| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-41页 |
| ·均聚氨基酸简介 | 第15-16页 |
| ·γ-PGA的理化性质和应用研究 | 第16-21页 |
| ·γ-PGA的理化性质 | 第16-17页 |
| ·γ-PGA的应用 | 第17-21页 |
| ·γ-PGA在医药领域的应用 | 第17-19页 |
| ·γ-PGA在工业领域的应用 | 第19-21页 |
| ·γ-PGA合成方法 | 第21-25页 |
| ·化学合成法 | 第21-22页 |
| ·提取法制备γ-PGA | 第22页 |
| ·酶转化法 | 第22-23页 |
| ·微生物发酵法 | 第23-25页 |
| ·微生物中γ-PGA的生物合成途径及其代谢调控 | 第25-29页 |
| ·γ-PGA的生物合成途径 | 第25-26页 |
| ·γ-PGA合成酶的基因研究 | 第26-29页 |
| ·微生物发酵法生产γ-PGA的影响因素的研究 | 第29-32页 |
| ·外源性L-谷氨酸对γ-PGA生产的影响 | 第29-30页 |
| ·碳源对γ-PGA发酵产率的影响 | 第30页 |
| ·氮源对γ-PGA生产的影响 | 第30-31页 |
| ·金属离子对γ-PGA发酵生产的影响 | 第31页 |
| ·pH和供氧对γ-PGA发酵生产的影响 | 第31-32页 |
| ·γ-PGA分子量的控制 | 第32页 |
| ·发酵液中γ-PGA的分离纯化 | 第32-33页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第33-41页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第41-53页 |
| ·菌种与质粒 | 第41页 |
| ·仪器与试剂 | 第41-42页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·主要试剂及标准品 | 第41-42页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第42页 |
| ·培养基和培养条件 | 第42-43页 |
| ·主要培养基 | 第42页 |
| ·培养方法 | 第42-43页 |
| ·分析测定方法 | 第43-53页 |
| ·pH测定 | 第43页 |
| ·含菌量测定 | 第43页 |
| ·γ-PGA的提取 | 第43页 |
| ·γ-PGA的盐酸水解 | 第43页 |
| ·γ-PGA的加热水解 | 第43-44页 |
| ·γ-PGA的分子量测定方法 | 第44页 |
| ·γ-PGA测定方法 | 第44-48页 |
| ·酸水解法 | 第44-45页 |
| ·直接测定法 | 第45-46页 |
| ·HPCE测定法 | 第46-48页 |
| ·谷氨酸含量测定方法 | 第48-49页 |
| ·还原糖浓度测定 | 第49页 |
| ·蔗糖含量测定方法 | 第49-50页 |
| ·分子克隆相关实验 | 第50页 |
| ·Bacillus subtilis ZJU-7基因组的提取 | 第50页 |
| ·大肠杆菌细胞超声破碎及胞内蛋白提取 | 第50-51页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第51-53页 |
| 第三章 γ-PGA生产菌株的筛选和鉴定 | 第53-63页 |
| ·前言 | 第53页 |
| ·材料与方法 | 第53-56页 |
| ·分离菌种材料 | 第53页 |
| ·培养基 | 第53-54页 |
| ·培养条件 | 第54页 |
| ·γ-PGA生产菌株筛选 | 第54页 |
| ·菌种活化 | 第54页 |
| ·芽孢制备 | 第54页 |
| ·种子培养 | 第54页 |
| ·摇瓶培养 | 第54页 |
| ·产物鉴定 | 第54-55页 |
| ·产物分离纯化 | 第54-55页 |
| ·γ-PGA酸水解鉴定 | 第55页 |
| ·γ-PGA分子量的测定 | 第55页 |
| ·γ-PGA生产菌株的鉴定 | 第55页 |
| ·16s rDNA序列测定 | 第55页 |
| ·细菌总DNA提取 | 第55页 |
