| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-18页 |
| 英文缩略词表 | 第18-19页 |
| 前言 | 第19-24页 |
| 第一部分 慢病毒介导bcr/abl 基因长期沉默的 K562 细胞株构建 | 第24-39页 |
| 材料与方法 | 第24-32页 |
| 1. 材料 | 第24-26页 |
| 2. 方法 | 第26-32页 |
| ·细胞培养条件 | 第26页 |
| ·干扰载体pNL-EGFP-U6-bcr/abl-I 的构建 | 第26-27页 |
| ·三质粒共转染293T 细胞生产病毒与病毒活力鉴定 | 第27页 |
| ·EGFP 及EGFP-B/A-I 病毒对K562 细胞感染及稳定表达克隆获取 | 第27页 |
| ·EGFP-K562 及B/A-K562 稳转细胞的鉴定 | 第27-28页 |
| ·荧光显微镜及流式细胞仪计数绿荧光细胞阳性率 | 第28页 |
| ·集落形成实验 | 第28页 |
| ·慢病毒介导bcr/abl 基因RNA 干扰效率的鉴定 | 第28-32页 |
| ·Realtime PCR 检测RNAi 对bcr/abl 基因mRNA 水平影响 | 第28-30页 |
| ·免疫荧光检测细胞P210~(bcr/abl) 阳性率 | 第30页 |
| ·Western blotting 检测bcr/abl RNAi 对P210~(bcr/abl) 蛋白表达的影响 | 第30-32页 |
| 3. 数据及图片处理 | 第32页 |
| 结果 | 第32-38页 |
| 1. 干扰载体pNL-EGFP-U6-bcr/abl-I | 第32页 |
| 2. 三质粒共转染293T 细胞包装病毒 | 第32-34页 |
| 3. EGFP-K562、B/A-K562 稳转细胞的获取与鉴定 | 第34-35页 |
| 4. RNAi 对bcr/abl 基因mRNA 水平影响 | 第35-36页 |
| 5. 免疫荧光检测RNAi 对K562 细胞P210~(bcr/abl) 阳性率影响 | 第36-37页 |
| 6. Western blotting 法检测RNAi 对P210~(bcr/abl) 蛋白表达的影响 | 第37-38页 |
| 讨论 | 第38页 |
| 小结 | 第38-39页 |
| 第二部分 Bcr/abl 基因长期沉默对 K562 细胞生物学特性及相关基因表达的影响 | 第39-56页 |
| 材料与方法 | 第39-43页 |
| 1. 材料 | 第39-40页 |
| 2. 方法 | 第40-43页 |
| ·细胞培养条件 | 第40页 |
| ·锥虫蓝染色观察RNAi 对K562 细胞增殖的影响 | 第40页 |
| ·集落形成法检测RNAi 对细胞集落形成的影响 | 第40页 |
| ·瑞氏-吉姆萨染色观察RNAi 对K562 细胞形态的影响 | 第40页 |
| ·联苯胺染色法检测RNAi 对K562 细胞红系分化的影响 | 第40页 |
| ·流式细胞仪分析RNAi 对K562 细胞周期影响 | 第40-41页 |
| ·ELISA 法观察RNAi 对酪氨酸激酶活性影响 | 第41页 |
| ·bcr/abl 基因RNAi 对K562 细胞凋亡的影响 | 第41页 |
| ·AO-EB 染色观察RNAi 对细胞凋亡影响 | 第41页 |
| ·Heochst 33342 染色观察细胞凋亡 | 第41页 |
| ·RNAi 对K562 细胞线粒体凋亡途径的影响 | 第41-42页 |
| ·bcr/abl RNAi 对K562 细胞增殖与凋亡相关信号分子的影响 | 第42-43页 |
| 3. 数据及图片处理 | 第43页 |
| 结果 | 第43-52页 |
| 1. bcr/abl 基因RNAi 对细胞增殖影响 | 第43-44页 |
| 2. RNAi 对K562 细胞集落能力的影响 | 第44-45页 |
