致谢 | 第1-5页 |
中文摘要 | 第5-8页 |
英文摘要 | 第8-15页 |
第一篇 文献综述 | 第15-41页 |
第一章 水稻抗病(纹枯病和稻瘟病)育种研究进展 | 第15-18页 |
1 利用传统育种方法提高水稻对纹枯病和稻瘟病的抗性 | 第15-17页 |
1.1 抗纹枯病传统育种 | 第15-16页 |
1.2 抗稻瘟病传统育种 | 第16-17页 |
2 水稻抗纹枯病和稻瘟病基因工程育种 | 第17-18页 |
第二章 利用植物来源的几丁质酶与葡聚糖酶基因提高植物的抗病性 | 第18-25页 |
1 植物几丁质酶的分类 | 第19-20页 |
2 植物葡聚糖酶的分类 | 第20页 |
3 植物几丁质酶和葡聚糖酶与植物防卫反应 | 第20-21页 |
4 植物来源几丁质酶与葡聚糖酶基因在抗病基因工程中的应用 | 第21-25页 |
第三章 木霉胞壁降解酶基因及其在生物防治中的应用 | 第25-37页 |
1 木霉胞壁降解酶的种类及其对病原菌的拮抗作用 | 第25-27页 |
1.1 木霉胞壁降解酶的种类和特征 | 第25-26页 |
1.2 木霉胞壁降解酶对病原菌的拮抗作用 | 第26-27页 |
2 木霉胞壁降解酶基因的种类和特征 | 第27-37页 |
2.1 种类 | 第27-29页 |
2.2 已克隆基因的序列特征 | 第29页 |
2.3 序列同源性 | 第29-30页 |
2.4 木霉胞壁降解酶基因的表达和调控 | 第30-33页 |
2.4.1 基因的诱导 | 第30-32页 |
2.4.2 胞壁降解酶表达的时间 | 第32页 |
2.4.3 与胞壁降解酶基因表达有关的顺式和反式作用因子 | 第32-33页 |
2.5 木霉胞壁降解酶基因在植病生防中的应用 | 第33-37页 |
2.5.1 利用木霉胞壁降解酶基因提高微生物的生防性能 | 第34页 |
2.5.2 利用木霉胞壁降解酶基因提高植物的抗病性 | 第34-37页 |
第四章 农杆菌介导法转化禾谷类作物的机理以及研究进展 | 第37-39页 |
1 农杆菌介导外源基因转化植物的机理 | 第37-38页 |
2 农杆菌介导的水稻遗传转化进展 | 第38-39页 |
第五章 本研究目的和内容 | 第39-41页 |
第二篇 研究报告 | 第41-107页 |
第一章 转基因水稻中ThEn-42基因的稳定遗传及其抗病性的提高 | 第41-56页 |
1 材料与方法 | 第41-47页 |
1.1 材料 | 第41-42页 |
1.1.1 植物材料 | 第41页 |
1.1.2 病原菌 | 第41-42页 |
1.1.3 转化载体 | 第42页 |
1.1.4 基因 | 第42页 |
1.1.5 主要化学试剂和仪器 | 第42页 |
1.1.6 培养基与缓冲液 | 第42页 |
1.2 方法 | 第42-47页 |
1.2.1 水稻总DNA的提取 | 第42-43页 |
1.2.2 转基因水稻的PCR检测 | 第43-44页 |
1.2.3 转基因水稻的Southern检测 | 第44-45页 |
1.2.4 转基因植株潮霉素抗性鉴定 | 第45页 |
1.2.5 转基因植株的抗病性鉴定 | 第45-47页 |
2 结果与分析 | 第47-53页 |
2.1 T1、T2代植株的潮霉素抗性以及PCR鉴定结果 | 第47-49页 |
2.1.1 潮霉素抗性鉴定 | 第47页 |
2.1.2 PCR鉴定 | 第47-49页 |
2.2 T1代植株的Southern检测 | 第49页 |
2.3 转基因植株的抗病性检测 | 第49-53页 |
2.3.1 对纹枯病的抗性 | 第49-51页 |
2.3.2 对稻瘟病的抗性 | 第51-53页 |
3 结论与讨论 | 第53-56页 |
第二章 多种木霉胞壁降解酶基因植物表达载体的构建 | 第56-73页 |
1 材料与方法 | 第56-62页 |
1.1 材料 | 第56-57页 |
1.1.1 菌株 | 第56页 |
1.1.2 原始质粒 | 第56-57页 |
1.1.3 化学试剂与酶类 | 第57页 |
1.2 方法 | 第57-62页 |
1.2.1 质粒DNA的酶切 | 第57-58页 |
1.2.2 DNA片断的回收 | 第58页 |
1.2.3 线性DNA的粘末端补平 | 第58-59页 |
1.2.4 连接反应 | 第59页 |