| ·16s rDNA的PCR扩增 | 第55页 |
| ·16s rDNA经PCR扩增产物的连接与转化 | 第55页 |
| ·质粒转化子的提取和鉴定 | 第55页 |
| ·其他生理生化性质测定 | 第55页 |
| ·γ-PGA生产菌株的初步培养 | 第55-56页 |
| ·实验结果与讨论 | 第56-61页 |
| ·γ-PGA生产菌株的筛选 | 第56页 |
| ·产物鉴定 | 第56-58页 |
| ·产物酸水解鉴定 | 第56-57页 |
| ·样品分子量测定 | 第57-58页 |
| ·样品其他性质测定 | 第58页 |
| ·γ-PGA生产菌株的分类学鉴定 | 第58-61页 |
| ·γ-PGA生产菌株16s rDNA测定 | 第58-60页 |
| ·Bacillus subtillis ZJU-7其他生理生化特征 | 第60-61页 |
| ·小结 | 第61-63页 |
| 第四章 Bacillus subtilis ZJU-7培养条件优化 | 第63-85页 |
| ·前言 | 第63页 |
| ·材料与方法 | 第63-65页 |
| ·菌种 | 第63页 |
| ·培养基和培养条件 | 第63-64页 |
| ·培养基 | 第63页 |
| ·培养方法 | 第63-64页 |
| ·Bacillus subtillis ZJU-7生长曲线测定 | 第64页 |
| ·培养条件优化 | 第64-65页 |
| ·单因素培养条件优化 | 第64页 |
| ·响应面培养条件优化(RSM) | 第64-65页 |
| ·部分析因设计(Fractional factorial design，FFD) | 第64-65页 |
| ·中心组合实验 | 第65页 |
| ·分析测定方法 | 第65页 |
| ·pH测定 | 第65页 |
| ·菌体OD_(600)及生物量测定 | 第65页 |
| ·γ-PGA的测定 | 第65页 |
| ·实验结果与讨论 | 第65-81页 |
| ·Bacillus subtillis ZJU-7生长曲线 | 第65-66页 |
| ·单因素培养条件优化 | 第66-73页 |
| ·碳源种类对γ-PGA产量的影响 | 第66-67页 |
| ·碳源浓度对γ-PGA产量的影响 | 第67-68页 |
| ·氮源种类对γ-PGA产量的影响 | 第68页 |
| ·氮源浓度对γ-PGA产量的影响 | 第68-69页 |
| ·谷氨酸前体对γ-PGA产量的影响 | 第69-70页 |
| ·NaCl对γ-PGA产量的影响 | 第70-71页 |
| ·温度对γ-PGA产量的影响 | 第71-72页 |
| ·摇床转速对γ-PGA产量的影响 | 第72页 |
| ·摇瓶装液量对γ-PGA产量的影响 | 第72-73页 |
| ·响应面法(RSM)优化γ-PGA培养条件 | 第73-81页 |
| ·部分析因实验设计 | 第75-77页 |
| ·最陡爬坡实验 | 第77页 |
| ·中心组合实验(CCD) | 第77-80页 |
| ·γ-PGA发酵培养过程 | 第80-81页 |
| ·小结 | 第81-85页 |
| 第五章 Bacillus subtilis ZJU-7分批发酵研究 | 第85-101页 |
| ·前言 | 第85页 |
| ·材料与方法 | 第85-86页 |
| ·菌株 | 第85页 |
| ·培养基 | 第85-86页 |
| ·培养方法 | 第86页 |
| ·测定方法 | 第86页 |
| ·结果与讨论 | 第86-98页 |
| ·pH对发酵过程的影响 | 第86-89页 |
| ·未控制pH的发酵过程 | 第86-87页 |
| ·控制pH对发酵过程的影响 | 第87-89页 |
| ·温度对发酵过程的影响 | 第89-90页 |
| ·搅拌转速对发酵过程的影响 | 第90-91页 |
| ·通气量对发酵过程的影响 | 第91-92页 |
| ·Bacillus subtilis ZJU-7分批发酵过程 | 第92-93页 |
| ·Bacillus subtilis ZJU-7发酵生产γ-PGA动力学模型 | 第93-98页 |
| ·菌体生长积累与γ-PGA的生长特性 | 第93页 |
| ·动力学模型的建立 | 第93-96页 |
| ·菌体生长动力学模型 | 第94页 |
