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利用生防木霉基因提高水稻抗病性研究

致谢第1-5页
中文摘要第5-8页
英文摘要第8-15页
第一篇 文献综述第15-41页
 第一章 水稻抗病(纹枯病和稻瘟病)育种研究进展第15-18页
  1 利用传统育种方法提高水稻对纹枯病和稻瘟病的抗性第15-17页
   1.1 抗纹枯病传统育种第15-16页
   1.2 抗稻瘟病传统育种第16-17页
  2 水稻抗纹枯病和稻瘟病基因工程育种第17-18页
 第二章 利用植物来源的几丁质酶与葡聚糖酶基因提高植物的抗病性第18-25页
  1 植物几丁质酶的分类第19-20页
  2 植物葡聚糖酶的分类第20页
  3 植物几丁质酶和葡聚糖酶与植物防卫反应第20-21页
  4 植物来源几丁质酶与葡聚糖酶基因在抗病基因工程中的应用第21-25页
 第三章 木霉胞壁降解酶基因及其在生物防治中的应用第25-37页
  1 木霉胞壁降解酶的种类及其对病原菌的拮抗作用第25-27页
   1.1 木霉胞壁降解酶的种类和特征第25-26页
   1.2 木霉胞壁降解酶对病原菌的拮抗作用第26-27页
  2 木霉胞壁降解酶基因的种类和特征第27-37页
   2.1 种类第27-29页
   2.2 已克隆基因的序列特征第29页
   2.3 序列同源性第29-30页
   2.4 木霉胞壁降解酶基因的表达和调控第30-33页
    2.4.1 基因的诱导第30-32页
    2.4.2 胞壁降解酶表达的时间第32页
    2.4.3 与胞壁降解酶基因表达有关的顺式和反式作用因子第32-33页
   2.5 木霉胞壁降解酶基因在植病生防中的应用第33-37页
    2.5.1 利用木霉胞壁降解酶基因提高微生物的生防性能第34页
    2.5.2 利用木霉胞壁降解酶基因提高植物的抗病性第34-37页
 第四章 农杆菌介导法转化禾谷类作物的机理以及研究进展第37-39页
  1 农杆菌介导外源基因转化植物的机理第37-38页
  2 农杆菌介导的水稻遗传转化进展第38-39页
 第五章 本研究目的和内容第39-41页
第二篇 研究报告第41-107页
 第一章 转基因水稻中ThEn-42基因的稳定遗传及其抗病性的提高第41-56页
  1 材料与方法第41-47页
   1.1 材料第41-42页
    1.1.1 植物材料第41页
    1.1.2 病原菌第41-42页
    1.1.3 转化载体第42页
    1.1.4 基因第42页
    1.1.5 主要化学试剂和仪器第42页
    1.1.6 培养基与缓冲液第42页
   1.2 方法第42-47页
    1.2.1 水稻总DNA的提取第42-43页
    1.2.2 转基因水稻的PCR检测第43-44页
    1.2.3 转基因水稻的Southern检测第44-45页
    1.2.4 转基因植株潮霉素抗性鉴定第45页
    1.2.5 转基因植株的抗病性鉴定第45-47页
  2 结果与分析第47-53页
   2.1 T1、T2代植株的潮霉素抗性以及PCR鉴定结果第47-49页
    2.1.1 潮霉素抗性鉴定第47页
    2.1.2 PCR鉴定第47-49页
   2.2 T1代植株的Southern检测第49页
   2.3 转基因植株的抗病性检测第49-53页
    2.3.1 对纹枯病的抗性第49-51页
    2.3.2 对稻瘟病的抗性第51-53页
  3 结论与讨论第53-56页
 第二章 多种木霉胞壁降解酶基因植物表达载体的构建第56-73页
  1 材料与方法第56-62页
   1.1 材料第56-57页
    1.1.1 菌株第56页
    1.1.2 原始质粒第56-57页
    1.1.3 化学试剂与酶类第57页
   1.2 方法第57-62页
    1.2.1 质粒DNA的酶切第57-58页
    1.2.2 DNA片断的回收第58页
    1.2.3 线性DNA的粘末端补平第58-59页