| 3. 瑞氏-吉姆萨染色观察bcr/abl 基因RNAi 对K562 细胞形态的影响 | 第45页 |
| 4. 联苯胺染色检测bcr/abl 基因RNAi 对K562 细胞向红系分化的影响 | 第45-46页 |
| 5. 流式细胞仪检测RNAi 对K562 细胞周期的影响 | 第46-47页 |
| 6. ELISA 法观察RNAi 对K562 细胞酪氨酸激酶活性影响 | 第47页 |
| 7. bcr/abl 基因RNAi 对K562 细胞凋亡的影响 | 第47-48页 |
| ·AO-EB 染色检测细胞凋亡 | 第47-48页 |
| ·Heochst 33342 染色观察细胞凋亡 | 第48页 |
| 8. RNAi 对K562 细胞线粒体凋亡途径的影响 | 第48-50页 |
| ·RNAi 触发线粒体细胞色素C 释放 | 第49页 |
| ·RNAi 对K562 细胞Caspase-3、Caspase-9 活性影响 | 第49-50页 |
| 9. 慢病毒介导bcr/abl 基因RNAi 对K562 细胞增殖、凋亡相关信号分子的影响 | 第50-52页 |
| ·对Src、P-Src、Raf-1、Erk1/2、P-Erk1/2 蛋白含量的影响 | 第50页 |
| ·对P-Akt、P-Stat 1、P-Stat 5、NF-КB、P-P38 蛋白含量的影响 | 第50-51页 |
| ·对P53、C-myc、PKC、Bcl-2、Bax 蛋白含量的影响 | 第51页 |
| ·对伴侣蛋白Hsp90、Hsp 70 的影响 | 第51-52页 |
| 讨论 | 第52-55页 |
| 小结 | 第55-56页 |
| 第三部分 慢病毒介导bcrr/abl基因长期沉默对K562细胞裸鼠成瘤的影响及相关机制研究 | 第56-68页 |
| 材料与方法 | 第56-60页 |
| 1. 材料 | 第56-57页 |
| 2. 方法 | 第57-60页 |
| ·细胞培养 | 第57页 |
| ·裸鼠异种移植瘤模型的建立 | 第57页 |
| ·实验分组 | 第57页 |
| ·标本收集 | 第57-58页 |
| ·肿瘤组织Caspase-3、Caspase-9 活性测定 | 第58页 |
| ·肿瘤组织冰冻切片及荧光观察 | 第58-59页 |
| ·肿瘤组织常规HE 染色 | 第59页 |
| ·肿瘤组织免疫组化检测P210~(bcr/abl)、Bcl-2、Bax 蛋白表达 | 第59-60页 |
| ·免疫印迹检测肿瘤组织中Src、Erk1/2、P-Stat 1、Hsp 90 蛋白表达 | 第60页 |
| 3. 统计学分析 | 第60页 |
| 结果 | 第60-65页 |
| 1. 裸鼠一般情况 | 第60页 |
| 2. 裸鼠成瘤情况 | 第60-61页 |
| 3. RNAi 对肿瘤组织Caspase3、Caspase9 活性的影响 | 第61-62页 |
| 4. 肿瘤组织冰冻切片观察荧光 | 第62-63页 |
| 5. RNAi 对肿瘤组织形态结构的影响 | 第63页 |
| 6. 免疫组化检测RNAi 对肿瘤组织P210~(bcr/abl)、Bcl-2、Bax 蛋白表达的影响 | 第63-65页 |
| 7. 免疫印迹检测RNAi 对肿瘤组织中bcr/abl 基因相关蛋白 Src、Erk1/2、P-Stat 1、Hsp 90 蛋白含量的影响 | 第65页 |
| 讨论 | 第65-67页 |
| 小结 | 第67-68页 |
| 第四部分 慢病毒介导bcr/abl 基因长期沉默对姜黄素抗肿瘤作用的影响及相关机制研究 | 第68-92页 |
| 材料与方法 | 第68-71页 |
| 1. 材料 | 第68页 |
| 2. 方法 | 第68-71页 |
| ·细胞培养条件 | 第68-69页 |
| ·MTT 法检测Cur 对B/A-K562 细胞增殖的影响 | 第69页 |
