| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-31页 |
| ·马铃薯及晚疫病抗性概述 | 第12-14页 |
| ·抗病信息传递 | 第14-17页 |
| ·GTP结合蛋白 | 第17页 |
| ·小G蛋白 | 第17-18页 |
| ·Rab蛋白家族 | 第18-29页 |
| ·Rab蛋白结构 | 第18-22页 |
| ·Rab蛋白调节机制 | 第22-23页 |
| ·Rab蛋白功能 | 第23-29页 |
| ·本研究的内容、目的及意义 | 第29-31页 |
| 第2章 马铃薯小G蛋白StRab基因克隆及其序列分析 | 第31-49页 |
| ·前言 | 第31-32页 |
| ·材料与方法 | 第32-40页 |
| ·试验材料 | 第32页 |
| ·病原菌扩繁与活化 | 第32-34页 |
| ·离体叶片接种方法 | 第34页 |
| ·RNA抽提 | 第34-35页 |
| ·总RNA处理及cDNA第一链合成 | 第35-36页 |
| ·cDNA全长克隆 | 第36-40页 |
| ·基因序列分析 | 第40页 |
| ·生物信息学分析 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-47页 |
| ·马铃薯StRab基因的cDNA克隆与测序 | 第40-42页 |
| ·StRab系统进化分析 | 第42-43页 |
| ·StRab序列比较分析 | 第43-45页 |
| ·其它生物信息学分析 | 第45-47页 |
| ·讨论 | 第47-49页 |
| 第3章 马铃薯小G蛋白StRab在晚疫病抗性中的功能研究 | 第49-68页 |
| ·前言 | 第49页 |
| ·材料与方法 | 第49-60页 |
| ·感受态细胞制备 | 第50页 |
| ·超量表达载体的构建及转化 | 第50-52页 |
| ·干涉表达载体的构建及转化 | 第52-53页 |
| ·马铃薯遗传转化、再生和筛选 | 第53-54页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第54页 |
| ·转基因株系基因组DNA大量抽提 | 第54-55页 |
| ·转基因株系的southern检测 | 第55-58页 |
| ·转基因株系的表达分析(qPCR) | 第58-59页 |
| ·转基因株系的抗性鉴定 | 第59-60页 |
| ·结果与分析 | 第60-67页 |
| ·遗传转化载体构建分析 | 第60-61页 |
| ·转基因抗性株系的筛选与分子检测 | 第61-66页 |
| ·转基因株系的接种鉴定 | 第66-67页 |
| ·讨论 | 第67-68页 |
| 第4章 马铃薯小G蛋白StRab的亚细胞定位研究 | 第68-78页 |
| ·前言 | 第68-70页 |
| ·材料与方法 | 第70-73页 |
| ·StRab基因与gfp基因融合表达载体构建 | 第70-72页 |
| ·软件预测StRab蛋白的亚细胞定位 | 第72页 |
| ·洋葱表皮瞬时表达系统 | 第72页 |
| ·荧光观察 | 第72-73页 |
| ·结果与分析 | 第73-76页 |
| ·融合表达载体检测 | 第73-74页 |
| ·软件分析StRab的亚细胞定位 | 第74页 |
| ·StRab的亚细胞定位 | 第74-76页 |
| ·讨论 | 第76-78页 |
| 第5章 马铃薯小G蛋白StRab的互作蛋白研究 | 第78-97页 |
| ·前言 | 第78页 |
| ·材料与方法 | 第78-87页 |
| ·植物材料及处理 | 第78-79页 |
| ·叶片总RNA提取 | 第79-80页 |
| ·RNA质量检测 | 第80页 |
| ·RNA浓度检测 | 第80页 |
| ·mRNA分离方法 | 第80-81页 |
| ·mRNA质量及浓度检测 | 第81页 |
| ·cDNA第一链合成(反转录) | 第81页 |
| ·cDNA第二链合成 | 第81-82页 |
| ·ds cDNA纯化 | 第82-83页 |
| ·构建和筛选双杂交文库 | 第83页 |
| ·酵母感受态的制备 | 第83-84页 |
| ·转化酵母 | 第84-85页 |
| ·在SD/-Leu固体板上筛选转化子 | 第85页 |
| ·收转化子 | 第85页 |
| ·文库菌株与诱饵菌株的杂交 | 第85页 |
| ·表达互作蛋白的筛选(Ade~+和His~+的筛选) | 第85-86页 |
| ·对389个阳性斑的alpha-gal蓝白斑筛选(MEL1的筛选) | 第86页 |
| ·对74个阳性斑的进一步鉴定——beta-gal蓝白斑筛选(lacZ的筛选) | 第86-87页 |
| ·阳性斑的PCR检测,分析 | 第87页 |
| ·结果与分析 | 第87-95页 |
| ·材料处理 | 第87-88页 |
| ·总RNA完整性及浓度检测 | 第88页 |
| ·mRNA质量及浓度检测 | 第88-89页 |
| ·由第一链合成第二链时的循环数确定 | 第89-90页 |
| ·按确定的循环数合成的第二链检测 | 第90页 |
| ·第二链过柱后的检测 | 第90-91页 |
| ·文库检测 | 第91-92页 |
| ·阳性斑的筛选 | 第92-93页 |
| ·对389个阳性斑的alpha-gal蓝白斑筛选(MEL1的筛选)结果 | 第93页 |
| ·对74个阳性斑的进一步鉴定——beta-gal蓝白斑筛选(lacZ的筛选) | 第93-94页 |
| ·对阳性斑的PCR检测、测序分析 | 第94-95页 |
| ·讨论 | 第95-97页 |
| 第6章 讨论 | 第97-102页 |
| 参考文献 | 第102-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 附录1：StRab基因Genbank登录信息 | 第116-117页 |
| 附录2：超量表达载体构建流程 | 第117-118页 |
| 附录3：干涉表达载体构建流程 | 第118-119页 |
| 附录4：StRab与gfp融合表达载体构建流程 | 第119-120页 |
| 附录5：博士在读期间已发表的文章 | 第120页 |
