| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 第一部分 文献综述 李氏杆菌的研究进展 | 第12-22页 |
| 1、生物学特性 | 第12-13页 |
| 2、传播途径 | 第13-14页 |
| 3、致病机理 | 第14页 |
| 4、动物模型 | 第14-15页 |
| 小鼠模型 | 第14页 |
| 其他动物模型 | 第14-15页 |
| 5、LM的毒力因子 | 第15-17页 |
| LLO蛋白 | 第15-16页 |
| actA蛋白 | 第16-17页 |
| inlB蛋白 | 第17页 |
| 其他毒力因子 | 第17页 |
| 6、LM检测技术研究进展 | 第17-22页 |
| 传统分离鉴定方法 | 第17-18页 |
| 免疫学检测方法 | 第18页 |
| 核酸检测方法 | 第18页 |
| PCR检测方法 | 第18-19页 |
| 基质辅助激光解析电离方法 | 第19-20页 |
| Lm分子生物学分型的研究与应用 | 第20页 |
| 核糖体分型 | 第20页 |
| 随机引物DNA多态性分型 | 第20页 |
| 脉冲场凝胶电泳分型 | 第20-22页 |
| 第二部分 实验研究 | 第22-45页 |
| 试验一 致绵羊脑炎单核细胞增多性李氏杆菌的LD_(50)的测定 | 第22-26页 |
| 1 材料 | 第22页 |
| ·菌株 | 第22页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第22页 |
| ·实验动物 | 第22页 |
| 2 实验方法 | 第22-23页 |
| ·细菌的培养 | 第22页 |
| ·细菌的浓缩与稀释 | 第22页 |
| ·细菌计数 | 第22-23页 |
| ·半数致死量LD_(50)的测定 | 第23页 |
| ·数据统计 | 第23页 |
| 3 结果与分析 | 第23-24页 |
| ·细菌计数结果 | 第23页 |
| ·半数致死量LD_(50)的测定 | 第23-24页 |
| ·实验动物死亡后病理剖解的肉眼观察 | 第24页 |
| ·不同来源的LM的致病力比较 | 第24页 |
| 4 讨论 | 第24-26页 |
| 实验二 致绵羊脑炎单核细胞增多性李氏杆菌在模型小鼠体内的动态分布及病理变化 | 第26-35页 |
| 1 材料 | 第26-27页 |
| ·试验菌株 | 第26页 |
| ·试验动物 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·主要试剂的配置 | 第27页 |
| (1) 伊红染液的配制 | 第27页 |
| (2) 苏木素染液的配制 | 第27页 |
| (3) 蛋白甘油的配制 | 第27页 |
| (4) 1%盐酸酒精 | 第27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| 2 方法 | 第27-29页 |
| ·LM的培养 | 第27页 |
| ·LM在人工感染小鼠体内的动态分布测定 | 第27-28页 |
| ·细菌的分离鉴定 | 第27页 |
| ·PCR方法程序 | 第27-28页 |
| ·组织病理学观察 | 第28-29页 |
| ·取材和固定 | 第28页 |
| ·水洗 | 第28页 |
| ·脱水 | 第28页 |
| ·透明 | 第28页 |
| ·浸蜡 | 第28页 |
| ·包埋 | 第28页 |
| ·H-E染色 | 第28-29页 |
| 3 结果 | 第29-33页 |
| ·不同源的LM在人工感染小鼠体内的分布规律 | 第29-31页 |
| ·细菌学检查 | 第29页 |
| ·细菌PCR检测结果 | 第29-31页 |
| ·病理变化 | 第31-33页 |
| ·病理解剖变化 | 第31-32页 |
| ·病理组织学变化 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-35页 |
| ·小鼠模型的建立 | 第33页 |
| ·关于LM在小鼠体内的动态分布规律的研究 | 第33-34页 |
| ·关于LM感染小鼠后引起各组织的病理性变化 | 第34-35页 |
| 实验三 致绵羊脑炎单核细胞增多性李氏杆菌actA和inlB基因的克隆与序列分析 | 第35-45页 |
| 1、材料 | 第35页 |
| ·菌种 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| 2、方法 | 第35-38页 |
| ·不同源LM基因组DNA的提取 | 第35-36页 |
| ·引物设计及PCR反应体系 | 第36页 |
| ·actA引物设计 | 第36页 |
| ·actA基因的PCR反应体系(50uL) | 第36页 |
| ·inlB引物设计 | 第36页 |
| ·inlB基因的PCR反应体系(50uL) | 第36页 |
| ·PCR产物提纯 | 第36-37页 |
| ·DNA的连接 | 第37页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第37页 |
| ·重组DNA的转化 | 第37页 |
| ·克隆结果的鉴定 | 第37页 |
| ·白斑菌落PCR鉴定 | 第37页 |
| ·质粒的小剂量制备 | 第37页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第37页 |
| ·重组目的基因的核营酸序列测定 | 第37-38页 |
| 3、结果 | 第38-45页 |
| ·actA蛋白基因PCR扩增结果 | 第38页 |
| ·inlB蛋白基因PCR扩增结果 | 第38-39页 |
| ·actA基因PCR产物的克隆 | 第39页 |
| ·inlB基因PCR产物的克隆 | 第39页 |
| ·质粒的酶切鉴定 | 第39-41页 |
| ·actA和inlB基因的系统进化树及其分析 | 第41-43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 结论 | 第45页 |
| 主要创新点 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 作者简介 | 第53页 |
| 在学期间发表的文章 | 第53-54页 |
| 附图5 | 第54-55页 |
| 附图6 | 第55-56页 |
| 师评阅表 | 第56页 |
