| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1.实验材料 | 第11-16页 |
| ·材料和试剂 | 第11-16页 |
| ·材料 | 第11页 |
| ·主要试剂与酶类 | 第11-12页 |
| ·菌株和质粒 | 第12-14页 |
| ·常用缓冲溶液和培养基的配制 | 第14-16页 |
| ·主要仪器设备 | 第16页 |
| 2.实验方法 | 第16-29页 |
| ·血液组织处理 | 第16-17页 |
| ·总RNA的提取 | 第17页 |
| ·TSP-1-1和TSP-1-2基因的克隆 | 第17-21页 |
| ·PCR引物的设计 | 第17-18页 |
| ·RT-PCR | 第18-19页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第18页 |
| ·PCR反应 | 第18-19页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第19-20页 |
| ·JM109高效感受态制备 | 第19页 |
| ·PCR产物的回收 | 第19页 |
| ·PCR产物和pMD18-T vector载体的连接 | 第19-20页 |
| ·连接产物的转化 | 第20页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第20页 |
| ·重组子的序列测定 | 第20-21页 |
| ·TSP-1活性片段在大肠杆菌中的表达 | 第21-25页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第21-23页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第21页 |
| ·重组质粒T/TSP-1-1和T/TSP-1-2的提取及纯化 | 第21-22页 |
| ·pET-29a质粒的大量提取及纯化 | 第22-23页 |
| ·TSP-1-1和TSP-1-2与pET29a的连接 | 第23页 |
| ·TSP-1-1和TSP-1-2基因在大肠杆菌BL21中的诱导表达 | 第23-24页 |
| ·TSP-1-1和TSP-1-2多肽表达和样品的制备 | 第23-24页 |
| ·SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第24页 |
| ·目的蛋白表达条件的优化 | 第24页 |
| ·表达蛋白的可溶性分析和纯化 | 第24-25页 |
| ·细菌裂解和可溶性分析 | 第24-25页 |
| ·包涵体的洗涤与溶解 | 第25页 |
| ·CM纤维素阳离子交换柱纯化重组TSP-1-2多肽 | 第25页 |
| ·TSP-1活性片段在酵母中的表达 | 第25-29页 |
| ·真核表达载体的构建与酵母转化 | 第25-28页 |
| ·TSP-1-1和TSP-1-2与pPICZaA的连接 | 第25-26页 |
| ·pPICZaA/TSP-1-1和pPICZaA/TSP-1-1的线性化 | 第26页 |
| ·巴斯德毕赤酵母X-33感受态细胞的制备 | 第26页 |
| ·酵母细胞的电击转化法 | 第26-27页 |
| ·酵母细胞基因组DNA的提取 | 第27页 |
| ·转化酵母的基因组PCR检测 | 第27-28页 |
| ·TSP-1-1和TSP-1-2多肽在巴斯德毕赤酵母X-33中的诱导表达 | 第28-29页 |
| ·上清蛋白的表达和样品制备 | 第28页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析检测 | 第28-29页 |
| 3 结果 | 第29-38页 |
| ·TSP-1-1和TSP-1-2克隆和表达策略 | 第29-31页 |
| ·TSP-1-1和TSP-1-2 cDNA片段的克隆 | 第31-34页 |
| ·总RNA的制备 | 第31页 |
| ·引物的设计和合成 | 第31-32页 |
| ·TSP-1-1和TSP-1-2 cDNA片段的克隆和初步鉴定 | 第32-34页 |
| ·TSP-1-1和TSP-1-2 cDNA片段的克隆 | 第32页 |
| ·克隆产物的鉴定 | 第32-34页 |
| ·TSP-1-1和TSP-1-2基因在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第34-35页 |
| ·原核表达载体pET/TSP-1-1和pET/TSP-1-2的鉴定 | 第34页 |
| ·表达产物的电泳分析 | 第34-35页 |
| ·目的蛋白的分离与纯化 | 第35页 |
| ·TSP-1-1和TSP-1-2基因在酵母中的表达 | 第35-38页 |
| ·pPICZα A/TSP-1-1和pPICZα A/TSP-1-2的PCR鉴定 | 第35-36页 |
| ·X-33/TSP-1-1和X-33/TSP-1-2的PCR鉴定 | 第36-37页 |
| ·TSP-1-1和TSP-1-2多肽的诱导表达 | 第37-38页 |
| 4 讨论 | 第38-43页 |
| ·TSP-1-1和TSP-1-2cDNA片段的密码子偏爱性分析 | 第38-39页 |
| ·TSP-1活性片段在大肠杆菌中的表达 | 第39-41页 |
| ·TSP-1活性片段在酵母中的表达 | 第41-42页 |
| ·以后需要继续做的工作 | 第42-43页 |
| 5 小结 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 文献综述 | 第47-63页 |
| 综述：血小板反应素1的研究进展 | 第47-48页 |
| 摘要： | 第48-49页 |
| 1 引言 | 第49页 |
| 2 血管新生与肿瘤 | 第49-50页 |
| 3 血小板反应素1的结构： | 第50-52页 |
| ·TSP-1整体结构 | 第50-51页 |
| ·TSP-1主要抗血管生成部位的结构 | 第51-52页 |
| 4 血小板反应素1的功能： | 第52-56页 |
| ·TSP-1是内源性血管新生抑制剂 | 第52-53页 |
| ·TSP-1抑制血管新生的多重性 | 第53页 |
| ·TSP-1对血管新生的双向调节作用 | 第53页 |
| ·TSP-1对肿瘤血管生成的抑制作用极其可能机理 | 第53-56页 |
| ·TSP-1对肿瘤血管生成的抑制 | 第53-54页 |
| ·TSP-1抑制血管生成的可能机制 | 第54-56页 |
| 5 TSP-1在肾脏疾病中的研究 | 第56-57页 |
| 6 血小板反应素1的与其他蛋白质的作用 | 第57-59页 |
| ·血小板反应素1与CD36 | 第57-58页 |
| ·TSP-1与P53蛋白 | 第58-59页 |
| 7 TSP-1基因表达与调控 | 第59页 |
| 8 血小板反应素1的抗血管生成生物活性测定方法 | 第59-62页 |
| ·抑制内皮细胞生长的测定 | 第59-60页 |
| ·抑制血管内皮细胞运动迁移的测定 | 第60页 |
| ·抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的测定 | 第60页 |
| ·抑制小鼠肿瘤生长的测定 | 第60-61页 |
| ·利用肿瘤血管生成模型小鼠来观测血管的生长 | 第61页 |
| ·利用小鼠角膜来观察药物对血管生长的抑制 | 第61页 |
| ·通过放射自显影观察药物对血管生成的影响 | 第61-62页 |
| 9 血小板反应素1应用展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 在读期间科研成果简介 | 第70-71页 |
| 声明 | 第71页 |
