| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-36页 |
| ·头孢菌素类抗生素 | 第18-22页 |
| ·概述 | 第18-19页 |
| ·头孢菌素的结构 | 第19-20页 |
| ·头孢菌素类抗生素的抗菌机理 | 第20页 |
| ·头孢菌素类抗生素的市场状况 | 第20-22页 |
| ·顶头孢霉 | 第22-24页 |
| ·概述 | 第22-23页 |
| ·顶头孢霉生产头孢菌素C研究现状 | 第23-24页 |
| ·氧气对发酵过程的影响 | 第24-25页 |
| ·概述 | 第24-25页 |
| ·氧气对顶头孢霉发酵过程中的影响 | 第25页 |
| ·透明颤菌血红蛋白(Vitreoscilla hemoglobin,VHb) | 第25-33页 |
| ·概述 | 第26页 |
| ·VHb的结构 | 第26-27页 |
| ·vgb的基因组成 | 第27-28页 |
| ·VHb的作用机制与功能 | 第28-30页 |
| ·vgb基因克隆、表达及调控 | 第30-31页 |
| ·透明颤菌血红蛋白基因的应用 | 第31-33页 |
| ·论文的目的与意义 | 第33-34页 |
| ·论文的目的 | 第33页 |
| ·论文的创新点 | 第33-34页 |
| ·论文的研究内容 | 第34-36页 |
| 第二章 材料与方法 | 第36-44页 |
| ·本章引论 | 第36页 |
| ·材料 | 第36-39页 |
| ·菌种和质粒 | 第36-37页 |
| ·仪器、试剂盒、工具酶、化学试剂 | 第37-38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·抗生素、诱导剂 | 第38-39页 |
| ·溶液 | 第39页 |
| ·分子生物学于生物化学操作方法 | 第39-40页 |
| ·软件 | 第40页 |
| ·菌种培养与保存 | 第40-41页 |
| ·顶头孢霉原生质体的制备与再生 | 第41页 |
| ·Overlap PCR的原理及方法 | 第41-44页 |
| 第三章 能够被顶头孢霉识别的真菌启动子的获得 | 第44-56页 |
| ·本章引论 | 第44页 |
| ·材料与方法 | 第44-45页 |
| ·质粒与菌株 | 第44页 |
| ·工具酶与试剂盒 | 第44-45页 |
| ·启动子的选择 | 第45页 |
| ·产黄青霉(Penicillium chrysogenum)异青霉素N合成酶(IPNS)启动子pcpC_p的克隆 | 第45-51页 |
| ·产黄青霉基因组的提取 | 第45-46页 |
| ·引物的设计、合成和PCR扩增 | 第46-48页 |
| ·连接与转化 | 第48-49页 |
| ·质粒快速鉴定与酶切验证筛选重组菌株 | 第49-51页 |
| ·顶头孢霉(Cephalosporium acremonium)异青霉素N合成酶(IPNS)启动子pcpC的克隆 | 第51-54页 |
| ·pMWI质粒和启动子的验证 | 第52-53页 |
| ·引物的设计、合成与PCR扩增 | 第53-54页 |
| ·本章小结 | 第54-56页 |
| 第四章 vgb原核表达载体pET28a-vgb的构建 | 第56-68页 |
| ·本章引论 | 第56页 |
| ·材料和方法 | 第56-57页 |
| ·质粒与菌株 | 第56页 |
| ·工具酶与试剂盒 | 第56-57页 |
| ·pET28a-vgb原核表达载体的构建 | 第57-66页 |
| ·构建思路 | 第57-58页 |
| ·引物合成、设计与vgb基因的PCR扩增 | 第58-59页 |
| ·双酶切反应 | 第59-60页 |
| ·连接与转化 | 第60-61页 |
| ·质粒快速鉴定与酶切验证筛选重组菌株 | 第61-63页 |
| ·宿主的更换 | 第63页 |
| ·pET28a-vgb质粒在BL21(DE3)中的表达 | 第63-66页 |
| ·本章小结 | 第66-68页 |
| 第五章 顶头孢霉转化载体pDH25-pcpC-vgb的构建 | 第68-82页 |
| ·本章引论 | 第68-69页 |
| ·材料和方法 | 第69页 |
| ·质粒与菌株 | 第69页 |
| ·工具酶与试剂盒 | 第69页 |
| ·pDH25-pcpC-vgb转化载体的构建 | 第69-80页 |
| ·构建思路 | 第69-70页 |
| ·PCR扩增pcpC启动子和vgb基因及pcpC-vgb大片段 | 第70-76页 |
| ·单酶切反应 | 第76-77页 |
| ·连接与转化 | 第77-78页 |
| ·质粒快速鉴定与酶切验证筛选重组菌株 | 第78-80页 |
| ·本章小结 | 第80-82页 |
| 第六章 顶头孢霉原生质体的制备、再生与转化 | 第82-90页 |
| ·本章引论 | 第82页 |
| ·材料与方法 | 第82页 |
| ·质粒与菌株 | 第82页 |
| ·试剂、设备与工具酶 | 第82页 |
| ·溶液与培养基 | 第82页 |
| ·顶头孢霉培养基的选择 | 第82-84页 |
| ·顶头孢霉原生质体的制备与再生 | 第84-86页 |
| ·顶头孢霉原生质体对抗真菌素敏感性的研究 | 第86-87页 |
| ·转化载体pDH25-pcpC-vgb对顶头孢霉的转化 | 第87-88页 |
| ·本章小结 | 第88-90页 |
| 第七章 结论 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-98页 |
| 附录 | 第98-112页 |
| 附录1 实验仪器 | 第98-99页 |
| 附录2 化学试剂药品 | 第99-100页 |
| 附录3 DNA小量提取方法 | 第100-101页 |
| 附录4 聚合酶链式反应(PCR) | 第101-102页 |
| 附录5 普通DNA产物纯化 | 第102-103页 |
| 附录6 真核生物DNA提取方法 | 第103-104页 |
| 附录7 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第104-105页 |
| 附录8 DNA凝胶回收纯化 | 第105-106页 |
| 附录9 蛋白SDS-PAGE凝胶电泳 | 第106-108页 |
| 附录10 线性化载体的去磷酸化 | 第108-109页 |
| 附录11 感受态细胞的制备及质粒(连接产物)转化 | 第109-110页 |
| 附录12 菌落PCR | 第110-111页 |
| 附录13 质粒快速鉴定法筛选重组菌株 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第113-114页 |
| 作者和导师简介 | 第114-115页 |
| 北京化工大学硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第115-116页 |
