| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-20页 |
| ·SELEX 技术与核酸适配体 | 第10-12页 |
| ·SELEX 技术的原理和发展 | 第10-11页 |
| ·核酸适配体应用于医学领域的优势 | 第11-12页 |
| ·核酸适配体在医学领域的研究进展 | 第12-18页 |
| ·核酸适配体在临床诊断中的应用研究 | 第12-15页 |
| ·基于适配体的“夹心法”检测模式 | 第12页 |
| ·基于适配体的 PCR 放大检测技术 | 第12-13页 |
| ·核酸适配体生物芯片 | 第13页 |
| ·核酸适配体分子信标(MAB)检测技术 | 第13页 |
| ·适配体应用于流式细胞术 | 第13-14页 |
| ·基于适配体的分子成像诊断技术 | 第14-15页 |
| ·核酸适配体在疾病治疗中的应用 | 第15-18页 |
| ·抗病毒 | 第15页 |
| ·抗凝血 | 第15-16页 |
| ·抑制血管生成 | 第16页 |
| ·抗肿瘤 | 第16-17页 |
| ·适配体与自身免疫病的治疗 | 第17页 |
| ·基于适配体的靶向治疗 | 第17-18页 |
| ·问题与展望 | 第18页 |
| ·课题的目的、意义和技术路线 | 第18-20页 |
| 第2章 SELEX 技术筛选与 HIV-P24 结合的寡核苷酸 | 第20-31页 |
| ·材料与仪器 | 第20-23页 |
| ·寡核苷酸库和引物 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-21页 |
| ·相关溶液的配制 | 第21-22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·方法 | 第23-26页 |
| ·HIV-P24 样品检测 | 第23页 |
| ·HIV-P24 特异性寡核苷酸的筛选 | 第23-25页 |
| ·筛选 | 第23页 |
| ·酚氯仿抽提、乙醇沉淀回收 DNA | 第23页 |
| ·PCR 鉴定回收到的 DNA | 第23-24页 |
| ·不对称 PCR 制备 ssDNA 条件的摸索 | 第24-25页 |
| ·ssDNA 的制备与纯化 | 第25页 |
| ·下一轮筛选 | 第25页 |
| ·凝胶阻滞实验鉴定 P24-ssDNA 复合物 | 第25-26页 |
| ·[α 32P]dATP 标记的寡核苷酸 ssDNA 的制备 | 第25-26页 |
| ·凝胶阻滞实验 | 第26页 |
| ·结果 | 第26-29页 |
| ·HIV-P24 样品检测结果 | 第26-27页 |
| ·HIV-P24 特异性寡核苷酸筛选结果 | 第27-28页 |
| ·寡核苷酸 ssDNA 的制备结果 | 第28页 |
| ·凝胶阻滞实验 | 第28-29页 |
| ·讨论 | 第29-31页 |
| ·消减 SELEX 方案 | 第29页 |
| ·不对称 PCR 与 ssDNA 的制备 | 第29-30页 |
| ·凝胶阻滞实验 | 第30-31页 |
| 第3章 HIV-P24 特异寡核苷酸的克隆、鉴定和测序 | 第31-42页 |
| ·材料与仪器 | 第31-33页 |
| ·菌种和引物 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31-32页 |
| ·溶液和培养基 | 第32页 |
| ·主要仪器 | 第32-33页 |
| ·方法 | 第33-37页 |
| ·次级库寡核苷酸的克隆 | 第33-36页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第33页 |
| ·感受态细胞转化率的检测 | 第33-34页 |
| ·寡核苷酸 dsDNA 目的片段的制备 | 第34页 |
| ·寡核苷酸目的片段的连接 | 第34-35页 |
| ·连接产物的转化和克隆菌液的保存 | 第35页 |
| ·通用引物和特异引物交错 PCR 鉴定阳性克隆 | 第35-36页 |
| ·Dot-blot 筛选与 HIV-P24 结合的寡核苷酸配基 | 第36-37页 |
| ·阳性克隆配基 ssDNA 的制备 | 第36-37页 |
| ·Dot-blot 实验 | 第37页 |
| ·放射自显影 | 第37页 |
| ·吸光度值分析 | 第37页 |
| ·核酸适配体特异性检测 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-40页 |
| ·寡核苷酸的重组结果 | 第37-39页 |
| ·感受态细胞的转化率 | 第37-38页 |
| ·小片段 DNA 的转化结果 | 第38页 |
| ·阳性克隆的鉴定结果 | 第38-39页 |
| ·阳性克隆配基 ssDNA 的制备结果 | 第39页 |
| ·Dot-blot 筛选结果 | 第39-40页 |
| ·核酸适配体特异性检测结果 | 第40页 |
| ·特异性核酸适配体序列 | 第40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| ·寡核苷酸的克隆 | 第40-41页 |
| ·质粒重组和转化 | 第40页 |
| ·交错 PCR 鉴定阳性克隆 | 第40-41页 |
| ·斑点杂交实验 | 第41页 |
| ·特异性鉴定实验 | 第41-42页 |
| 全文总结 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 附录 A：英文缩略词 | 第48-50页 |
| 附录 B：pMD18-T 载体的结构和相关位点说明 | 第50-51页 |
| 附录 C：攻读学位期间所发表的学术论文 | 第51页 |
