| 一、中文摘要 | 第1-8页 |
| 二、英文摘要 | 第8-11页 |
| 三、目录 | 第11-14页 |
| 四、英文缩略词表 | 第14-16页 |
| 五、论文正文 | 第16-58页 |
| 前言 | 第16-20页 |
| NGX6基因的克隆及生物信息学特征 | 第16-17页 |
| NGX6基因在肿瘤组织及细胞中的表达和定位 | 第17页 |
| NGX6基因对肿瘤细胞生物学行为的影响 | 第17-18页 |
| NGX6基因的中游分子事件 | 第18页 |
| NGX6基因的下游分子事件 | 第18-20页 |
| 技术路线 | 第20-22页 |
| 第一章 材料与方法 | 第22-36页 |
| 1 材料 | 第22-25页 |
| ·细胞 | 第22页 |
| ·菌株和载体 | 第22-23页 |
| ·试剂 | 第23-24页 |
| ·试剂盒 | 第24页 |
| ·PCR引物 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| 2 方法 | 第25-36页 |
| ·生物信息学分析 | 第25页 |
| ·NGX6基因候选启动子区的生物信息学分析 | 第25页 |
| ·NGX6基因转录起始位点的生物信息学分析 | 第25页 |
| ·NGX6基因调控区转录因子结合位点的生物信息学分析 | 第25页 |
| ·NGX6基因5'上游调控区CpG岛的生物信息学分析 | 第25页 |
| ·RT-PCR检测NGX6在各细胞系中的表达 | 第25-27页 |
| ·细胞总RNA的抽提 | 第25-26页 |
| ·差异RT-PCR | 第26-27页 |
| ·人外周血细胞gDNA提取及NGX6基因候选启动子区域的扩增 | 第27-29页 |
| ·人外周血细胞gDNA提取 | 第27-28页 |
| ·PCR扩增NGX6基因候选启动子区域 | 第28页 |
| ·胶回收PCR产物 | 第28-29页 |
| ·荧光素酶报告基因重组体构建 | 第29-31页 |
| ·亚克隆目的片段至T-A载体 | 第29页 |
| ·双酶切载体pGL3/Enhancer和目的片段 | 第29页 |
| ·胶回收酶切产物 | 第29页 |
| ·以T4 DINA ligase连接NGX6/I126及pGL3/enhancer载体 | 第29-30页 |
| ·连接产物的转化 | 第30页 |
| ·挑选克隆,提取质粒 | 第30-31页 |
| ·双酶切鉴定及DNA测序鉴定 | 第31页 |
| ·缺失突变体荧光素酶报告质粒的构建 | 第31-32页 |
| ·绿色荧光蛋白报告质粒的构建 | 第32页 |
| ·PCR扩增EGFP | 第32页 |
| ·pGL3/Enhancer/EGFP、pGL3/Control/EGFP以及pGL3/-159/+276/EGFP的构建 | 第32页 |
| ·基因瞬时转染 | 第32-33页 |
| ·荧光素酶报告基因分析法检测启动子活性 | 第33-34页 |
| ·荧光素酶活性检测 | 第33页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性检测 | 第33-34页 |
| ·荧光素酶活性相对值处理及其数据分析 | 第34页 |
| ·统计学分析 | 第34页 |
| ·Mithramycin A处理 | 第34页 |
| ·RT-PCR以及灰度扫描 | 第34-36页 |
| 第二章 结果 | 第36-52页 |
| 1 RT-PCR检测NGX6基因在多种细胞中的表达 | 第36-37页 |
| 2 生物信息学方法分析NGX6基因调控区的结构特征 | 第37-42页 |
| ·NGX6基因启动子区的生物信息学预测结果 | 第37页 |
| ·NGX6基因启动子区的CpG岛预测结果 | 第37-39页 |
| ·NGX6基因转录起始位点的生物信息学预测结果 | 第39-40页 |
| ·NGX6基因调控区转录因子结合位点的生物信息学预测结果 | 第40-42页 |
| 3 PCR扩增NGX6基因调控序列并构建pGL3/Enhancer/1126重组体 | 第42-45页 |
| ·NGX6基因调控区的扩增并亚克隆至pGEM-T easy | 第42-43页 |
| ·pGL3/Enhancer/1126重组报告基因载体的构建 | 第43-45页 |
| 4 NGX6基因调控序列(-357/+769)的启动子活性的确定 | 第45-46页 |
| 5 克隆和鉴定NGX6基因近距离启动子 | 第46-47页 |
| 6 绿色荧光蛋白报告质粒验证NGX6基因近距离启动子活性 | 第47-49页 |
| 7 光辉霉素A(Mithramycin A)抑制NGX6基因启动子活性和内源性表达 | 第49-52页 |
| 第三章 讨论 | 第52-58页 |
| 六、结论 | 第58-59页 |
| 七、参考文献 | 第59-65页 |
| 八、综述 | 第65-77页 |
| 九、致谢 | 第77-78页 |
| 十、攻读学位期间主要的研究成果 | 第78页 |
