中文摘要 | 第1-7页 |
英文摘要 | 第7-9页 |
第一部分 文献综述 | 第9-31页 |
第一章 空肠弯曲杆菌感染流行病学研究进展 | 第9-14页 |
1 病原学 | 第9-10页 |
2 传染源 | 第10页 |
3 传播途径 | 第10-11页 |
4 感染范围 | 第11页 |
5 致病性 | 第11-12页 |
·空肠弯曲杆菌肠炎 | 第11-12页 |
·格林-巴利综合征 | 第12页 |
·对动物的致病性 | 第12页 |
6 治疗方法 | 第12-14页 |
第二章 空肠弯曲杆菌检测与基因分型的研究进展 | 第14-21页 |
1 空肠弯曲杆菌检测方法的研究进展 | 第14-17页 |
·常规生化检测方法 | 第14-15页 |
·ELISA(酶联免疫吸附试验)方法 | 第15页 |
·核酸探针杂交检测方法 | 第15页 |
·PCR方法 | 第15-17页 |
·定性PCR方法 | 第16页 |
·PCR-ELISA方法 | 第16页 |
·套式PCR(nested-PCR)方法 | 第16-17页 |
·荧光定量PCR方法 | 第17页 |
2 空肠弯曲杆菌基因分型方法的研究进展 | 第17-20页 |
·RFLP分型 | 第18页 |
·RAPD分型 | 第18页 |
·PFGE分型 | 第18-19页 |
·PCR-RFLP分型 | 第19页 |
·核糖体分型 | 第19页 |
·鞭毛蛋白基因(flaA和flaB)分型 | 第19-20页 |
·AFLP分型 | 第20页 |
3 小结 | 第20-21页 |
第三章 实时荧光定量PCR研究进展及其应用 | 第21-31页 |
1 实时定量RT-PCR的定量原理 | 第21页 |
2 常用的Real-time PCR仪 | 第21-24页 |
·PE公司生产的Applied Biosystem系列 | 第22-23页 |
·Roche公司生产的Lightcycler热循环仪 | 第23页 |
·Bio-rad公司生产的iCycler iQ | 第23页 |
·Strategene公司的MX4000 Multiplex | 第23页 |
·Cepheid公司的Smart Cycler System | 第23-24页 |
·Corbert Research公司的Rotor-Gene | 第24页 |
3 常用的探针种类 | 第24-25页 |
·水解探针或Taqman探针 | 第24页 |
·杂交探针 | 第24页 |
·SYBR Green I | 第24-25页 |
·分子信标(Molecular Beacons) | 第25页 |
·scorpions | 第25页 |
4 实时荧光定量PCR在病原微生物检测上的应用 | 第25-31页 |
第二部分 实验研究 | 第31-55页 |
试验一 应用PCR法和培养法调查食品和水中的空肠弯曲杆菌 | 第31-39页 |
1 材料与方法 | 第31-35页 |
·菌株 | 第31页 |
·培养基 | 第31-32页 |
·主要试剂及仪器 | 第32页 |
·PCR引物 | 第32页 |
·模板DNA的提取 | 第32-33页 |
·PCR扩增 | 第33页 |
·PCR扩增产物的鉴定 | 第33页 |
·电泳鉴定 | 第33页 |
·PCR产物的测序鉴定 | 第33页 |
·敏感性实验 | 第33页 |
·食品中人工布菌进行检测 | 第33-35页 |
·细菌的分离与增菌 | 第33-34页 |
·分离菌株的鉴定 | 第34-35页 |
·市场样品的调查 | 第35页 |
2 结果 | 第35-36页 |
·PCR方法的特异性 | 第35页 |
·PCR方法的敏感性 | 第35页 |
·人工布菌食品和水检测结果 | 第35-36页 |
·市场样品中空肠弯曲杆菌的调查结果 | 第36页 |
3 讨论 | 第36-37页 |
4 结论 | 第37-39页 |
试验二 基于SYBR Green I的Real-timePCR定量检测空肠弯曲杆菌方法的建立 | 第39-47页 |
1 材料与方法 | 第39-42页 |
·菌株 | 第39页 |
·培养基 | 第39-40页 |
·主要试剂及仪器 | 第40页 |
·引物选择与合成 | 第40页 |
·模板DNA的提取 | 第40-41页 |
·定量PCR扩增 | 第41页 |
·标准样品的制备 | 第41-42页 |
·细菌定量 | 第42页 |
2 结果 | 第42-43页 |
·定量PCR的特异性 | 第42页 |
·定量结果 | 第42页 |
·标准曲线 | 第42页 |
·定量PCR定量与细菌记数结果比较 | 第42页 |
·定量PCR的敏感性 | 第42-43页 |
3 讨论 | 第43-47页 |
试验三 基于TaqMan探针的Real-time PCR定量检测食品和水中的空肠弯曲杆的建立与应用 | 第47-55页 |
1 材料与方法 | 第47-50页 |
·菌株 | 第47-48页 |
·培养基 | 第48页 |
·主要试剂及仪器 | 第48页 |
·引物和TaqMan探针的设计与合成 | 第48-49页 |
·模板DNA的提取 | 第49页 |
·定量PCR扩增 | 第49-50页 |
·标准样品的制备 | 第50页 |
·食品样品中空肠弯曲杆菌的定量检测 | 第50页 |
2 结果 | 第50-51页 |
·定量PCR的特异性 | 第50页 |
·定量结果 | 第50-51页 |
·标准曲线 | 第50-51页 |
·定量PCR的敏感性 | 第51页 |
·食品样品中空肠弯曲杆菌定量检测结果 | 第51页 |
3 讨论 | 第51-55页 |
全文结论 | 第55-56页 |
参考文献 | 第56-62页 |
发表论文 | 第62-63页 |
致谢 | 第63页 |