新型牛溶菌酶基因的重组真核质粒构建及活性研究
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-14页 |
| 第一章 新型牛溶菌酶基因及真核表达载体的构建 | 第14-25页 |
| 1 引言 | 第14-15页 |
| 2 材料和方法 | 第15-21页 |
| ·材料 | 第15-17页 |
| ·质粒和宿主菌 | 第15-16页 |
| ·主要试剂 | 第16页 |
| ·培养基及溶液的配制 | 第16-17页 |
| ·方法 | 第17-21页 |
| ·Lys基因片段的准备 | 第17-18页 |
| ·VR1020真核载体双酶切片段的制备 | 第18页 |
| ·Lys酶切片段与载体VR1020酶切片段的连接 | 第18页 |
| ·连接产物的转化 | 第18-19页 |
| ·重组质粒的筛选和初步鉴定 | 第19-21页 |
| ·重组质粒中插入片段的序列测定及结果分析 | 第21页 |
| 3 结果 | 第21-23页 |
| ·PCR扩增产物的鉴定 | 第21页 |
| ·重组真核表达质粒的构建 | 第21-23页 |
| 4 讨论 | 第23-25页 |
| ·Lys基因片段的获得 | 第23页 |
| ·Lys基因真核表达质粒的构建 | 第23-25页 |
| 第二章 新型溶菌酶基因的细胞转染表达活性分析 | 第25-38页 |
| 1 引言 | 第25-26页 |
| 2 材料和方法 | 第26-32页 |
| ·材料 | 第26-28页 |
| ·宿主菌 | 第26页 |
| ·标准菌 | 第26-27页 |
| ·真核细胞 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·培养基及溶液的配置 | 第27-28页 |
| ·方法 | 第28-32页 |
| ·转染用质粒的制备 | 第28-29页 |
| ·真核HEK293细胞的培养 | 第29页 |
| ·壳聚糖包裹重组质粒 | 第29-30页 |
| ·重组质粒转染HEK293细胞 | 第30-31页 |
| ·基因在真核HEK293细胞中表达的检测 | 第31-32页 |
| 3 结果 | 第32-37页 |
| ·壳聚糖纳米颗粒的形态、粒径及zeta电位 | 第32-34页 |
| ·凝胶阻滞分析 | 第34页 |
| ·RT-PCR结果 | 第34-35页 |
| ·Lys抗菌活性检测 | 第35-37页 |
| 4 讨论 | 第37-38页 |
| ·Lys基因真核表达的检测 | 第37页 |
| ·壳聚糖纳米颗粒包裹重组质粒VRL | 第37-38页 |
| ·VRL转染细胞的上清活性分析 | 第38页 |
| 参考文献 | 第38-43页 |
| 总结 | 第43-44页 |
| 综述 溶菌酶的研究及应用现状 | 第44-73页 |
| 1 溶菌酶的结构、作用机理及功能 | 第44-48页 |
| 2 溶菌酶的来源 | 第48-55页 |
| 3 溶菌酶的分离纯化方法 | 第55-59页 |
| 4 影响溶菌酶活性的因素 | 第59-61页 |
| 5 溶菌酶的应用 | 第61-64页 |
| 6 前景 | 第64页 |
| 参考文献 | 第64-73页 |
| 在读硕士阶段发表论文情况 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
