| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-33页 |
| 1．1 免疫抑制剂与雷帕霉素 | 第10页 |
| 1．2 雷帕霉素的理化性质及药理学特性 | 第10-12页 |
| 1．2．1 雷帕霉素的分子结构 | 第10-11页 |
| 1．2．2 雷帕霉素的理化性质 | 第11页 |
| 1．2．3 雷帕霉素的药理学特性 | 第11-12页 |
| 1．2．3．1 雷帕霉素抗移植排斥作用 | 第11页 |
| 1．2．3．2 雷帕霉素的免疫抑制机理 | 第11-12页 |
| 1．3 雷帕霉素的研究进展 | 第12-13页 |
| 1．4 雷帕霉素的合成途径 | 第13-15页 |
| 1．4．1 雷帕霉素的化学合成 | 第13页 |
| 1．4．2 雷帕霉素的生物合成 | 第13-15页 |
| 1．4．2．1 碳骨架来源 | 第13-14页 |
| 1．4．2．2 雷帕霉素生物合成基因簇 | 第14-15页 |
| 1．5 雷帕霉素的检测方法 | 第15页 |
| 1．5．1 细胞破碎的方法 | 第15页 |
| 1．5．2 生物活性测定法 | 第15页 |
| 1．5．3 薄层层析法(TLC) | 第15页 |
| 1．5．4 高效液相色谱法(HPLC) | 第15页 |
| 1．6 抗生素育种中的高通量的筛选方法 | 第15-16页 |
| 1．7 雷帕霉素产生菌的菌种选育 | 第16-27页 |
| 1．7．1 培养条件的优化 | 第16-21页 |
| 1．7．1．1 碳源 | 第16-18页 |
| 1．7．1．2 氮源 | 第18-19页 |
| 1．7．1．3 其他无机盐对菌体生长和产物形成的影响 | 第19-21页 |
| 1．7．2 诱变育种 | 第21-23页 |
| 1．7．2．1 菌种的诱变处理 | 第21-22页 |
| 1．7．2．2 抗性突变株的筛选 | 第22页 |
| 1．7．2．3 营养缺陷型突变株的筛选 | 第22-23页 |
| 1．7．3 原生质体技术 | 第23页 |
| 1．7．4 基因组重排技术 | 第23-27页 |
| 1．7．4．1 前言 | 第23-24页 |
| 1．7．4．2 代谢工程 | 第24页 |
| 1．7．4．3 DNA重排技术 | 第24-25页 |
| 1．7．4．4 全基因组重排技术 | 第25-26页 |
| 1．7．4．5 全基因组重排技术在菌种选育中的应用实例 | 第26-27页 |
| 1．8 本文的研究思路和研究内容 | 第27-29页 |
| 参考文献 | 第29-33页 |
| 第二章 材料与方法 | 第33-39页 |
| 2．1 实验材料 | 第33-34页 |
| 2．1．1 菌种 | 第33页 |
| 2．1．2 培养基组成 | 第33-34页 |
| 2．2 实验方法 | 第34-35页 |
| 2．2．1 培养条件 | 第34-35页 |
| 2．2．1．1 | 第34页 |
| 2．2．1．2 种子瓶培养条件 | 第34页 |
| 2．2．1．3 发酵瓶培养条件 | 第34-35页 |
| 2．3 分析方法 | 第35-39页 |
| 2．3．1 液相色谱法 | 第35-36页 |
| 2．3．1．1 样品预处理 | 第35页 |
| 2．3．1．2 高效液相色谱(HPLC)系统参数 | 第35页 |
| 2．3．1．3 绘制标准曲线 | 第35-36页 |
| 2．3．2 生物活性检测法 | 第36-37页 |
| 2．3．3 菌体浓度测定法 | 第37页 |
| 2．3．4 细胞干重的测定 | 第37页 |
| 2．3．5 原生质体的计数方法 | 第37-38页 |
| 2．3．6 原生质体再生率的计算方法 | 第38页 |
| 2．3．7 诱变育种致死率的计算方法 | 第38页 |
| 2．3．8 诱变育种突变率的计算方法 | 第38-39页 |
| 第三章 雷帕霉素发酵条件的优化 | 第39-53页 |
| 3．1 培养条件的优化 | 第39-52页 |
| 3．1．1 斜面培养基的选择 | 第39-40页 |
| 3．1．2 种子培养基的选择 | 第40-41页 |
| 3．1．3 种子菌龄的选择 | 第41-43页 |
| 3．1．3．1 种子生长曲线 | 第41-42页 |
| 3．1．3．2 种子菌龄对雷帕霉素产量的影响 | 第42-43页 |
| 3．1．4 发酵培养基的优化 | 第43-50页 |
| 3．1．4．1 碳源的影响 | 第43-44页 |
| 3．1．4．2 氮源的影响 | 第44-45页 |
| 3．1．4．3 前体的影响 | 第45-47页 |
| 3．1．4．4 缓冲液对产量的影响 | 第47页 |
