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绵羊肺腺瘤病毒NM株基因组全序列的研究

1 引言第1-37页
   ·绵羊肺腺瘤病(OPA)概述第13-23页
     ·OPA的发现第13页
     ·OPA的流行病学第13-15页
     ·OPA的临床症状与病理变化第15-16页
     ·OPA病原的确立第16-18页
     ·OPA的诊断与防治第18-19页
     ·OPA的发病机理第19-22页
     ·目前急需解决的问题第22-23页
   ·绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)的分子生物学第23-35页
     ·JSRV的分类地位第23页
     ·JSRV的形态和理化性质第23-25页
     ·JSRV的细胞嗜性第25页
     ·毒株分类第25-26页
     ·JSRV基因组结构第26-27页
     ·JSRV的基因及其编码的蛋白第27-30页
     ·JSRV的复制、蛋白质的合成和形态发生第30-33页
     ·JSRV 受体第33页
     ·JSRV 内源性病毒第33-34页
     ·绵羊肺腺瘤(OPA)与人的细支气管肺泡癌(BAC)第34-35页
   ·结语第35-37页
2 研究一  绵羊肺腺瘤病毒NM株的分离与电镜观察第37-44页
 摘要第37-38页
   ·材料第38页
   ·方法第38-39页
     ·病毒悬液的制备第38页
     ·电镜样品的制备第38页
     ·绵羊胚胎肺原代细胞的培养第38-39页
     ·病毒的分离第39页
     ·培养液电镜负染色材料和透射电镜材料的制备与观察第39页
     ·含有JSRV接种物的培养细胞PCR检测第39页
   ·结果第39-42页
     ·电镜负染色技术观察结果第39-40页
     ·培养的胚胎肺细胞第40-41页
     ·超薄切片的电镜观察第41页
     ·含有JSRV接种物的培养细胞经PCR检测结果第41-42页
   ·讨论第42-44页
3 研究二 绵羊肺腺瘤病毒中国NM株前病毒基因组的克隆与全序列分析第44-93页
 摘要第44-46页
   ·材料第46-47页
     ·病毒材料、质粒和菌株第46-47页
     ·分子生物学试剂第47页
     ·引物设计第47页
   ·方法第47-51页
     ·含JSRV的肺肿瘤细胞总DNA的提取第47-48页
     ·JSRV基因组的分段扩增第48页
     ·JSRV基因组的克隆第48-49页
     ·重组子阳性质粒鉴定第49-50页
     ·测序第50页
     ·引用序列说明第50-51页
   ·结果第51-90页
     ·含JSRV的肺肿瘤细胞总DNA的提取第51页
     ·JSRV基因组分段扩增结果第51-52页
     ·重组质粒的鉴定第52-57页
     ·JSRV-NM株前病毒基因组全序列第57-61页
     ·JSRV-NM株前病毒基因组核苷酸序列与国外代表株序列的比较分析第61页
     ·JSRV-NM株前病毒基因组氨基酸序列与国外代表株序列的比较分析第61-63页
     ·JSRV-NM株前病毒基因组分子结构特征第63-90页
   ·讨论第90-93页
4 研究三 绵羊肺腺瘤病毒JSRV-2基因探针的制备与原位杂交检测第93-101页
 摘要第93-94页
   ·材料第94页
     ·实验材料第94页
     ·实验用主要试剂第94页
   ·方法第94-96页
     ·DIG标记DNA探针的制备第94-95页
     ·原位杂交处理第95-96页
   ·实验结果第96-99页
     ·标记DNA探针长度的检测第96-97页
     ·探针的特异性与灵敏度的检测第97页
     ·原位杂交检测结果第97-99页
   ·讨论第99-101页
5 研究四 绵羊肺腺瘤病毒NM株囊膜(env)基因的定向克隆与融合表达第101-111页
 摘要第101-102页
   ·材料与方法第102-105页
     ·质粒与菌株第102-103页
     ·工具酶和相关试剂第103页
     ·模板DNA的提取第103页
     ·PCR反应体系第103-104页
     ·PCR产物的纯化第104页
     ·克隆载体的构建与鉴定第104-105页
     ·表达载体的构建第105页
     ·诱导表达第105页
     ·SDS-PAGE电泳第105页
   ·结果第105-109页
     ·env基因的克隆结果第105-106页
     ·重组表达质粒的构建第106-109页
     ·env基因在大肠杆菌BL21的表达第109页
   ·讨论第109-111页
6 结论与展望第111-113页
致谢第113-114页
参考文献第114-127页
作者简介第127页

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