柳蚕卵黄原蛋白基因的克隆与表达分析
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-13页 |
| ·昆虫卵黄原蛋白研究进展 | 第9-13页 |
| ·昆虫卵黄原蛋白的结构与特性 | 第9-10页 |
| ·昆虫卵黄原蛋白基因的合成 | 第10-11页 |
| ·昆虫卵黄原蛋白基因的摄取 | 第11页 |
| ·昆虫卵黄原蛋白基因的调控 | 第11-13页 |
| 2 引言 | 第13-15页 |
| ·研究的目的及意义 | 第13-14页 |
| ·主要研究内容 | 第14页 |
| ·柳蚕卵黄原蛋白基因序列的测定 | 第14页 |
| ·柳蚕卵黄原蛋白转录水平的研究 | 第14页 |
| ·柳蚕卵黄原蛋白表达水平的研究 | 第14页 |
| ·技术路线 | 第14-15页 |
| 3 材料与方法 | 第15-26页 |
| ·实验材料 | 第15页 |
| ·仪器与试剂 | 第15-18页 |
| ·主要实验仪器 | 第15页 |
| ·主要生化试剂 | 第15-16页 |
| ·常用溶液的配置 | 第16-18页 |
| ·实验方法 | 第18-26页 |
| ·柳蚕的饲养 | 第18页 |
| ·柳蚕组织的收集 | 第18页 |
| ·柳蚕基因组DNA的提取 | 第18-19页 |
| ·柳蚕总RNA的提取 | 第19页 |
| ·提取的基因组DNA及总RNA的质量检测 | 第19页 |
| ·柳蚕卵黄原蛋白基因的PCR扩增 | 第19-21页 |
| ·PCR扩增后目的产物的纯化 | 第21页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第21-22页 |
| ·目的片段的连接和转化 | 第22页 |
| ·柳蚕卵黄原蛋白基因序列的拼接与分析 | 第22页 |
| ·柳蚕卵黄原蛋白小亚基的原核表达 | 第22-24页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第22-23页 |
| ·柳蚕卵黄原蛋白小亚基全长cDNA的扩增 | 第23页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第23-24页 |
| ·菌液的诱导表达 | 第24页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第24页 |
| ·Western blot分析 | 第24-25页 |
| ·柳蚕卵黄原蛋白转录水平的研究 | 第25-26页 |
| ·总RNA的提取 | 第25页 |
| ·半定量RT-PCR | 第25-26页 |
| 4 结果 | 第26-40页 |
| ·柳蚕的饲育与观察 | 第26-27页 |
| ·柳蚕基因组DNA及总RNA的检测 | 第27-28页 |
| ·第一链cDNA浓度的测定 | 第28页 |
| ·柳蚕卵黄原蛋白基因PCR扩增结果 | 第28页 |
| ·柳蚕卵黄原蛋白基因序列的测定和分析 | 第28-34页 |
| ·柳蚕卵黄原蛋白基因转录水平的研究 | 第34-36页 |
| ·PCR扩增条件的确定 | 第34-35页 |
| ·柳蚕卵黄原蛋白不同时期的表达 | 第35-36页 |
| ·柳蚕卵黄原蛋白不同组织的表达 | 第36页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第36-38页 |
| ·柳蚕卵黄原蛋白小亚基的扩增 | 第36-37页 |
| ·双酶切鉴定 | 第37-38页 |
| ·柳蚕卵黄原蛋白小亚基的诱导表达 | 第38页 |
| ·Western blot检测 | 第38页 |
| ·不同条件下的原核表达 | 第38-40页 |
| ·IPTG不同诱导浓度的原核表达 | 第38-39页 |
| ·IPTG不同诱导时间的原核表达 | 第39-40页 |
| 5 讨论 | 第40-43页 |
| ·柳蚕的饲养 | 第40页 |
| ·柳蚕卵黄原蛋白基因的一级结构 | 第40-41页 |
| ·半定量PCR | 第41-42页 |
| ·柳蚕卵黄原蛋白小亚基的原核表达 | 第42-43页 |
| 6 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 个人简介 | 第51页 |