1.2.5 连接产物的转化 | 第59-60页 |
1.2.6 重组克隆的筛选和鉴定 | 第60页 |
1.2.7 植物表达载体的农杆菌转化 | 第60-61页 |
1.2.8 农杆菌转化子的酶切鉴定 | 第61页 |
1.2.9 重组转化子的PCR鉴定 | 第61-62页 |
2 结果与分析 | 第62-71页 |
2.1 对原始载体和中间载体的改造 | 第62页 |
2.2 pCAMBIA (nag)的构建 | 第62-63页 |
2.3 pCAMBIA (ech)和pCAMBIA (gluc)的构建 | 第63页 |
2.4 pCAMBIA (ech+nag)的构建 | 第63页 |
2.5 pCAMBIA (ech+gluc)、pCAMBIA (nag+gluc)和pCAMBIA (ech+nag+gluc)的构建 | 第63-70页 |
2.6 植物表达载体的酶切鉴定和PCR鉴定 | 第70-71页 |
3 讨论 | 第71-73页 |
第三章 多种木霉胞壁降解酶基因对水稻的遗传转化 | 第73-89页 |
1 材料与方法 | 第73-76页 |
1.1 材料 | 第73-75页 |
1.1.1 受体水稻品种 | 第73页 |
1.1.2 根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株 | 第73页 |
1.1.3 植物表达载体 | 第73页 |
1.1.4 目的基因 | 第73-74页 |
1.1.5 主要试剂和仪器 | 第74页 |
1.1.6 培养基与缓冲液 | 第74-75页 |
1.2 方法 | 第75-76页 |
1.2.1 根癌农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第75页 |
1.2.2 转化植株的分子鉴定 | 第75-76页 |
2 结果与分析 | 第76-87页 |
2.1 转基因的基本情况 | 第76-80页 |
2.2 不同表达载体对转化率和绿苗率的影响 | 第80-83页 |
2.2.1 外源基因数目和长度对转化的影响 | 第80页 |
2.2.2 不同基因对转化的影响 | 第80-83页 |
2.3 转基因植株的分子检测 | 第83-87页 |
2.3.1 PCR检测 | 第83-85页 |
2.3.2 Southern检测 | 第85-87页 |
3 讨论 | 第87-89页 |
第四章 木霉胞壁降解酶基因在水稻中的表达及其对水稻生长和抗病性的影响 | 第89-107页 |
1 材料与方法 | 第89-92页 |
1.1 材料 | 第89-90页 |
1.1.1 植物材料 | 第89-90页 |
1.1.2 外源基因 | 第90页 |
1.1.3 病原真菌 | 第90页 |
1.1.4 常用化学试剂、分子生物学试剂、缓冲液、抗生素及培养基配方 | 第90页 |
1.2 方法 | 第90-92页 |
1.2.1 转基因植株的酶活性测定 | 第90-91页 |
1.2.2 转基因植株的生长与抗病性鉴定 | 第91页 |
1.2.3 数据统计与分析 | 第91-92页 |
2 结果与分析 | 第92-102页 |
2.1 外源基因对再生植株成活率和生长的影响 | 第92-96页 |
2.2 转基因植株对水稻纹枯病的抗性 | 第96-101页 |
2.2.1 转单个胞壁降解酶基因植株中外源基因的表达及其抗病性 | 第96-101页 |
2.2.2 转多个胞壁降解酶基因植株对水稻纹枯病的抗性 | 第101页 |
2.3 转基因植株对稻瘟病的抗性 | 第101-102页 |
3 讨论 | 第102-107页 |
3.1 不同外源基因对转基因水稻生长的影响 | 第102-103页 |
3.2 外源基因在水稻中的表达 | 第103-105页 |
3.3 外源基因在提高水稻抗病性方面的作用 | 第105-106页 |
3.4 利用木霉胞壁降解酶基因提高水稻抗病性的可行性及前景 | 第106-107页 |
全文小结 | 第107-108页 |
参考文献 | 第108-115页 |
附录A 主要化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第115-117页 |
附录B 本文所用缩略词—中英文对照 | 第117-118页 |
附录C 主要培养基母液、缓冲液配方及配制方法 | 第118-123页 |