中文摘要 | 第1-6页 |
英文摘要 | 第6-9页 |
符号、缩略语词表 | 第9-10页 |
第一部分 文献综述 | 第10-21页 |
第二部分 实验研究 | 第21-42页 |
1. 材料和方法 | 第21-31页 |
·实验材料 | 第21页 |
·实验动物 | 第21页 |
·主要仪器和试剂 | 第21页 |
·引物设计 | 第21页 |
·实验方法 | 第21-31页 |
·实验材料的处理 | 第21-22页 |
·总RNA的提取及检测 | 第22页 |
·反转录合成cDNA第一条链 | 第22-23页 |
·差异显示PCR | 第23页 |
·聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染 | 第23-24页 |
·目的片段的回收与再扩增 | 第24-25页 |
·PCR产物的纯化回收 | 第25页 |
·PCR产物的克隆 | 第25-27页 |
·Northern Blot 检测扩增片段的真实性 | 第27-29页 |
·差异片段的测序及分析 | 第29页 |
·载玻片的处理 | 第29页 |
·绵羊中期染色体制备 | 第29-30页 |
·染色体标本预处理 | 第30页 |
·变性及杂交 | 第30-31页 |
·杂交后处理 | 第31页 |
·杂交信号的检测 | 第31页 |
2 结果 | 第31-39页 |
·RNA样品的制备 | 第31-32页 |
·mRNA差异显示 | 第32-33页 |
·差异条带的二次扩增及其纯化 | 第33页 |
·目的基因的克隆筛选鉴定 | 第33-34页 |
·差异片段的序列分析 | 第34-35页 |
·探针敏感性检测 | 第35-36页 |
·Northern Blot 鉴定差异片段的真实性 | 第36-37页 |
·绵羊染色体中期图 | 第37-38页 |
·绵羊染色体原位杂交 | 第38-39页 |
3 讨论 | 第39-42页 |
·防止RNA酶的污染 | 第39页 |
·RNA质量与投入量对DDRT-PCR的影响 | 第39-40页 |
·mRNA差异显示技术假阳性的验证 | 第40-41页 |
·绵羊染色体制作时应注意的问题 | 第41-42页 |
结论 | 第42页 |
创新点 | 第42-43页 |
参考文献 | 第43-48页 |
附录 | 第48-52页 |
致谢 | 第52-53页 |
作者简历 | 第53-54页 |
导师评阅表 | 第54页 |