| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-18页 |
| 缩略词表(ABBREVIATION) | 第18-21页 |
| 第一章 绪论 | 第21-44页 |
| ·3-羟基丙酸 | 第21-29页 |
| ·3-羟基丙酸的化学生产方法 | 第22页 |
| ·微生物转化法生产3-羟基丙酸 | 第22-23页 |
| ·3-羟基丙酸途径 | 第23-26页 |
| ·橙色绿屈挠菌中的3-羟基丙酸途径 | 第23-25页 |
| ·3-羟基丙酸途径的理论意义和潜在的生物技术应用 | 第25-26页 |
| ·基因工程菌生产3-羟基丙酸 | 第26-29页 |
| ·以葡萄糖为底物生产3-羟基丙酸工程菌的构建 | 第26-27页 |
| ·以甘油为底物生产3-羟基丙酸工程菌的构建 | 第27-29页 |
| ·2-羟基丙酸(乳酸) | 第29-33页 |
| ·乳酸的应用 | 第30-31页 |
| ·乳酸的生产 | 第31-33页 |
| ·乳酸生产菌株 | 第31页 |
| ·乳酸的工业化生产方法 | 第31-32页 |
| ·重组大肠杆菌生产乳酸 | 第32-33页 |
| ·聚乳酸 | 第33-40页 |
| ·PLA的结构及性能 | 第35-36页 |
| ·PLA的应用 | 第36-37页 |
| ·PLA的化学合成及工业生产 | 第37-38页 |
| ·PLA的微生物合成 | 第38-40页 |
| ·展望 | 第40-43页 |
| ·3-HP的生产 | 第40-41页 |
| ·乳酸的生产 | 第41-42页 |
| ·聚乳酸的生产 | 第42-43页 |
| ·论文的目的和意义 | 第43-44页 |
| 第二章 重组3-HP生产菌株的构建及其发酵验证 | 第44-65页 |
| ·材料与方法 | 第44-60页 |
| ·实验材料 | 第44-50页 |
| ·菌种和质粒 | 第44-45页 |
| ·引物序列 | 第45-46页 |
| ·培养基和主要溶液 | 第46-48页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第48-49页 |
| ·实验仪器 | 第49-50页 |
| ·实验流程 | 第50-51页 |
| ·实验方法 | 第51-59页 |
| ·引物设计 | 第51页 |
| ·质粒提取 | 第51-53页 |
| ·PCR片段的扩增及回收 | 第53-55页 |
| ·载体及PCR片段的限制性内切酶消化 | 第55页 |
| ·载体DNA和PCR片段酶切产物的回收 | 第55-56页 |
| ·载体DNA与PCR片段酶切产物的连接 | 第56页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第56-57页 |
| ·转化 | 第57页 |
| ·重组子的筛选与验证 | 第57-59页 |
| ·培养方法 | 第59-60页 |
| ·种子培养 | 第59页 |
| ·重组菌株的发酵 | 第59-60页 |
| ·发酵产物的GC检测 | 第60页 |
| ·样品检测前处理 | 第60页 |
| ·样品的GC检测分析 | 第60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-64页 |
| ·PCR扩增mcr基因 | 第60-61页 |
| ·质粒pET-28a-mcr的构建 | 第61-63页 |
| ·重组菌株DE3/pET-28a-mcr的构建 | 第63页 |
| ·重组菌株DE3/pET-28a-mcr发酵生产3-HP | 第63-64页 |
| ·本章小结 | 第64-65页 |
| 第三章 高产2-羟基丙酸(乳酸)重组大肠杆菌的构建及其发酵研究 | 第65-98页 |
| ·材料与方法 | 第65-77页 |
| ·实验材料 | 第65-70页 |
| ·菌种和质粒 | 第65页 |
| ·基因敲除所需引物和检测引物 | 第65-68页 |
| ·培养基和主要溶液 | 第68-69页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第69页 |
| ·实验仪器 | 第69-70页 |
| ·实验流程 | 第70-71页 |
| ·实验方法 | 第71-75页 |
| ·引物设计 | 第71页 |
| ·质粒提取 | 第71页 |
| ·PCR片段的扩增及回收 | 第71页 |
| ·PCR片段的DpnI酶切处理 | 第71页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第71-72页 |
