| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-28页 |
| ·百合及百合病毒 | 第11-14页 |
| ·百合花卉 | 第11-12页 |
| ·百合病毒病种类 | 第12页 |
| ·百合脱毒研究进展 | 第12-14页 |
| ·百合无症病毒研究 | 第14-15页 |
| ·病害流行学 | 第14页 |
| ·细胞病理学 | 第14-15页 |
| ·分子生物学 | 第15页 |
| ·RNA干扰技术及其在植物中的应用研究 | 第15-23页 |
| ·RNAi现象揭示 | 第16-17页 |
| ·RNAi机制 | 第17-19页 |
| ·RNAi组分 | 第19-21页 |
| ·RNAi特征 | 第21页 |
| ·RNAi与植物病毒研究 | 第21-22页 |
| ·RNAi技术国内外研究现状 | 第22-23页 |
| ·Gateway技术 | 第23-26页 |
| ·Gateway技术介绍 | 第23页 |
| ·Gateway技术原理 | 第23-25页 |
| ·本实验用的Gateway技术 | 第25-26页 |
| ·本研究的内容和意义 | 第26-28页 |
| 2 百合无症病毒衣壳蛋白基因的克隆和生物信息学分析 | 第28-47页 |
| ·实验材料和试剂 | 第28-29页 |
| ·实验材料和试剂 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-35页 |
| ·感病百合叶片总RNA的提取 | 第29页 |
| ·百合无症病毒衣壳蛋白基因的获得 | 第29-31页 |
| ·PCR产物的克隆及检测 | 第31-34页 |
| ·测序和生物信息学分析 | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-45页 |
| ·感病百合叶片总RNA的提取及LSV CP基因的克隆 | 第35-36页 |
| ·CP基因核苷酸序列及编码蛋白质分析 | 第36-38页 |
| ·CP基因核苷酸、氨基酸序列同源性分析 | 第38-42页 |
| ·CP基因编码蛋白功能预测 | 第42-43页 |
| ·CP基因编码蛋白二级结构预测 | 第43-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| ·小结 | 第46-47页 |
| 3 LSV CP基因不同长度片段的RNAi载体的构建 | 第47-59页 |
| ·实验材料和试剂 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-52页 |
| ·RNAi目标片段选择及引物设计 | 第48-49页 |
| ·目的片段的获得 | 第49-50页 |
| ·利用Gateway技术构建RNAi载体 | 第50-51页 |
| ·工程菌的获得 | 第51-52页 |
| ·结果与分析 | 第52-57页 |
| ·目的片段的获得 | 第52-53页 |
| ·BP反应后阳性克隆PCR检测 | 第53-54页 |
| ·LR反应后阳性克隆PCR检测 | 第54-56页 |
| ·工程菌的获得 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 4 瞬时表达检测RNAi载体抑制效果 | 第59-66页 |
| ·实验材料和试剂 | 第59-60页 |
| ·实验方法 | 第60-62页 |
| ·实验技术路线 | 第60-61页 |
| ·处理供试百合植株 | 第61-62页 |
| ·活化含重组质粒的农杆菌 | 第62页 |
| ·用活化的农杆菌处理供试百合植株 | 第62页 |
| ·瞬时表达siRNA对LSV侵染干扰效果的生物学检测 | 第62页 |
| ·农杆菌转染后LSV病毒接种百合叶片 | 第62页 |
| ·供试百合C、D组中百合无症病毒RT-PCR检测 | 第62页 |
| ·结果与分析 | 第62-64页 |
| ·供试百合接种LSV后RT-PCR检测 | 第62-63页 |
| ·侵染农杆菌后供试百合百合无症病毒RT-PCR检测 | 第63-64页 |
| ·农杆菌转染后LSV病毒接种百合叶片供试百合RT-PCR检测 | 第64页 |
| ·讨论 | 第64-65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| 5 农杆菌介导转化百合的研究 | 第66-72页 |
| ·实验材料和试剂 | 第66-67页 |
| ·实验方法 | 第67-68页 |
| ·植物材料的获得 | 第67页 |
| ·抗生素抗性筛选 | 第67页 |
| ·农杆菌的活化 | 第67-68页 |
| ·百合转化 | 第68页 |
| ·转化植株的分子检测 | 第68页 |
| ·结果与分析 | 第68-71页 |
| ·潮霉素对鳞片再生的影响 | 第68-69页 |
| ·转化植株的获得 | 第69-70页 |
| ·转基因百合的PCR检测 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71页 |
| ·小结 | 第71-72页 |
| 6 结论与展望 | 第72-74页 |
| ·结论 | 第72页 |
| ·有待进一步开展的工作 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
