| 摘要 | 第1-12页 |
| 前言 | 第12-21页 |
| 1 概述 | 第12页 |
| 2 NK4因子分子生物学研究 | 第12-16页 |
| 3 NK4因子生物学性质研究 | 第16-20页 |
| 4 NK4因子应用前景 | 第20-21页 |
| NK4因子基因重组 | 第21-42页 |
| 材料 | 第21-22页 |
| 方法 | 第22-30页 |
| 1 ) NK_4因子特异引物的设计 | 第22页 |
| 2 ) 模板序列测定 | 第22页 |
| 3 ) PCR扩增NK_4目的基因 | 第22-23页 |
| 4 ) 表达载体pGEX-4T-1鉴定 | 第23-25页 |
| 5 ) pGEX-4T-1-NK_4表达克隆的构建 | 第25-28页 |
| 6 ) Western-Blotting鉴定GST-NK4 | 第28-30页 |
| 结果 | 第30-40页 |
| 1 ) NK4因子特异引物的设计 | 第30-31页 |
| 2 ) 模板序列测定 | 第31-33页 |
| 3 ) PCR扩增NK4目的基因 | 第33页 |
| 4 ) 表达载体pGEX-4T-1鉴定 | 第33-34页 |
| 5 ) pGEX-4T-1-NK4表达克隆的构建 | 第34页 |
| 6 ) 阳性重组子的筛选与鉴定 | 第34-39页 |
| 7 ) 重组质粒pGEX-4T-1NK4在BL21中的表达 | 第39-40页 |
| 讨论 | 第40-41页 |
| 结论 | 第41-42页 |
| NK4因子原核表达条件的研究 | 第42-51页 |
| 材料 | 第42页 |
| 方法 | 第42-44页 |
| 1 ) pGEX-4T-1 NK4表达菌株BL21生长特性研究 | 第42页 |
| 2 ) pGEX-4T-1-NK4表达菌株BL21诱导起始时间的研究 | 第42页 |
| 3 ) pGEX-4T-1-NK4表达菌株BL21诱导持续时间的研究 | 第42-43页 |
| 4 ) IPTG浓度对pGEX-4T-1-NK4表达菌株BL21表达目的蛋白的影响 | 第43页 |
| 5 ) 培养基pH值对pGEX-4T-1-NK4表达菌株BL21表达目的蛋白的影响 | 第43页 |
| 6 ) 温度对pGEX-4T-1-NK4表达菌株BL21表达目的蛋白的影响 | 第43页 |
| 7 ) pGEX-4T-1-NK4表达菌株BL21表达目的蛋白表达形式分析 | 第43-44页 |
| 结果 | 第44-49页 |
| 1 ) pGEX-4T-1-NK4表达菌株BL21生长特性研究 | 第44-45页 |
| 2 ) pGEX-4T-1-NK4表达菌株BL21诱导起始时间的研究 | 第45页 |
| 3 ) pGEX-4T-1-NK4表达菌株BL21诱导持续时间的研究 | 第45-46页 |
| 4 ) IPTG浓度对pGEX-4T-1-NK4表达菌株BL21表达目的蛋白的影响 | 第46-47页 |
| 5 ) 培养基pH值对pGEX-4T-1-NK4表达菌株BL21表达目的蛋白的影响 | 第47-48页 |
| 6 ) 诱温度对pGEX-4T-1-NK4表达菌株BL21表达目的蛋白的影响 | 第48页 |
| 7 ) pGEX-4T-1-NK4表达菌株BL21表达目的蛋白表达形式分析 | 第48-49页 |
| 讨论 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| GST-NK4融合蛋白复性及纯化 | 第51-63页 |
| 材料 | 第51页 |
| 方法 | 第51-54页 |
| 1 ) GST-NK4包涵体的洗涤 | 第51-53页 |
| 2 ) GST-NK4融合蛋白包涵体复性 | 第53页 |
| ① Sephacryl S-200分子筛层析法复性 | 第53页 |
| ② 梯度稀释并透析法复性 | 第53页 |
| 3 ) GST-NK4融合蛋白的纯化 | 第53-54页 |
| 4 ) 凝血酶处理GST-NK4融合蛋白及凝血酶的去除 | 第54页 |
| 结果 | 第54-59页 |
| 1 ) GST-NK4包涵体的洗涤 | 第54-58页 |
| 2 ) GST NK4融合蛋白包涵体复性及纯化 | 第58-59页 |
| 3 ) 凝血酶处理GST-NK4融合蛋白及凝血酶的去除 | 第59页 |
| 讨论 | 第59-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 鸡胚绒毛尿囊膜实验测定NK4因子血管生成抑制作用 | 第63-68页 |
| 材料 | 第63页 |
| 方法 | 第63-65页 |
| 结果 | 第65-67页 |
| 讨论 | 第67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 正文参考文献 | 第69-72页 |
| 综述 PCR引物的优化设计 | 第72-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
