| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第1章 前言 | 第10-36页 |
| ·间充质干细胞(MSC)成骨分化研究进展 | 第10-24页 |
| ·MSCs 简介 | 第10页 |
| ·MSCs 成骨分化的研究意义 | 第10-11页 |
| ·MSCs 成骨分化的模型及过程 | 第11-12页 |
| ·成骨分化的主要转录调控因子 | 第12-19页 |
| ·Runx2/Cbfa1 | 第13-15页 |
| ·PPAR_γ | 第15-16页 |
| ·Osx | 第16-17页 |
| ·Sox | 第17-18页 |
| ·其它 | 第18-19页 |
| ·成骨分化过程中主要信号通路的研究 | 第19-24页 |
| ·BMP/TGF-β信号通路 | 第19-22页 |
| ·Wnt 信号通路 | 第22-24页 |
| ·miRNA 的研究进展 | 第24-34页 |
| ·miRNA 简介 | 第24页 |
| ·miRNA 的生物合成 | 第24-25页 |
| ·miRNA 对转录后水平的调控 | 第25-28页 |
| ·mRNA 降解 | 第25-26页 |
| ·阻断翻译起始 | 第26页 |
| ·加工小体的移位 | 第26-27页 |
| ·翻译的激活 | 第27-28页 |
| ·miRNA 在调控细胞分化和发育中的功能 | 第28-32页 |
| ·早期胚胎发育中的功能 | 第29-30页 |
| ·神经分化中的功能 | 第30页 |
| ·肌肉分化中的功能 | 第30-31页 |
| ·淋巴细胞分化中的功能 | 第31页 |
| ·成骨和成脂分化中的功能 | 第31-32页 |
| ·miRNA-17-5p 家族及其功能的研究 | 第32-34页 |
| ·miR-17-5p 家族的组成 | 第32-33页 |
| ·miR-17-5p 家族的功能研究 | 第33-34页 |
| ·本论文研究的目的和意义 | 第34-36页 |
| 第2章 材料和方法 | 第36-46页 |
| ·实验试剂及材料 | 第36-37页 |
| ·实验仪器设备 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-46页 |
| ·骨髓间充质干细胞的分离和培养 | 第37页 |
| ·BM-MSCs 表面抗原的鉴定 | 第37-38页 |
| ·BM-MSCs 的成骨与成脂分化 | 第38页 |
| ·瞬时转染与转染效率的测定 | 第38-39页 |
| ·碱性磷酸酶(AKP)活性的检测 | 第39页 |
| ·碱性磷酸酶(AKP)的染色 | 第39页 |
| ·茜素红(ARS)染色 | 第39页 |
| ·Von Kossa 染色 | 第39-40页 |
| ·油红O 染色 | 第40页 |
| ·半定量RT-PCR | 第40-41页 |
| ·Q-PCR 测定miRNA 含量 | 第41页 |
| ·荧光素酶报告质粒的构建 | 第41-43页 |
| ·蛋白质的免疫印记(western blot) | 第43-44页 |
| ·ELISA 检测BMP2, BMP4 和Runx2 的分泌与表达 | 第44页 |
| ·无胸腺裸鼠的异位成骨 | 第44页 |
| ·miR-20a 慢病毒表达载体的构建及病毒包装 | 第44-45页 |
| ·统计分析 | 第45-46页 |
| 第3章 人骨髓来源的MSCs 的分离和鉴定 | 第46-50页 |
| ·MSCs 的形态学观察 | 第46-47页 |
| ·MSC 细胞表面抗原的鉴定 | 第47页 |
| ·讨论 | 第47-50页 |
| 第4章 miR-20a 促进人骨髓来源的MSCs 的成骨分化 | 第50-64页 |
| ·MSCs 在成骨分化的过程中表达miR-17-5p 家族 | 第50-51页 |
| ·miR-17-5p 家族具有促进成骨分化的潜能 | 第51-53页 |
| ·miR-20a，miR-206 及miR-17 在成骨分化中的表达模式 | 第53-55页 |
| ·miR-20a 促进MSCs 的成骨分化 | 第55-61页 |
| ·AKP 活性的测定 | 第55-57页 |
| ·AKP 染色 | 第57页 |
| ·茜素红和Von Kossa 染色 | 第57-59页 |
| ·标志基因的测定 | 第59页 |
| ·miR-20a 病毒质粒促进 MSCs 的成骨分化 | 第59-61页 |
| ·讨论 | 第61-64页 |
| 第5章 miR-20a 促进MSCs 成骨分化机制的研究 | 第64-85页 |
| ·miR-20a 通过上调BMP 信号通路 | 第64-67页 |
| ·miR-20a 通过与靶标基因PPAR_γ配对来调控成骨分化 | 第67-72页 |
| ·miR-20a 引起成骨和成脂分化中 PPAR_γ在m RNA 水平和蛋白水平表达的变化 | 第67-69页 |
| ·miR-20a 抑制了PPAR_γm RNA 的3’UTR 荧光酶活性 | 第69-70页 |
| ·PPAR_γ的SiRNA 促进MSCs 的成骨分化及BMPs 的表达 | 第70-72页 |
| ·miR-20a 通过target BAMBI 和CRIM1 来调控成骨分化 | 第72-80页 |
| ·BAMBI 和CRIM1 在成骨分化中的表达模式 | 第72-73页 |
| ·miR-20a 诱导的成骨分化中BAMBI 和CRIM1 表达变化 | 第73-74页 |
| ·miR-20a 抑制BAMBI 和Crim1m RNA 的3’UTR 荧光酶活性 | 第74-78页 |
| ·BAMBI、CRIM1 的SiRNA 促进MSCs 的成骨分化及BMPs 的表达 | 第78-80页 |
| ·miR-20a 促进成骨分化的作用机理的总结 | 第80页 |
| ·miR-20a 对成脂分化的影响 | 第80-82页 |
| ·讨论 | 第82-85页 |
| 第6章 miR-20a 的异位成骨 | 第85-90页 |
| ·异位成骨最佳时间的确定 | 第85-86页 |
| ·异位成骨的X-光片结果 | 第86-87页 |
| ·异位成骨的组织染色 | 第87-88页 |
| ·讨论 | 第88-90页 |
| 第7章 结论 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第111-112页 |
