| 0 前言 | 第1-27页 |
| 一、 白介素10(IL-10)的性质 | 第9-14页 |
| 二、 基因治疗 | 第14-19页 |
| 三、 腺病毒载体及其在基因治疗中的应用 | 第19-26页 |
| 四、 立题依据及研究意义 | 第26-27页 |
| 1 实验材料 | 第27-29页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·仪器设备 | 第27页 |
| ·实验动物和细胞株 | 第27-28页 |
| ·质粒 | 第28-29页 |
| 2 实验方法 | 第29-36页 |
| ·刺激T细胞 | 第29页 |
| ·RNA分离纯化 | 第29页 |
| ·引物设计与合成 | 第29-30页 |
| ·反转录聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第30页 |
| ·构建mIL10-Tvector质粒，筛选阳性克隆及测序 | 第30-31页 |
| ·构建mIL10-pshuttle质粒，筛选阳性克隆 | 第31页 |
| ·构建mIL10-AdenoX质粒，筛选阳性克隆 | 第31页 |
| ·lacZ-pShuttle质粒用磷酸钙转染法转染HEK 293T细胞 | 第31-32页 |
| ·lacZ-pShuttle质粒的构建 | 第31页 |
| ·磷酸钙转染法转染HEK 293T细胞 | 第31-32页 |
| ·优化磷酸钙转染条件 | 第32-33页 |
| ·pH值和质粒纯度的影响 | 第32页 |
| ·转染后培养时间的优化 | 第32页 |
| ·休克时间的优化 | 第32-33页 |
| ·mIL10-AdenoX重组质粒用磷酸钙转染法转染HEK 293T细胞 | 第33-34页 |
| ·PacⅠ酶切mIL10-AdenoX重组质粒 | 第33页 |
| ·mIL10-AdenoX重组质粒转染HEK 293T细胞 | 第33-34页 |
| ·病毒的初级扩增 | 第34页 |
| ·病毒的扩增 | 第34页 |
| ·病毒的PCR鉴定 | 第34-35页 |
| ·终点稀释检测法检测病毒的滴度 | 第35页 |
| ·ELISA方法检测IL-10的表达及活性 | 第35-36页 |
| 3 实验结果 | 第36-49页 |
| ·RNA的提取纯化 | 第36页 |
| ·反转录聚合酶链式反应 | 第36-37页 |
| ·构建mIL10-Tvector质粒，筛选阳性克隆 | 第37-38页 |
| ·构建mIL10-pshuttle质粒，筛选阳性克隆 | 第38页 |
| ·构建mIL10-AdenoX质粒，筛选阳性克隆 | 第38-40页 |
| ·lacZ-pShuttle质粒的转染及X-gal染色 | 第40-41页 |
| ·优化磷酸钙转染条件 | 第41-46页 |
| ·pH值和质粒纯度对转染率的影响 | 第41-42页 |
| ·转染后培养时间的优化 | 第42-44页 |
| ·休克时间的优化 | 第44-46页 |
| ·病毒的制备和PCR鉴定 | 第46-47页 |
| ·终点稀释检测法检测病毒的滴度 | 第47-48页 |
| ·ELISA方法检测IL-10的表达及活性 | 第48-49页 |
| 4 结论与讨论 | 第49-50页 |
| 5 研究展望 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
