| 原创性声明 | 第1页 |
| 学位论文版权使用授权书 | 第3-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 第一章 SARS冠状病毒分子生物学进展 | 第12-72页 |
| 一 SARS-CoV基因组学研究进展 | 第12-21页 |
| 二 SARS-CoV非结构蛋白质分子生物学研究进展 | 第21-30页 |
| ·SARS-CoV多聚蛋白的RNA加工酶类似物 | 第22-25页 |
| ·SARS-CoV特异蛋白酶 | 第25-29页 |
| ·SARS-CoV的PL2~(pro)酶 | 第26页 |
| ·SARS-CoV的3CL~(pro)蛋白酶 | 第26-29页 |
| ·SARS-CoV的其他非结构蛋白质 | 第29-30页 |
| 三 SARS-CoV主要结构蛋白质分子生物学 | 第30-48页 |
| ·SARS-CoV S蛋白质分子生物学 | 第30-41页 |
| ·S蛋白质概述 | 第30-31页 |
| ·S蛋白质受体结合功能与SARS-CoV的受体 | 第31-36页 |
| ·S蛋白质与膜融合 | 第36-38页 |
| ·S蛋白质分子免疫学和膜融合抑制肽 | 第38-41页 |
| ·S蛋白质其他细胞生理效应 | 第41页 |
| ·SARS-CoV N蛋白质分子生物学和分子免疫学 | 第41-45页 |
| ·SARS-CoV N蛋白质分子生物学 | 第41-44页 |
| ·SARS-CoV N蛋白质分子免疫学 | 第44-45页 |
| ·SARS-CoV E蛋白质和M蛋白质分子生物学 | 第45-48页 |
| ·SARS-CoV E蛋白质分子生物学 | 第45-47页 |
| ·SARS-CoV M蛋白质分子生物学 | 第47-48页 |
| 四 抗SARS-CoV疫苗及抗病毒药物研究 | 第48-59页 |
| ·SARS-CoV疫苗 | 第48-56页 |
| ·SARS-CoV灭活病毒疫苗 | 第49-50页 |
| ·SARS-CoV重组蛋白质疫苗与SARS-CoV病毒感染抑制性肽 | 第50-53页 |
| ·SARS-CoV DNA疫苗 | 第53-54页 |
| ·SARS-CoV DNA免疫与SARS病毒蛋白质疫苗联合应用 | 第54-55页 |
| ·SARS-CoV重组活载体疫苗 | 第55-56页 |
| ·干扰素和小分子治疗药物 | 第56-59页 |
| ·干扰素 | 第57页 |
| ·小分子治疗药物 | 第57-59页 |
| 五 SARS-CoV动物感染试验模型 | 第59-60页 |
| 六 结语 | 第60页 |
| 七 本章参考文献 | 第60-72页 |
| 第二章 SARS冠状病毒的分离培养和鉴定 | 第72-85页 |
| 一、材料和方法 | 第72-79页 |
| ·材料 | 第72-73页 |
| ·病毒分离标本和分离细胞 | 第72-73页 |
| ·试剂、载体、实验仪器和实验场所 | 第73页 |
| ·方法 | 第73-79页 |
| ·病毒的细胞分离培养 | 第73-75页 |
| ·细胞分离物的收获 | 第75页 |
| ·病毒培养物鉴定 | 第75-76页 |
| ·套式RT-PCR鉴定SASR-CoV特异性病毒RNA | 第76-77页 |
| ·特异性扩增片段的回收克隆和测序 | 第77-79页 |
| ·病毒的滴定 | 第79页 |
| 二、结果 | 第79-83页 |
| 1.病料接种培养的Vero细胞产生CPE现象 | 第79-80页 |
| 2.电镜观察到感染细胞培养上清中存在冠状病毒样粒子 | 第80页 |
| 3.病料接种Vero培养细胞与SARS病人康复期血清特异性结合 | 第80页 |
| 4.SARS-CoV病毒特异性核酸序列分析结果 | 第80-81页 |
| 5.分离的SARS-CoV病毒滴度一时间变化关系 | 第81-83页 |
| 三、讨论 | 第83-84页 |
| 四、小结 | 第84页 |
| 五、参考文献 | 第84-85页 |
| 第三章 SARS病人肺组织中SARS-COV全基因组CDNA克隆及序列分析 | 第85-113页 |
| 一、材料与方法 | 第85-89页 |
| ·材料 | 第85-86页 |
| ·RNA模板 | 第85页 |
| ·克隆引物 | 第85-86页 |
| ·PCR仪、工具酶和其他分子生物学常用试剂 | 第86页 |
| ·方法 | 第86-89页 |
| ·RNA模板提取 | 第86页 |
| ·SARS-CoV-5#全基因组cDNA克隆 | 第86-89页 |
| 二 结果 | 第89-92页 |
| 1.目的片段的克隆和重组质粒初步PCR鉴定 | 第89页 |
| 2.SARS-CoV-5#全基因组cDNA克隆测序 | 第89-92页 |
| 三、讨论 | 第92-96页 |
| 四、本章小结 | 第96页 |
| 五、参考文献 | 第96-97页 |
| 六、本章附录 | 第97-113页 |
| 1 本章附表 | 第97-100页 |
| 2.本章附录链接地址 | 第100-101页 |
| 3.SARS-CoV-5#测序结果 | 第101-113页 |
| 第四章 SARS冠状病毒结构蛋白质基因的表达及其病毒样颗粒的包装试验 | 第113-134页 |
| 一 材料和方法 | 第113-122页 |
| ·材料 | 第113-114页 |
| ·细胞、毒株 | 第113页 |
| ·试剂和抗体 | 第113-114页 |
| ·方法 | 第114-122页 |
| ·末端重叠拼接PCR法.人工合成密码子优化SASR-CoV结构蛋白质E基因 | 第114-115页 |
| ·末端重叠拼接PCR人工合成密码子优化SASR-CoV结构蛋白质M基因 | 第115-117页 |
| ·完整M基因组装和测序 | 第117页 |
| ·PCR方法在M基因C末端引入肽标签FLAG | 第117-118页 |
| ·表达SARS-CoV主要结构蛋白质基因重组杆状病毒载体的构建 | 第118-120页 |
| ·重组冠状病毒的包装和滴定 | 第120-121页 |
| ·感染重组杆状病毒的细胞内SARS-CoV结构蛋白质基因表达的检测 | 第121页 |
| ·重组杆状病毒感染Sf9细胞形成细胞内SARS-CoV VLP | 第121-122页 |
| 二、结果 | 第122-128页 |
| 1 优化密码子合成的M、E基因的鉴定 | 第122页 |
| 2 含SARS-CoV结构蛋白质基因杆状病毒重组转座质粒的构建 | 第122页 |
| 3 表达SARS-CoV结构蛋白质的重组杆状病毒的获得与鉴定 | 第122-126页 |
| 1) 重组杆状病毒基因组Bacmid的PCR鉴定 | 第122-125页 |
| 2) 重组杆状病毒基因组Bacmid细胞转染包装病毒 | 第125页 |
| 3) 重组杆状病毒表达SARS-CoV结构蛋白质的检测 | 第125-126页 |
| 4 SARS-CoV VLP的装配 | 第126-128页 |
| 三、讨论 | 第128-131页 |
| 四、本章小结 | 第131页 |
| 五、参考文献 | 第131-132页 |
| 六、本章附录 | 第132-134页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第134-135页 |
| 致谢 | 第135页 |
