度对修饰反应的影响 | 第39页 |
| ·尿酸酶和PEG质量比对修饰反应的影响 | 第39-40页 |
| ·温度对修饰反应的影响 | 第40页 |
| ·pH对修饰反应的影响 | 第40-41页 |
| ·实验结果 | 第41-45页 |
| ·尿酸酶分子量和结构分析 | 第41-42页 |
| ·尿酸酶PEG修饰反应进程分析 | 第42-43页 |
| ·尿酸酶浓度对修饰反应的影响 | 第43-44页 |
| ·尿酸酶和PEG质量比对修饰反应的影响 | 第44页 |
| ·温度对修饰反应的影响 | 第44页 |
| ·pH对修饰反应的影响 | 第44-45页 |
| ·本章小结 | 第45-46页 |
| 第二章 PEG化尿酸酶的分离纯化 | 第46-55页 |
| ·材料和仪器 | 第46-47页 |
| ·实验材料 | 第46页 |
| ·仪器设备 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-50页 |
| ·尿酸酶活性测定方案 | 第47-49页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第49页 |
| ·制备电泳分离纯化PEG-尿酸酶 | 第49-50页 |
| ·凝胶过滤层析测定尿酸酶及PEG-尿酸酶分子量 | 第50页 |
| ·结果与讨论 | 第50-54页 |
| ·制备电泳 | 第51-52页 |
| ·Sephacryl S200凝胶过滤层析测定尿酸酶分子量 | 第52-53页 |
| ·DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析 | 第53-54页 |
| ·本章小结 | 第54-55页 |
| 第三章 PEG化尿酸酶的性质研究 | 第55-66页 |
| ·材料和仪器 | 第55-56页 |
| ·实验材料 | 第55页 |
| ·仪器设备 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55-56页 |
| ·实验方法 | 第56-60页 |
| ·酶活力的测定方案 | 第56页 |
| ·pH对尿酸酶活性影响的研究 | 第56-57页 |
| ·温度对尿酸酶活性影响的研究 | 第57-58页 |
| ·米氏常数(K_m)的测定 | 第58-59页 |
| ·TNBS法测定尿酸酶修饰度 | 第59-60页 |
| ·抗胰蛋白酶水解能力分析 | 第60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-64页 |
| ·pH对尿酸酶及PEG化尿酸酶活性的影响 | 第60-61页 |
| ·温度对尿酸酶及PEG化尿酸酶活性影响 | 第61-62页 |
| ·米氏常数(K_m)的测定 | 第62-63页 |
| ·TNBS法测定尿酸酶氨基修饰度 | 第63-64页 |
| ·抗胰蛋白酶水解能力分析 | 第64页 |
| ·本章小结 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 在读期间所发表文章目录 | 第72-73页 |