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MADS-box基因的克隆及其在香蕉果实各成熟阶段的表达分析

1 前言第1-41页
   ·香蕉概述第11-12页
     ·香蕉的分类第11页
     ·香蕉的生物学特性第11-12页
     ·香蕉的经济价值第12页
   ·果实成熟的生理学与分子生物学研究概述第12-16页
     ·乙烯与果实成熟第12-13页
     ·乙烯生物合成途径及其相关基因第13-15页
       ·乙烯生物合成途径第13-14页
       ·ACC合成酶(ACS)及其多基因家族第14-15页
       ·ACC氧化酶及其多基因家族第15页
     ·乙烯信号转导的研究进展第15-16页
   ·香蕉果实采后生理学及分子生物学研究现状第16-20页
     ·香蕉采后生理学的研究第16页
     ·分离与鉴定香蕉采后成熟相关基因第16-20页
   ·植物转录因子的研究进展第20-25页
     ·植物转录因子的概念第20页
     ·植物转录因子的结构第20-21页
     ·植物转录因子活性的调控第21页
     ·植物转录因子的作用第21-24页
       ·植物转录因子与植物生长发育和形态建成第21-22页
       ·植物转录因子与植物抗逆第22-23页
       ·植物转录因子在高等植物改良上的应用第23-24页
     ·植物转录因子的展望第24-25页
   ·MADS-box基因的研究进展第25-34页
     ·MADS-box的进化及分类第25-26页
     ·MADS-box基因及MADS-box转录因子的结构第26页
     ·MADS-box转录因子的作用原理第26-27页
     ·MADS-box基因的作用第27-34页
       ·MADS-box基因在花上的作用第27-30页
         ·花发育的ABC模型第27页
         ·调控开花时间第27-30页
       ·MADS-box基因在果实上的作用第30-34页
         ·MADS-box与胚珠的发育第30-32页
         ·MADS-box与果实成熟第32-33页
         ·MADS-box基因与果实开裂第33-34页
   ·实时荧光定量PCR的研究进展第34-38页
     ·实时荧光定量PCR的原理第34-35页
     ·荧光定量PCR的特点第35页
     ·实时荧光定量PCR的荧光化学第35-37页
     ·实时荧光定量PCR的定量方法第37-38页
       ·标准曲线法的相对定量第37页
       ·比较Ct法的相对定量第37-38页
       ·标准曲线法的绝对定量第38页
     ·实时荧光定量PCR的应用第38页
   ·本研究的目的和意义第38-40页
     ·技术路线第40-41页
2 材料与方法第41-62页
   ·实验材料、试剂及仪器第41-43页
     ·实验材料第41页
     ·实验试剂第41-42页
     ·实验仪器第42-43页
   ·实验方法第43-62页
     ·香蕉果实cDNA文库筛选第43-46页
       ·引物的设计第43页
       ·反应体系第43-44页
       ·反应程序第44页
       ·回收目的片段第44页
       ·回收产物与T-Vector连接第44-45页
       ·感受态受体菌的制备第45页
       ·连接产物转化E. coli DH5α第45页
       ·碱法小量制备重组质粒第45-46页
       ·酶切鉴定重组子第46页
     ·全长克隆第46-48页
       ·引物的设计第46页
       ·反应体系第46-47页
       ·反应程序第47页
       ·PCR产物回收、连接第47页
       ·转化、重组质粒的提取及鉴定第47-48页
     ·Southern杂交分析第48-53页
         ·香蕉基因组DNA的提取第48-49页
       ·基因组DNA限制性内切酶消化第49-50页
       ·探针的标记第50-51页
         ·从质粒中扩增目的片段第50页
         ·回收目的片段第50-51页
         ·探针的标记第51页
       ·DNA的印迹转移第51-52页
       ·Southern杂交第52-53页
     ·香蕉采后果实乙烯及呼吸强度的测定第53页
     ·香蕉各成熟阶段的果实、根、茎叶及花的RNA的提取及反转录第53-56页
       ·RNA的提取第53-55页
       ·cDNA第一链的合成第55-56页
     ·RT-PCR进行初步的表达分析第56-57页
       ·引物设计第56页
       ·反应体系第56页
       ·反应程序第56-57页
     ·实时荧光定量PCR进行表达分析第57-62页
       ·目的基因的标准曲线的制备第57-59页
         ·模板的制备第57-59页
         ·实时荧光定量PCR第59页
       ·目的基因的实时荧光定量PCR第59-60页
       ·ACTIN基因的标准曲线的制备第60-61页
         ·模板的制备第60页
         ·实时荧光定量PCR第60-61页
       ·ACTIN基因的实时荧光定量PCR第61-62页
3 结果与分析第62-89页
   ·香蕉果实cDNA文库筛选第62-69页
     ·3’和5’的PCR扩增第62-63页
     ·酶切鉴定第63-64页
     ·序列的测定第64-66页
     ·两个片段的blastx结果第66-69页
       ·M2的blastx结果分析第66-67页
       ·M3的blastx结果分析第67-69页
   ·全长克隆第69-77页
     ·PCR扩增第69页
     ·重组质粒的酶切鉴定第69-70页
     ·序列测定第70-71页
     ·序列分析第71-77页
       ·两端的序列与全长克隆的序列的比对第71-74页
       ·blastx分析结果第74-75页
       ·保守结构域的分析第75页
       ·Gencan分析阅读框第75-77页
   ·Southern杂交第77-78页
   ·香蕉采后果实乙烯及CO_2的测定第78-80页
     ·乙烯的测定第78-79页
     ·CO_2的测定第79-80页
   ·RNA的提取第80页
   ·RT-PCR进行初步的表达分析第80-81页
   ·实时荧光定量PCR第81-89页
     ·目的基因的标准曲线的制备第81-82页
     ·目的基因的实时荧光定量PCR第82-84页
     ·ACTIN基因的标准曲线的制备第84-85页
     ·ACTIN基因的实时荧光定量PCR第85-87页
     ·目的基因与ACTIN基因的比值第87-89页
4 讨论第89-97页
   ·关于所用的实验方法第89-92页
     ·关于cDNA文库的筛选第89-90页
     ·有关香蕉果实RNA的提取第90页
     ·关于实时荧光定量PCR第90-92页
   ·关于序列分析第92-95页
     ·关于基因MuMADS1的序列分析第92-94页
     ·关于基因MuMADS1的聚类分析第94-95页
   ·MuMADS1与乙烯生成及呼吸强度的关系第95-97页
5 结论第97-98页
参考文献第98-108页
缩写词(Abbreviation)第108-109页
附录:测序图第109-114页
致谢第114页

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