    1.2.4 连接反应第59页
    1.2.5 连接产物的转化第59-60页
    1.2.6 重组克隆的筛选和鉴定第60页
    1.2.7 植物表达载体的农杆菌转化第60-61页
    1.2.8 农杆菌转化子的酶切鉴定第61页
    1.2.9 重组转化子的PCR鉴定第61-62页
  2 结果与分析第62-71页
   2.1 对原始载体和中间载体的改造第62页
   2.2 pCAMBIA (nag)的构建第62-63页
   2.3 pCAMBIA (ech)和pCAMBIA (gluc)的构建第63页
   2.4 pCAMBIA (ech+nag)的构建第63页
   2.5 pCAMBIA (ech+gluc)、pCAMBIA (nag+gluc)和pCAMBIA (ech+nag+gluc)的构建第63-70页
   2.6 植物表达载体的酶切鉴定和PCR鉴定第70-71页
  3 讨论第71-73页
 第三章 多种木霉胞壁降解酶基因对水稻的遗传转化第73-89页
  1 材料与方法第73-76页
   1.1 材料第73-75页
    1.1.1 受体水稻品种第73页
    1.1.2 根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株第73页
    1.1.3 植物表达载体第73页
    1.1.4 目的基因第73-74页
    1.1.5 主要试剂和仪器第74页
    1.1.6 培养基与缓冲液第74-75页
   1.2 方法第75-76页
    1.2.1 根癌农杆菌介导的水稻遗传转化第75页
    1.2.2 转化植株的分子鉴定第75-76页
  2 结果与分析第76-87页
   2.1 转基因的基本情况第76-80页
   2.2 不同表达载体对转化率和绿苗率的影响第80-83页
    2.2.1 外源基因数目和长度对转化的影响第80页
    2.2.2 不同基因对转化的影响第80-83页
   2.3 转基因植株的分子检测第83-87页
    2.3.1 PCR检测第83-85页
    2.3.2 Southern检测第85-87页
  3 讨论第87-89页
 第四章 木霉胞壁降解酶基因在水稻中的表达及其对水稻生长和抗病性的影响第89-107页
  1 材料与方法第89-92页
   1.1 材料第89-90页
    1.1.1 植物材料第89-90页
    1.1.2 外源基因第90页
    1.1.3 病原真菌第90页
    1.1.4 常用化学试剂、分子生物学试剂、缓冲液、抗生素及培养基配方第90页
   1.2 方法第90-92页
    1.2.1 转基因植株的酶活性测定第90-91页
    1.2.2 转基因植株的生长与抗病性鉴定第91页
    1.2.3 数据统计与分析第91-92页
  2 结果与分析第92-102页
   2.1 外源基因对再生植株成活率和生长的影响第92-96页
   2.2 转基因植株对水稻纹枯病的抗性第96-101页
    2.2.1 转单个胞壁降解酶基因植株中外源基因的表达及其抗病性第96-101页
    2.2.2 转多个胞壁降解酶基因植株对水稻纹枯病的抗性第101页
   2.3 转基因植株对稻瘟病的抗性第101-102页
  3 讨论第102-107页
   3.1 不同外源基因对转基因水稻生长的影响第102-103页
   3.2 外源基因在水稻中的表达第103-105页
   3.3 外源基因在提高水稻抗病性方面的作用第105-106页
   3.4 利用木霉胞壁降解酶基因提高水稻抗病性的可行性及前景第106-107页
全文小结第107-108页
参考文献第108-115页
附录A 主要化学试剂、分子生物学试剂及仪器第115-117页
附录B 本文所用缩略词—中英文对照第117-118页
附录C 主要培养基母液、缓冲液配方及配制方法第118-123页

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