| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| ·手性药物 | 第12页 |
| ·手性化合物的获得 | 第12-14页 |
| ·手性源 | 第12-13页 |
| ·消旋体拆分 | 第13页 |
| ·不对称合成 | 第13-14页 |
| ·生物催化羰基不对称还原生成手性醇 | 第14-20页 |
| ·生物催化羰基不对称合成手性醇的反应机理 | 第15页 |
| ·生物催化羰基不对称合成手性醇的微生物或酶 | 第15-16页 |
| ·氢供体与辅酶再生 | 第16页 |
| ·辅酶再生系统 | 第16-17页 |
| ·全细胞催化与酶催化的比较 | 第17页 |
| ·改善生物催化羰基不对称还原反应立体选择性的方法 | 第17-20页 |
| ·本实验要做的工作 | 第20-23页 |
| 第二章 材料和方法 | 第23-36页 |
| ·材料 | 第23-26页 |
| ·菌种 | 第23页 |
| ·质粒 | 第23页 |
| ·培养基及其培养条件 | 第23页 |
| ·主要溶液的配置 | 第23-24页 |
| ·工具酶 | 第24-25页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第25-26页 |
| ·仪器设备 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-36页 |
| ·糖多孢红霉菌的DNA 大量提取 | 第26-27页 |
| ·枯草芽孢杆菌的基因组DNA 的提取 | 第27页 |
| ·DNA 的PCR 扩增 | 第27-29页 |
| ·DNA 的琼脂糖凝胶电泳 | 第29-30页 |
| ·DNA 的回收纯化 | 第30页 |
| ·质粒的提取 | 第30-31页 |
| ·PCR 回收纯化片段和pET-28a 质粒的双酶切 | 第31-32页 |
| ·片段的连接 | 第32页 |
| ·大肠杆菌DH5α/BL21 感受态细胞的制备和转化 | 第32-33页 |
| ·挑选菌落，提取重组质粒pET-KR1，pET-KR1M 和pET-GDH | 第33页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第33页 |
| ·将重组质粒转化到BL21 感受态细胞中（同2.2.8） | 第33页 |
| ·SDS-PAGE 电泳上样样品的制备 | 第33-34页 |
| ·SDS 聚丙烯酰胺凝胶的制备 | 第34页 |
| ·凝胶的染色和脱色 | 第34-35页 |
| ·发酵种子的培养 | 第35页 |
| ·酶的诱导 | 第35页 |
| ·底物的还原 | 第35页 |
| ·发酵产物的提取和气谱初步检测 | 第35-36页 |
| 第三章 重组质粒 pET-GDH 的构建 | 第36-44页 |
| ·葡萄糖脱氢酶（GDH）的PCR 扩增及电泳检测 | 第36-39页 |
| ·枯草芽孢杆菌基因组DNA 的提取及检测 | 第36-37页 |
| ·引物设计 | 第37页 |
| ·PCR 产物和纯化产物的电泳图 | 第37-38页 |
| ·酶切回收产物GDH 与载体pET-28a 的连接及双酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·GDH 的结果比对 | 第39-42页 |
| ·SDS-PAGE 检测产物蛋白量 | 第42-44页 |
| 第四章 重组质粒 pET-eryKR1 的构建 | 第44-50页 |
| ·PCR 扩增目的基因及电泳检测 | 第44-47页 |
| ·糖多孢红霉菌基因组DNA 的提取 | 第44页 |
| ·引物设计 | 第44-45页 |
| ·PCR 扩增产物及电泳图 | 第45-46页 |
| ·pET-ERY 重组质粒的提取和双酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·测序结果比对 | 第47-49页 |
| ·SDS-PAGE 检测蛋白表达量 | 第49-50页 |
| 第五章 重组质粒 pET-KR1M 的构建 | 第50-58页 |
| ·PCR 扩增目的基因及电泳检测 | 第50-53页 |
| ·糖多孢红霉菌基因组DNA 的提取 | 第50页 |
| ·引物设计 | 第50页 |
| ·PCR 扩增产物及电泳检测 | 第50-52页 |
| ·PCR 片段和质粒pET-28a 的双酶切和所需片段回收与连接 | 第52页 |
| ·转化后质粒的提取和双酶切鉴定 | 第52-53页 |
| ·测序结果比对 | 第53-55页 |
| ·SDS-PAGE 检测蛋白质的表达量 | 第55-56页 |
| ·有关构建基因工程菌的几点讨论 | 第56-58页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第56页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第56页 |
| ·小片段DNA 的琼脂糖凝胶电泳 | 第56页 |
| ·质粒的提取 | 第56页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第56-57页 |
| ·连接转化 | 第57页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶的脱色 | 第57-58页 |
| 第六章 重组菌的发酵 | 第58-61页 |
| ·底物为环己酮的发酵结果 | 第58-59页 |
| ·底物为COBE 的发酵结果 | 第59页 |
| ·底物为苯乙酮的发酵结果 | 第59-60页 |
| ·底物为2-辛酮的发酵结果 | 第60-61页 |
| 第七章 结论 | 第61-63页 |
| ·本实验取得的实验结果 | 第61-62页 |
| ·对实验的展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者在读期间发表的相关论文 | 第69-70页 |
| 附图 | 第70-79页 |