| ·产物生成动力学模型 | 第94-95页 |
| ·底物消耗动力学模型 | 第95-96页 |
| ·动力学参数求解 | 第96页 |
| ·模型拟合分析 | 第96-98页 |
| ·小结 | 第98-101页 |
| 第六章 利用不同来源谷氨酸生产γ-聚谷氨酸 | 第101-119页 |
| ·前言 | 第101页 |
| ·实验材料与方法 | 第101-104页 |
| ·菌株 | 第101页 |
| ·仪器与试剂 | 第101-102页 |
| ·培养基 | 第102页 |
| ·Corynebacterium glutamicum S9114培养过程 | 第102页 |
| ·Bacillus subtilis ZJU-7发酵过程 | 第102-103页 |
| ·混合培养过程 | 第103页 |
| ·分析与测定 | 第103-104页 |
| ·发酵液中谷氨酸浓度的测定 | 第103页 |
| ·γ-PGA浓度的测定 | 第103页 |
| ·菌体生物量的测定 | 第103-104页 |
| ·谷氨酸棒杆菌发酵液中葡萄糖测定 | 第104页 |
| ·Bacillus subtilis ZJU-7发酵液中蔗糖含量测定 | 第104页 |
| ·结果与讨论 | 第104-116页 |
| ·Corynebacterium glutamicum S9114发酵过程 | 第104-105页 |
| ·Bacillus subtilis ZJU-7发酵过程 | 第105页 |
| ·混合培养条件优化 | 第105-112页 |
| ·种龄对混合培养体系的影响 | 第105-108页 |
| ·Corynebacterium glutamicum S9114种龄的影响 | 第106-107页 |
| ·Bacillus subtilis ZJU-7种龄的影响 | 第107-108页 |
| ·Bacillus subtilis ZJU-7加入量对混合培养体系的影响 | 第108页 |
| ·培养基对混合培养体系的影响 | 第108-109页 |
| ·温度对混合培养体系的影响 | 第109-110页 |
| ·溶氧对混合培养体系的影响 | 第110-111页 |
| ·混合培养过程 | 第111-112页 |
| ·利用谷氨酸发酵生产中间产物生产γ-PGA | 第112-116页 |
| ·谷氨酸棒杆菌发酵液中残糖的测定 | 第112-113页 |
| ·胰蛋白胨对不同谷氨酸替代前体生产γ-PGA的影响 | 第113-114页 |
| ·蔗糖对不同谷氨酸替代物生产γ-PGA的影响 | 第114-115页 |
| ·谷氨酸含量对于味精替代品生产γ-PGA的影响 | 第115-116页 |
| ·以谷氨酸发酵液为谷氨酸替代前体发酵过程 | 第116页 |
| ·小结 | 第116-119页 |
| 第七章 pgsBCA基因在大肠杆菌中的表达 | 第119-134页 |
| ·前言 | 第119-120页 |
| ·材料与方法 | 第120-123页 |
| ·菌株、质粒及引物 | 第120页 |
| ·培养基 | 第120页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第120页 |
| ·实验方法 | 第120-123页 |
| ·结果与讨论 | 第123-130页 |
| ·PCR扩增及测序结果 | 第123-127页 |
| ·PCR扩增结果 | 第123-126页 |
| ·pgsB、pgsC、pgsA连接测序结果 | 第126-127页 |
| ·pgsB、pgsC、pgsA连接与转化 | 第127-128页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌JM109中的表达 | 第128-130页 |
| ·pTrc99a-pgsBCA的转化 | 第129页 |
| ·pgsBCA在E.coli JM109／pTrc99a-pgsBCA中的表达 | 第129-130页 |
| ·表达产物鉴定 | 第130页 |
| ·小结 | 第130-134页 |
| 结论与展望 | 第134-138页 |
| 主要结论 | 第134-136页 |
| 展望 | 第136-138页 |
| 致谢 | 第138-140页 |
| 攻读博士学位期间科研成果 | 第140-141页 |