| 3．1．4．5 培养基中磷酸盐的含量对雷帕霉素产量的影响 | 第47-48页 |
| 3．1．4．6 单独用KH_2PO_4做磷酸盐对产量的影响 | 第48-49页 |
| 3．1．4．7 培养基中NaCl含量对雷帕霉素产量的影响 | 第49页 |
| 3．1．4．8 培养基中Mg~(2+)含量对产量的影响 | 第49页 |
| 3．1．4．9 培养基中Fe~(2+)含量对产量的影响 | 第49-50页 |
| 3．1．5 摇瓶收获时间的选择 | 第50-51页 |
| 3．1．6 萃取条件优化 | 第51-52页 |
| 3．2 小结 | 第52-53页 |
| 第四章 高通量筛选方法的建立 | 第53-56页 |
| 4．1 引言 | 第53页 |
| 4．2 材料与方法 | 第53-54页 |
| 4．2．1 材料 | 第53页 |
| 4．2．2 方法 | 第53-54页 |
| 4．3 高通量筛选的流程图 | 第54-55页 |
| 4．4 高通量筛选过程中生物检定抑菌圈和摇瓶发酵液中雷帕霉素含量的相关性 | 第55页 |
| 4．5 高通量筛选在雷帕霉素育种过程中的应用 | 第55-56页 |
| 第五章 雷帕霉素产生菌的诱变育种 | 第56-63页 |
| 5．1 引言 | 第56页 |
| 5．2 材料与方法 | 第56-58页 |
| 5．2．1 菌种 | 第56页 |
| 5．2．2 抗性药物 | 第56页 |
| 5．2．3 种子培养基 | 第56页 |
| 5．2．4 雷帕霉素发酵培养基 | 第56-57页 |
| 5．2．5 方法 | 第57-58页 |
| 5．2．5．1 单孢子悬浮液的制备 | 第57页 |
| 5．2．5．2 菌种的诱变处理 | 第57页 |
| 5．2．5．3 抗性平板的选择 | 第57页 |
| 5．2．5．4 抗性菌筛选方法 | 第57-58页 |
| 5．3 结果与讨论 | 第58-62页 |
| 5．3．1 不同诱变剂的剂量效应 | 第58-59页 |
| 5．3．1．1 紫外诱变 | 第58页 |
| 5．3．1．2 DES诱变 | 第58-59页 |
| 5．3．1．3 NTG诱变 | 第59页 |
| 5．3．2 单一诱变剂连续使用 | 第59-60页 |
| 5．3．3 物理诱变剂和化学诱变剂交替诱变 | 第60-61页 |
| 5．3．4 物理诱变剂和化学诱变剂连续诱变 | 第61-62页 |
| 5．4 小结 | 第62-63页 |
| 第六章 原生质体技术 | 第63-78页 |
| 6．1 引言 | 第63页 |
| 6．2 材料与方法 | 第63-64页 |
| 6．2．1 材料 | 第63-64页 |
| 6．2．1．1 菌种 | 第63页 |
| 6．2．1．2 培养基 | 第63页 |
| 6．2．1．3 溶液 | 第63-64页 |
| 6．2．2 方法 | 第64页 |
| 6．2．2．1 菌丝体悬浮液的制备 | 第64页 |
| 6．2．2．2 原生质体制备和再生的方法 | 第64页 |
| 6．2．2．3 原生质体融合的方法 | 第64页 |
| 6．3 结果与讨论 | 第64-71页 |
| 6．3．1 原生质体制备和再生条件的优化 | 第64-70页 |
| 6．3．1．1 吸水链霉菌的菌丝生长曲线 | 第65页 |
| 6．3．1．2 菌龄对原生质体制备的影响 | 第65-66页 |
| 6．3．1．3 甘氨酸和蔗糖对原生质体形成的影响 | 第66-67页 |
| 6．3．1．4 溶菌酶作用时间、作用浓度及作用温度对原生质体制备的影响 | 第67-70页 |
| 6．3．2 原生质体再生的影响因素 | 第70-71页 |
| 6．3．2．1 接种来源 | 第70页 |
| 6．3．2．2 再生培养基 | 第70-71页 |
| 6．4 原生质体技术在雷帕霉素育种中的应用 | 第71-77页 |
| 6．4．1 原生质体诱变育种 | 第71-72页 |
| 6．4．2 原生质体单亲灭活 | 第72-73页 |
| 6．4．3． 双亲灭活 | 第73-74页 |
| 6．4．4． 种间原生质体融合的研究 | 第74-76页 |
| 6．4．4．1 红霉素菌的原生质体制备 | 第74-76页 |
| 6．4．5 基因组重排技术 | 第76-77页 |
| 6．5 小结 | 第77-78页 |
| 第七章 结论与展望 | 第78-81页 |
| 7．1 结论和创新点 | 第78-79页 |
| 7．1．1 主要结论 | 第78-79页 |
| 7．1．2 创新点 | 第79页 |
| 7．2 展望 | 第79-81页 |
| 论文发表情况 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
