| 1 前言 | 第1-15页 |
| ·国内外技术现状及发展趋势(文献综述) | 第10-12页 |
| ·本课题的研究背景、目的和意义 | 第12-15页 |
| 2 水稻线粒体ATP合成酶6kDa亚基基因(RMtATP6)的分离、序列分析及同定 | 第15-20页 |
| ·实验材料 | 第15页 |
| ·植物材料 | 第15页 |
| ·实验试剂 | 第15页 |
| ·植物基因组DNA提取试剂 | 第15页 |
| ·Southern杂交试剂 | 第15页 |
| ·实验方法 | 第15-18页 |
| ·水稻根表达cDNA文库的建立与筛选 | 第15-16页 |
| ·DNA序列分析 | 第16页 |
| ·Southern杂交分析 | 第16-18页 |
| ·CTAB法提取植物基因组DNA | 第16页 |
| ·植物基因组DNA的限制性酶切及电泳分离 | 第16-17页 |
| ·转膜 | 第17页 |
| ·探针的标记 | 第17页 |
| ·Southern杂交 | 第17页 |
| ·洗膜与信号检测 | 第17-18页 |
| ·实验结果与分析 | 第18-20页 |
| ·RMtATP6基因的分离、序列分析及同定 | 第18-19页 |
| ·探针标记 | 第19页 |
| ·RMtATP6基因的Southern杂交分析 | 第19-20页 |
| 3 RMtATP6基因在碳酸盐逆境下的表达特性及在酵母中的表达及功能解析 | 第20-26页 |
| ·实验材料 | 第20页 |
| ·植物材料 | 第20页 |
| ·菌株和载体 | 第20页 |
| ·实验试剂 | 第20页 |
| ·RNA提取试剂 | 第20页 |
| ·主要培养基 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20-22页 |
| ·植物总RNA的提耿(Trizol Reagent一步提取法) | 第20-21页 |
| ·酵母表达质粒pYES2-RMtATP6的构建及酵母转化 | 第21页 |
| ·酵母总RNA的提取 | 第21页 |
| ·Northern杂交 | 第21-22页 |
| ·酵母的培养及生长曲线的制作 | 第22页 |
| ·实验结果与分析 | 第22-26页 |
| ·RMtATP6基因在碳酸盐逆境下的表达特性 | 第22页 |
| ·酵母表达质粒pYES2-RMtATP6的酶切鉴定 | 第22-23页 |
| ·RMtATP6基因在酵母中的表达及功能分析 | 第23-26页 |
| 4 RMtATP6基因编码的蛋白在酵母细胞中的定位 | 第26-31页 |
| ·实验材料 | 第26页 |
| ·菌株及载体 | 第26页 |
| ·实验试剂 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-27页 |
| ·质粒pYES2-EGFP和pYES2-RMtATP6-EGFP的构建 | 第26页 |
| ·酵母细胞的培养 | 第26页 |
| ·酵母活细胞的染色 | 第26-27页 |
| ·活细胞显微镜观察 | 第27页 |
| ·实验结果与分析 | 第27-31页 |
| ·质粒pYES2-EGFP和pYES2-RMtATP6-EGFP的鉴定 | 第27页 |
| ·RMtATP6基因编码的蛋白在酵母细胞中的定位 | 第27-31页 |
| 5 农杆菌介导转化法转化烟草 | 第31-36页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·植物材料 | 第31页 |
| ·菌株及载体 | 第31页 |
| ·实验试剂 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-33页 |
| ·PBI121-RMtATP6植物表达载体的构建 | 第31页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第31-32页 |
| ·菌株的活化及工程菌液的制备 | 第31-32页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第32页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第32页 |
| ·转基因植株的Southern杂交检测 | 第32-33页 |
| ·实验结果与分析 | 第33-36页 |
| ·植物表达质粒PBI121-RMtATP6的酶切签定 | 第33页 |
| ·烟草转化芽的获得及卡那霉素抗性分析 | 第33-34页 |
| ·转RMtATP6基因烟草的PCR检测 | 第34-35页 |
| ·转RMtATP6基因烟草的Southern杂交检测 | 第35-36页 |
| 6 RMtATP6基因的原核表达及融合蛋白的纯化 | 第36-41页 |
| ·实验材料 | 第36页 |
| ·菌株及质粒 | 第36页 |
| ·实验试剂 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-38页 |
| ·RMtATP6-GST融合基因的原核表达载体的构建 | 第36页 |
| ·RMtATP6-GST融合蛋白的小量诱导表达 | 第36-37页 |
| ·RMtATP6-GST融合蛋白的大量表达及纯化 | 第37页 |
| ·Westernblotting分析 | 第37-38页 |
| ·电转移 | 第37页 |
| ·蛋白的免疫检测 | 第37-38页 |
| ·实验结果与分析 | 第38-41页 |
| ·RMtATP6-GST融合基因原核表达载体的酶切鉴定 | 第38页 |
| ·RMtATP6-GST融合蛋白的表达 | 第38-39页 |
| ·RMtATP6-GST融合蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·Western blotting分析 | 第40-41页 |
| 7 结论与讨论 | 第41-44页 |
| ·水稻线粒体合成酶6kDa亚基基因的同定 | 第41页 |
| ·RMtATP6基因的定位 | 第41-42页 |
| ·RMtATP6基因与碳酸盐逆境的关系 | 第42-44页 |
| 参考文献 | 第44-51页 |
