1 前言 | 第1-41页 |
·香蕉概述 | 第11-12页 |
·香蕉的分类 | 第11页 |
·香蕉的生物学特性 | 第11-12页 |
·香蕉的经济价值 | 第12页 |
·果实成熟的生理学与分子生物学研究概述 | 第12-16页 |
·乙烯与果实成熟 | 第12-13页 |
·乙烯生物合成途径及其相关基因 | 第13-15页 |
·乙烯生物合成途径 | 第13-14页 |
·ACC合成酶(ACS)及其多基因家族 | 第14-15页 |
·ACC氧化酶及其多基因家族 | 第15页 |
·乙烯信号转导的研究进展 | 第15-16页 |
·香蕉果实采后生理学及分子生物学研究现状 | 第16-20页 |
·香蕉采后生理学的研究 | 第16页 |
·分离与鉴定香蕉采后成熟相关基因 | 第16-20页 |
·植物转录因子的研究进展 | 第20-25页 |
·植物转录因子的概念 | 第20页 |
·植物转录因子的结构 | 第20-21页 |
·植物转录因子活性的调控 | 第21页 |
·植物转录因子的作用 | 第21-24页 |
·植物转录因子与植物生长发育和形态建成 | 第21-22页 |
·植物转录因子与植物抗逆 | 第22-23页 |
·植物转录因子在高等植物改良上的应用 | 第23-24页 |
·植物转录因子的展望 | 第24-25页 |
·MADS-box基因的研究进展 | 第25-34页 |
·MADS-box的进化及分类 | 第25-26页 |
·MADS-box基因及MADS-box转录因子的结构 | 第26页 |
·MADS-box转录因子的作用原理 | 第26-27页 |
·MADS-box基因的作用 | 第27-34页 |
·MADS-box基因在花上的作用 | 第27-30页 |
·花发育的ABC模型 | 第27页 |
·调控开花时间 | 第27-30页 |
·MADS-box基因在果实上的作用 | 第30-34页 |
·MADS-box与胚珠的发育 | 第30-32页 |
·MADS-box与果实成熟 | 第32-33页 |
·MADS-box基因与果实开裂 | 第33-34页 |
·实时荧光定量PCR的研究进展 | 第34-38页 |
·实时荧光定量PCR的原理 | 第34-35页 |
·荧光定量PCR的特点 | 第35页 |
·实时荧光定量PCR的荧光化学 | 第35-37页 |
·实时荧光定量PCR的定量方法 | 第37-38页 |
·标准曲线法的相对定量 | 第37页 |
·比较Ct法的相对定量 | 第37-38页 |
·标准曲线法的绝对定量 | 第38页 |
·实时荧光定量PCR的应用 | 第38页 |
·本研究的目的和意义 | 第38-40页 |
·技术路线 | 第40-41页 |
2 材料与方法 | 第41-62页 |
·实验材料、试剂及仪器 | 第41-43页 |
·实验材料 | 第41页 |
·实验试剂 | 第41-42页 |
·实验仪器 | 第42-43页 |
·实验方法 | 第43-62页 |
·香蕉果实cDNA文库筛选 | 第43-46页 |
·引物的设计 | 第43页 |
·反应体系 | 第43-44页 |
·反应程序 | 第44页 |
·回收目的片段 | 第44页 |
·回收产物与T-Vector连接 | 第44-45页 |
·感受态受体菌的制备 | 第45页 |
·连接产物转化E. coli DH5α | 第45页 |
·碱法小量制备重组质粒 | 第45-46页 |
·酶切鉴定重组子 | 第46页 |
·全长克隆 | 第46-48页 |
·引物的设计 | 第46页 |
·反应体系 | 第46-47页 |
·反应程序 | 第47页 |
·PCR产物回收、连接 | 第47页 |
·转化、重组质粒的提取及鉴定 | 第47-48页 |
·Southern杂交分析 | 第48-53页 |
·香蕉基因组DNA的提取 | 第48-49页 |
·基因组DNA限制性内切酶消化 | 第49-50页 |
·探针的标记 | 第50-51页 |
·从质粒中扩增目的片段 | 第50页 |
·回收目的片段 | 第50-51页 |
·探针的标记 | 第51页 |
·DNA的印迹转移 | 第51-52页 |
·Southern杂交 | 第52-53页 |
·香蕉采后果实乙烯及呼吸强度的测定 | 第53页 |
·香蕉各成熟阶段的果实、根、茎叶及花的RNA的提取及反转录 | 第53-56页 |
·RNA的提取 | 第53-55页 |
·cDNA第一链的合成 | 第55-56页 |
·RT-PCR进行初步的表达分析 | 第56-57页 |
·引物设计 | 第56页 |
·反应体系 | 第56页 |
·反应程序 | 第56-57页 |
·实时荧光定量PCR进行表达分析 | 第57-62页 |
·目的基因的标准曲线的制备 | 第57-59页 |
·模板的制备 | 第57-59页 |
·实时荧光定量PCR | 第59页 |
·目的基因的实时荧光定量PCR | 第59-60页 |
·ACTIN基因的标准曲线的制备 | 第60-61页 |
·模板的制备 | 第60页 |
·实时荧光定量PCR | 第60-61页 |
·ACTIN基因的实时荧光定量PCR | 第61-62页 |
3 结果与分析 | 第62-89页 |
·香蕉果实cDNA文库筛选 | 第62-69页 |
·3’和5’的PCR扩增 | 第62-63页 |
·酶切鉴定 | 第63-64页 |
·序列的测定 | 第64-66页 |
·两个片段的blastx结果 | 第66-69页 |
·M2的blastx结果分析 | 第66-67页 |
·M3的blastx结果分析 | 第67-69页 |
·全长克隆 | 第69-77页 |
·PCR扩增 | 第69页 |
·重组质粒的酶切鉴定 | 第69-70页 |
·序列测定 | 第70-71页 |
·序列分析 | 第71-77页 |
·两端的序列与全长克隆的序列的比对 | 第71-74页 |
·blastx分析结果 | 第74-75页 |
·保守结构域的分析 | 第75页 |
·Gencan分析阅读框 | 第75-77页 |
·Southern杂交 | 第77-78页 |
·香蕉采后果实乙烯及CO_2的测定 | 第78-80页 |
·乙烯的测定 | 第78-79页 |
·CO_2的测定 | 第79-80页 |
·RNA的提取 | 第80页 |
·RT-PCR进行初步的表达分析 | 第80-81页 |
·实时荧光定量PCR | 第81-89页 |
·目的基因的标准曲线的制备 | 第81-82页 |
·目的基因的实时荧光定量PCR | 第82-84页 |
·ACTIN基因的标准曲线的制备 | 第84-85页 |
·ACTIN基因的实时荧光定量PCR | 第85-87页 |
·目的基因与ACTIN基因的比值 | 第87-89页 |
4 讨论 | 第89-97页 |
·关于所用的实验方法 | 第89-92页 |
·关于cDNA文库的筛选 | 第89-90页 |
·有关香蕉果实RNA的提取 | 第90页 |
·关于实时荧光定量PCR | 第90-92页 |
·关于序列分析 | 第92-95页 |
·关于基因MuMADS1的序列分析 | 第92-94页 |
·关于基因MuMADS1的聚类分析 | 第94-95页 |
·MuMADS1与乙烯生成及呼吸强度的关系 | 第95-97页 |
5 结论 | 第97-98页 |
参考文献 | 第98-108页 |
缩写词(Abbreviation) | 第108-109页 |
附录:测序图 | 第109-114页 |
致谢 | 第114页 |