| ·锥虫蓝染色法观察Cur 对细胞增殖的影响 | 第69页 |
| ·集落形成试验检测Cur 对B/A-K562 细胞集落形成的影响 | 第69页 |
| ·荧光相差显微镜观察Cur 作用对B/A-K562 细胞形态改变 | 第69-70页 |
| ·联苯胺染色法检测Cur 对B/A－K562 细胞红系分化的影响 | 第70页 |
| ·ELISA 法观察Cur 对酪氨酸激酶活性影响 | 第70页 |
| ·流式细胞仪DNA 倍体分析Cur 对B/A-K562 细胞周期影响 | 第70页 |
| ·Cur 对 B/A-K562 细胞凋亡的影响 | 第70页 |
| ·AO-EB 染色检测 Cur 对细胞凋亡的影响 | 第70页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳分析Cur 对细胞 DNA 断裂作用 | 第70页 |
| ·分光光度法检测Cur 对 Caspase-3 和 Caspase-9 活性的影响 | 第70页 |
| ·Western blotting 法观察Cur 对增殖和凋亡有关信号分子的影响 | 第70-71页 |
| 3. 数据分析及图片处理 | 第71页 |
| 结果 | 第71-84页 |
| 1. MTT 法检测 Cur 对K562、EGFP-K562、B/A-K562 细胞增殖的影响 | 第71页 |
| 2. 锥虫蓝染色法检测Cur 对B/A-K562 细胞增殖抑制作用 | 第71-72页 |
| 3. Cur 对B/A-K562 细胞克隆形成的影响 | 第72页 |
| 4. 荧光相差显微镜观察 Cur 对B/A-K562 细胞毒作用 | 第72-73页 |
| 5. 联苯胺染色检测红系分化 | 第73-74页 |
| 6. ELISA 法检测Cur 对细胞酪氨酸激酶活性影响 | 第74-75页 |
| 7. 流式细胞仪分析Cur 对B/A-K562 细胞周期的影响 | 第75-76页 |
| 8. Cur 诱导B/A-K562 细胞凋亡 | 第76-79页 |
| ·AO-EB 染色观察Cur 诱导B/A-K562 细胞凋亡 | 第76-78页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳分析Cur 对细胞 DNA 断裂作用 | 第78-79页 |
| 9. Cur 对B/A-K562 细胞P210~(bcr/abl) 蛋白含量的影响 | 第79页 |
| 10. Cur 诱导白血病细胞凋亡与线粒体途径的关系 | 第79-81页 |
| ·Cur 触发线粒体细胞色素C 释放 | 第79-80页 |
| ·分光光度法检测Cur 对细胞Caspase-3、Caspase-9 的影响 | 第80-81页 |
| 11. 免疫印迹观察 Cur 对细胞增殖凋亡相关的信号分子的影响 | 第81-84页 |
| ·Cur 对K562、EGFP-K562 及B/A-K562 细胞 C-fas、P-Src、Raf-1 及 P-Erk_(1/2)蛋白含量的影响 | 第81-82页 |
| ·Cur 对K562、EGFP-K562 及B/A-K562 细胞 P-Akt、P-Stat 1、P-Stat 5、NF-КB及P-P38 蛋白含量的影响 | 第82-83页 |
| ·Cur 对K562、EGFP-K562 及B/A-K562 细胞 P53、C-myc、PKC、Bax 及 Bcl-2蛋白含量的影响 | 第83页 |
| ·Cur 对K562、EGFP-K562 及B/A-K562 细胞伴侣蛋白 Hsp 70、Hsp 90 蛋白含量的影响 | 第83-84页 |
| 讨论 | 第84-90页 |
| 小结 | 第90-92页 |
| 结论 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 综述 | 第105-114页 |
| 参考文献 | 第111-114页 |
