| 中文摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 绪言 | 第10-36页 |
| 一、ESC的生物学基础 | 第10-15页 |
| (一) 干细胞与胚胎干细胞 | 第10-11页 |
| (二) ESC生物学特征 | 第11-14页 |
| (三) ESC的细胞增殖与生长 | 第14-15页 |
| 二、ESC的胚胎发育学基础 | 第15-21页 |
| (一) ESC的发育、决定及分化 | 第15-16页 |
| (二) ESC分化的调控 | 第16-18页 |
| (三) ESC诱导分化 | 第18-20页 |
| (四) 细胞周期与ESC分化 | 第20-21页 |
| 三、ESC定向神经分化的神经发育学基础 | 第21-24页 |
| (一) 体内诱导神经发生 | 第21-22页 |
| (二) 来源于ESC体外诱导神经发生 | 第22-23页 |
| (三) 外界因子与神经分化诱导 | 第23-24页 |
| 四、ESC定向诱导分化为神经细胞的研究现状 | 第24-27页 |
| (一) RA诱导ESC分化神经细胞 | 第25-26页 |
| (二) 无血清株系选择法诱导ESC分化神经细胞 | 第26-27页 |
| (三) 基因修饰法诱导ESC分化神经细胞 | 第27页 |
| 五、Aβ、NFkB信号通路与AD治疗的研究现状 | 第27-33页 |
| (一) Aβ代谢与AD病理机制 | 第28-30页 |
| (二)Aβ与神经元毒害：NFkB信号通路激活理论 | 第30-33页 |
| (三) NFKB信号通路调控与AD治疗 | 第33页 |
| 六、本研究的目的意义 | 第33-36页 |
| (一) ESC的细胞周期与神经诱导分化 | 第33-34页 |
| (二) bFGF在ESC神经分化中的作用 | 第34-35页 |
| (三) Aβ与ESC分化的神经元细胞中NFkB通路的活化 | 第35-36页 |
| 第二章 胚胎干细胞定向诱导分化神经细胞 | 第36-47页 |
| 一、前言 | 第36页 |
| 二、材料与方法 | 第36-38页 |
| (一) 试剂与材料 | 第36页 |
| (二) ESC分化培养 | 第36-37页 |
| (三) 免疫细胞化学检测 | 第37页 |
| (四) RT-PCR分析 | 第37-38页 |
| (五) 细胞内钙离子检测 | 第38页 |
| 三、实验结果 | 第38-45页 |
| (一) ESC体外分化的形态特征 | 第38-39页 |
| 实验结果表明，EBs的形成和RA处理是体外诱导神经细胞分化较为关键的 | 第39-40页 |
| (二) 分化神经细胞的神经特异抗原的表达 | 第40-42页 |
| (三) 分化神经细胞NMDA受体亚型的表达 | 第42页 |
| (四) 分化神经细胞Glu刺激兴奋性特征 | 第42-45页 |
| 四、讨论 | 第45-47页 |
| 第三章 细胞周期同步化对EBS分化潜能性的影响 | 第47-60页 |
| 一、前言 | 第47页 |
| 二、方法与材料 | 第47-50页 |
| (一) 试剂与材料 | 第47-48页 |
| (二) ESC的培养 | 第48页 |
| (三) EBs的形成 | 第48页 |
| (四) 细胞同步化方法 | 第48-49页 |
| (五) MTT检测 | 第49页 |
| (六) BrdU掺入检测 | 第49页 |
| (七) 免疫组织化学检测 | 第49页 |
| (八) FACS检测SSEA-1表达 | 第49-50页 |
| (九) RT-PCR检测oct-4表达 | 第50页 |
| (十) 数据分析 | 第50页 |
| 三、实验结果 | 第50-58页 |
| (一) 同步化处理对细胞周期的影响 | 第50-51页 |
| (二) 同步化处理对ESC增殖活性的影响 | 第51-52页 |
| (三) 同步化处理后重入细胞周期的变化 | 第52-55页 |
| (五) 血清饥饿同步化处理对EBs结构的影响 | 第55-56页 |
| (六) 血清饥饿同步化处理对神经分化的影响 | 第56-58页 |
| 四、讨论 | 第58-60页 |
| 第四章 bFGF触发ESC分化神经元的GLU释放研究 | 第60-69页 |
| 一、前言 | 第60页 |
| 二、材料与方法 | 第60-62页 |
| (一) 试剂与材料 | 第60-61页 |
| (二) ESC诱导神经元细胞分化培养 | 第61页 |
| (三) 海马神经元细胞离体培养 | 第61页 |
| (四) bFGF的刺激处理 | 第61页 |
| (五) HPLC检测 | 第61-62页 |
| (六) 胞内自由钙离子检测 | 第62页 |
| 三、实验结果 | 第62-67页 |
| (一) bFGF刺激不同阶段分化神经元后的GIu释放 | 第62-65页 |
| (二) bFGF刺激分化的神经元及海马神经元胞内[Ca~(2+)]变化 | 第65页 |
| (三) MK801拮抗bFGF刺激分化神经元胞内[Ca~(2+)]变化 | 第65-67页 |
| 四、讨论 | 第67-69页 |
| 第五章 Aβ引起ESC分化的神经元细胞NFKB通路的活化 | 第69-79页 |
| 一、前言 | 第69页 |
| 二、材料与方法 | 第69-72页 |
| (一) 试剂与材料 | 第69-70页 |
| (二) ESC的神经分化培养 | 第70页 |
| (三) Aβ_(1-42)团聚化处理 | 第70页 |
| (四) 免疫细胞化学检测 | 第70页 |
| (五) MTT分析 | 第70-71页 |
| (六) 细胞核提取物制备 | 第71页 |
| (七) 凝胶阻滞电泳分析(EMSA) | 第71页 |
| (八) 免疫印迹分析 | 第71-72页 |
| 二、试验结果 | 第72-76页 |
| (一) Aβ_(1-42)多肽刺激NFkB在诱导的神经元细胞中活化 | 第72-73页 |
| (二) p65／p50参与Aβ_(1-42)刺激引起NFkB的活化 | 第73-75页 |
| (三) Aβ_(1-42)刺激的NFkB活化具有分化时期的依赖性 | 第75-76页 |
| (四)Aβ_(1-42)处理降低分化神经元细胞的存活率 | 第76页 |
| 四、讨论 | 第76-79页 |
| 总结与展望 | 第79-83页 |
| 一、研究工作的总结 | 第79-80页 |
| 二、本研究主要的创新点 | 第80页 |
| 三、研究工作展望 | 第80-83页 |
| 参考文献 | 第83-96页 |
| 致谢 | 第96页 |
