| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 前言 | 第8-9页 |
| 第一部分 CTGF和TIMP_1单基因及双基因联合体外转染恒河猴腰椎间盘髓核细胞的生物学效应 | 第9-46页 |
| 一、材料 | 第9-12页 |
| (一) 实验动物和病毒颗粒 | 第9页 |
| (二) 实验试剂和仪器 | 第9-10页 |
| (三) PCR引物及探针 | 第10-12页 |
| 二、恒河猴腰椎间盘髓核细胞的培养及鉴定 | 第12-21页 |
| (一) 恒河猴腰椎间盘髓核细胞的培养 | 第12-16页 |
| (二) Western blot鉴定恒河猴腰椎间盘髓核细胞的Ⅱ型胶原的表达 | 第16-18页 |
| (三) 番红O染色观察髓核细胞蛋白多糖的表达 | 第18-19页 |
| (四) 恒河猴腰椎间盘髓核细胞的超微结构观察 | 第19-21页 |
| 三、rAAV_2-EGFP测定不同感染复数的腺相关病毒对恒河猴腰椎间盘髓核细胞的感染效率 | 第21-23页 |
| (一) 转染步骤 | 第21页 |
| (二) 荧光倒置显微镜观察 | 第21-23页 |
| 四、CTGF和TIMP_1单基因及双基因联合体外转染恒河猴腰椎间盘髓核细胞后两细胞因子的表达 | 第23-34页 |
| (一) 转染步骤 | 第23-24页 |
| (二) RT-PCR检测CTGF、TIMP_1及双基因转染时两细胞因子mRNA的表达 | 第24-32页 |
| (三) Western blot鉴定CTGF、TIMP_1及双基因转染时两细胞因子的表达 | 第32-34页 |
| 五、CTGF和TIMP_1单基因及双基因联合体外转染恒河猴腰椎间盘髓核细胞的生物学效应 | 第34-43页 |
| (一) RT-PCR检测CTGF和TIMP_1单基因及双基因联合体外转染对Ⅱ型胶原mRNA的表达的影响 | 第34-36页 |
| (二) CTGF和TIMP_1单基因及双基因联合体外转染对蛋白多糖的表达的影响 | 第36-43页 |
| 1 RT-PCR检测转染前后髓核细胞蛋白多糖mRNA的表达 | 第36-38页 |
| 2 ~(35)S整合法测定转染前后髓核细胞蛋白多糖合成率 | 第38-41页 |
| 3 番红O染色观察蛋白多糖的合成 | 第41-43页 |
| 六、CTGF和TIMP_1单基因及双基因联合体外转染恒河猴腰椎间盘髓核细胞生物学效应的比较 | 第43-45页 |
| (一) 单基因与双基因对Ⅱ型胶原mRNA表达的影响 | 第43页 |
| (二) 单基因与双基因对蛋白多糖mRNA表达的影响 | 第43-44页 |
| (三) ~(35)S整合法检测单基因与双基因对蛋白多糖合成的影响 | 第44-45页 |
| 七、小结 | 第45-46页 |
| 第二部分 CTGF和TIMP_1双基因联合体内转染恒河猴退变腰椎间盘的生物学效应 | 第46-71页 |
| 一、材料 | 第46-47页 |
| (一) 实验动物 | 第46页 |
| (二) 实验试剂和仪器 | 第46-47页 |
| 二、恒河猴腰椎间盘退变动物模型的建立 | 第47-59页 |
| (一) 实验动物分组 | 第47页 |
| (二) CT引导下经皮穿刺造模 | 第47-48页 |
| (三) 造模前后腰椎间盘MRI观察 | 第48-52页 |
| (四) 实验椎间盘组织学观察 | 第52-59页 |
| 1 收获椎间盘组织 | 第52页 |
| 2 HE染色 | 第52-54页 |
| 3 Masson染色 | 第54-55页 |
| 4 番红O染色 | 第55-56页 |
| 5 免疫组化染色 | 第56-59页 |
| 三、双基因联合转染恒河猴退变腰椎间盘的方法及表达鉴定 | 第59-64页 |
| (一) 体内动物实验分组 | 第59页 |
| (二) CT引导下微创经皮注射病毒质粒至髓核 | 第59-61页 |
| (三) RT-PCR检测CTGF和TIMP_1的mRNA表达 | 第61-62页 |
| (四) Western-Blot法检测CTGF和TIMP_1两细胞因子的表达 | 第62-64页 |
| 四、双基因联合转染恒河猴退变腰椎间盘的生物学效应 | 第64-70页 |
| (一) 实验椎间盘的组织学观察 | 第64-66页 |
| 1 HE染色 | 第64页 |
| 2 Masson染色 | 第64-65页 |
| 3 番红O染色 | 第65页 |
| 4 免疫组化染色 | 第65-66页 |
| (二) RT-PCR检测Ⅱ型胶原mRNA的含量 | 第66-68页 |
| (三) RT-PCR检测蛋白多糖mRNA的含量 | 第68页 |
| (四) ~(35)S整合法检测髓核组织中蛋白多糖合成 | 第68-70页 |
| 五、小结 | 第70-71页 |
| 讨论 | 第71-77页 |
| 一.椎间盘细胞的培养 | 第71页 |
| 二.CTGF的生物学功能 | 第71-72页 |
| 三.TMIP_1的生物学功能 | 第72-73页 |
| 四.基因导入方式的选择 | 第73页 |
| 五.基因载体的选择 | 第73-74页 |
| 六、椎间盘退变模型的建立 | 第74-76页 |
| 七、基因转染在动物体内的持续表达的时间 | 第76-77页 |
| 结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-81页 |
| 综述 | 第81-89页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第89-90页 |
| 附录 | 第90-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