| ·转化 | 第72-73页 |
| ·Red同源重组 | 第73-74页 |
| ·重组子的筛选与验证 | 第74页 |
| ·抗性基因的去除 | 第74-75页 |
| ·培养方法 | 第75-76页 |
| ·种子培养 | 第75页 |
| ·发酵培养 | 第75-76页 |
| ·分析测定方法 | 第76-77页 |
| ·OD_(600)的测定 | 第76页 |
| ·葡萄糖含量的测定 | 第76页 |
| ·发酵产物的HPLC检测 | 第76-77页 |
| ·结果与讨论 | 第77-95页 |
| ·重组乳酸生产菌株的构建 | 第77-86页 |
| ·pKD3、pKD4、pCP20、pKD46质粒的提取 | 第77-78页 |
| ·用于基因敲除的外源DNA片段的PCR扩增 | 第78-79页 |
| ·SD2[W3110,(△focA-pflB)::FRT]重组菌株的构建 | 第79-82页 |
| ·SD4[W3110,(△focA-pflB)::FRT △adhE::FRT]重组菌株的构建 | 第82-83页 |
| ·SD6[W3110,(△focA-pflB)::FRT △ptsG::FRT]重组菌株的构建 | 第83-84页 |
| ·SD8[W3110,(△focA-pflB)::FRT △ptsG::FRT △adhE::FRT]重组菌株的构建 | 第84-86页 |
| ·重组乳酸生产菌株的发酵培养及产物分析 | 第86-95页 |
| ·pflB基因的敲除对重组大肠杆菌生产乳酸的影响 | 第86-87页 |
| ·adhE基因的敲除对重组大肠杆菌生产乳酸的影响 | 第87页 |
| ·ptsG基因的敲除对重组大肠杆菌生产乳酸的影响 | 第87-89页 |
| ·培养基组成对重组大肠杆菌生产乳酸的影响 | 第89页 |
| ·K~+对重组大肠杆菌生产乳酸的影响 | 第89-91页 |
| ·底物的还原态和还原剂对重组大肠杆菌生产乳酸的影响 | 第91-94页 |
| ·厌氧程度对重组大肠杆菌生产乳酸的影响 | 第94-95页 |
| ·本章小结 | 第95-98页 |
| 第四章 一步法生物合成聚乳酸的初步探索 | 第98-112页 |
| ·材料与方法 | 第98-103页 |
| ·实验材料 | 第98-101页 |
| ·菌种和质粒 | 第98页 |
| ·引物序列 | 第98-100页 |
| ·培养基和主要溶液 | 第100页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第100页 |
| ·实验仪器 | 第100-101页 |
| ·实验流程 | 第101-102页 |
| ·实验方法 | 第102页 |
| ·培养方法 | 第102-103页 |
| ·种子培养 | 第102页 |
| ·重组菌株的厌氧发酵 | 第102页 |
| ·重组菌株的好氧发酵 | 第102-103页 |
| ·丙酮-氯仿法提取聚合物 | 第103页 |
| ·聚合物的GC检测 | 第103页 |
| ·样品检测前处理 | 第103页 |
| ·样品的GC检测分析 | 第103页 |
| ·结果与讨论 | 第103-110页 |
| ·PCR扩增pct基因 | 第103-104页 |
| ·质粒pBBR1pct的构建 | 第104-105页 |
| ·PCR扩增phaEC基因 | 第105页 |
| ·质粒pBBR1pctEC的构建 | 第105-108页 |
| ·重组菌株DH5α/pBBR1pctEC+pBHR69的构建 | 第108页 |
| ·重组菌株DH5α/pBBR1pctEC+pBHR69好氧发酵生产P(LA-co-3HB) | 第108-109页 |
| ·重组菌株DH5α/pBBR1pctEC+pBHR69厌氧发酵生产P(LA-co-3HB) | 第109-110页 |
| ·本章小结 | 第110-112页 |
| 全文总结 | 第112-116页 |
| 参考文献 | 第116-123页 |
| 致谢 | 第123-125页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第125-126页 |
| 外文写作一 | 第126-142页 |
| References | 第133-142页 |
| 外文写作二 | 第142-155页 |
| References | 第148-155页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第155页 |
