| 内容提要 | 第1-5页 |
| 英文缩写词表 | 第5-9页 |
| 引言 | 第9-11页 |
| 第一篇 文献综述 | 第11页 |
| 第一章 Cre/LoxP 重组酶系统及其在转基因方面的应用 | 第11-22页 |
| 1. Cre 重组酶 | 第12-15页 |
| ·Cre 重组酶的结构 | 第13页 |
| ·Cre 重组酶的修饰与改造 | 第13页 |
| ·LoxP 位点 | 第13-14页 |
| ·Cre 重组酶的作用方式 | 第14-15页 |
| 2. Cre/LoxP 重组酶系统的应用 | 第15-22页 |
| ·特定基因的删除 | 第16-18页 |
| ·外源基因的定点整合 | 第18-19页 |
| ·在基因克隆中的应用 | 第19-20页 |
| ·建立疾病动物模型 | 第20页 |
| ·筛选高效表达外源基因的基因座 | 第20-22页 |
| 第二篇 研究内容 | 第22-75页 |
| 第一章 肝特异性表达 Cre 重组酶表达载体的构建 | 第22-59页 |
| 1 材料 | 第23-31页 |
| ·主要试剂 | 第23-25页 |
| ·酶类 | 第23页 |
| ·试剂盒 | 第23页 |
| ·其他试剂 | 第23页 |
| ·质粒及菌种 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·主要试剂的配制 | 第24-25页 |
| ·主要实验方法 | 第25-31页 |
| ·质粒的小量提取（碱裂解法） | 第25-26页 |
| ·DH5α感受态菌的制备（氯化钙法） | 第26页 |
| ·感受态细胞转化效率的测定 | 第26-27页 |
| ·PCR 产物和酶切产物的回收 | 第27-28页 |
| ·全血基因组DNA 提取 | 第28-31页 |
| 2 方法 | 第31-49页 |
| ·引物设计 | 第31页 |
| ·从人血中提取的基因组中 PCR 扩增 pHAAT 基因 | 第31-32页 |
| ·从重组质粒 pMD-Cre 中扩增 Cre 重组酶基因 | 第32-33页 |
| ·从载体 pcDNA3.1(+)中扩增 BGHpolyA 序列 | 第33-34页 |
| ·pHAAT-Cre-BGHpolyA 的克隆 | 第34-37页 |
| ·通过三重融合PCR 连接个片段 | 第34-35页 |
| ·PCR 融合产物进行连接 | 第35-36页 |
| ·重组质粒的转化 | 第36页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第36页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·FRT-neor-FRT 序列的获得 | 第37-38页 |
| ·pCI-neo-FRT2neor 载体的构建 | 第38-41页 |
| ·载体 pCI-neo-pHAAT-Cre-BGHpolyA-FRT2neor 的构建 | 第41-45页 |
| ·Cre 重组酶表达载体PET28a-pHAAT-Cre-BGHpolyA-FRT2neor 的构建 | 第45-49页 |
| 3. 结果 | 第49-55页 |
| ·pHAAT 基因的获得 | 第49-50页 |
| ·Cre 重组酶基因的获得 | 第50页 |
| ·BGHpolyA 序列的获得 | 第50-51页 |
| ·pHAAT-Cre-BGHpolyA 融合基因的获得 | 第51-52页 |
| ·重组质粒pGM-pHAAT-Cre-BGHpolyA 的酶切分析鉴定 | 第52-53页 |
| ·重组质粒pCI-neo-FRT2neo~r 的酶切分析鉴定 | 第53-54页 |
| ·重组质粒pCI-neo-pHAAT-Cre-BGHpolyA-FRT211eo~r的酶切分析鉴定 | 第54-55页 |
| ·Cre 重组酶表达载体PET28a-pHAAT-Cre-BGHpolyA-FRT2ne~r 的酶切鉴定 | 第55页 |
| 4 讨论 | 第55-58页 |
| ·人α1-抗胰蛋白酶启动子(Human alpha-1-antitrypsipromoterpHAAT) | 第55-56页 |
| ·三重融合PCR | 第56-57页 |
| ·Cre 重组酶表达载体的构建 | 第57-58页 |
| 5 小结 | 第58-59页 |
| 第二章 肝特异性表达 Cre 重组酶转基因猪 成纤维细胞的构建 | 第59-75页 |
| 1 材料 | 第60-63页 |
| ·材料 | 第60-63页 |
| ·实验应用细胞的来源 | 第60-61页 |
| ·主要试剂 | 第61页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第61页 |
| ·Cre 重组酶基因表达载体 | 第61页 |
| ·主要仪器和实验器材 | 第61-62页 |
| ·主要试剂的配制 | 第62-63页 |
| 2 方法 | 第63-69页 |
| ·pET28a-pHAAT-Cre-BGHpolyA-FRT2neo~r 质粒 DNA 的大量提取 | 第63-65页 |
| ·PET28a-pHAAT-Cre-BGHpolyA-FRT2neo~r 质粒的线性化酶切. | 第65页 |
| ·细胞毒性实验 | 第65-66页 |
| ·细胞的转染 | 第66页 |
| ·细胞的筛选 | 第66-67页 |
| ·阳性细胞的扩大培养 | 第67页 |
| ·阳性细胞的PCR 鉴定 | 第67-69页 |
| ·细胞的裂解 | 第67-68页 |
| ·PCR 反应 | 第68-69页 |
| 3 结果 | 第69-72页 |
| ·细胞毒性实验检测结果 | 第69-70页 |
| ·转染用DNA 的准备 | 第70页 |
| ·阳性细胞筛选结果 | 第70-72页 |
| ·阳性细胞PCR 鉴定结果。如图2-5 所示 | 第72页 |
| 4 讨论 | 第72-73页 |
| 5 小结 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 摘要 | 第83-85页 |
| Abstract | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
