| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 缩写词简表 | 第13-15页 |
| 目录 | 第15-18页 |
| 技术路线 | 第18-19页 |
| 第一章 前言 | 第19-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-35页 |
| 1 材料 | 第21-23页 |
| ·细胞 | 第21页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21-23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23-35页 |
| ·免疫组化 | 第23-24页 |
| ·pIRES-RASSF1A载体的构建 | 第24-26页 |
| ·细胞RNA制备 | 第26-27页 |
| ·培养细胞总蛋白制备 | 第27页 |
| ·线粒体和胞浆蛋白的抽提 | 第27-28页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第28-29页 |
| ·基因瞬时转染 | 第29页 |
| ·siRNA瞬时转染 | 第29-30页 |
| ·稳定转染A375细胞系的建立 | 第30页 |
| ·免疫荧光实验 | 第30页 |
| ·细胞生长曲线测定 | 第30-31页 |
| ·平板集落形成实验 | 第31页 |
| ·裸鼠成瘤实验 | 第31页 |
| ·FCM检测细胞周期和细胞凋亡 | 第31页 |
| ·Hoechst33258染色检测细胞凋亡 | 第31页 |
| ·人类全基因组表达谱芯片杂交(由博奥生物有限公司完成) | 第31-32页 |
| ·差异表达基因的raltime RT-PCR验证 | 第32-35页 |
| 第三章 结果 | 第35-62页 |
| 第一部分 RASSF1A基因在黑色素瘤细胞和组织中的表达 | 第35-38页 |
| ·RASSF1A基因在黑色素瘤组织中的表达 | 第35-37页 |
| ·RASSF1A表达与恶黑临床相关分析 | 第37页 |
| ·RASSF1A蛋白在黑色素瘤细胞系中的表达 | 第37-38页 |
| 第二部分 RASSF1A基因过表达对A375细胞的影响 | 第38-49页 |
| ·RASSF1A真核表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·RASSF1A稳定转染黑色素瘤细胞系的建立 | 第39-41页 |
| ·RASSF1A对A375细胞生长与增殖的影响 | 第41-42页 |
| ·RASSF1A对A375细胞集落形成能力的影响 | 第42-43页 |
| ·RASSF1A对A375细胞形态影响 | 第43-44页 |
| ·RASSF1A抑制A375细胞裸鼠移植瘤的形成 | 第44-45页 |
| ·RASSF1A促进A375细胞凋亡 | 第45-46页 |
| ·RASSF1A对A375细胞周期的影响 | 第46-47页 |
| ·RASSF1A对细胞周期调控分子表达的影响 | 第47页 |
| ·RASSF1A通过降低cyclin D1蛋白稳定性抑制其表达 | 第47-49页 |
| 第三部分 RASSF1A对黑色素瘤细胞基因表达谱的影响 | 第49-57页 |
| ·RASSF1A基因对A375细胞基因表达谱的影响 | 第49-52页 |
| ·差异表达基因的生物信息学分析 | 第52-53页 |
| ·差恂表达基因KEGG和BIOCARTA数据库pathway分析 | 第53-54页 |
| ·差异表达基因的进一步验证 | 第54-57页 |
| 第四部分 RASSF1A调控恶黑细胞凋亡和细胞周期的分子机制 | 第57-62页 |
| ·RASSF1A上调ASK1表达激活p38 MAPK信号途径 | 第57-58页 |
| ·RASSF1A对cytochrome c亚细胞分布的影响 | 第58-59页 |
| ·RASSF1A诱导恶黑细胞凋亡的作用部分依赖于ASK1 | 第59页 |
| ·RASSF1A抑制了AKT/mTOR信号通路的活化 | 第59-60页 |
| ·AKT可以逆转RASSF1A对信号通路的调节作用 | 第60-62页 |
| 第四章 讨论 | 第62-81页 |
| ·RASSF1A蛋白在恶黑组织和细胞系中表达下调 | 第62-64页 |
| ·RASSF1A具有抑制恶黑A375细胞生长与增殖的作用 | 第64-67页 |
| ·RASSF1A下调cyclin D1和p-Rb表达,引起A375细胞周期G1-S期阻滞 | 第67-69页 |
| ·RASSF1A促进A375细胞凋亡 | 第69-70页 |
| ·RASSF1A调控的A375差异基因表达谱的构建 | 第70-75页 |
| ·RASSF1A通过上调ASK1促进细胞凋亡的分子机制 | 第75-77页 |
| ·RASSF1A抑制了恶黑细胞AKT/mTOR信号通路 | 第77-80页 |
| ·Summary:RASSF1A抑制了恶黑细胞生物学表型的分子机制 | 第80-81页 |
| 结论 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-95页 |
| 综述 | 第95-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 个人简历 | 第104-105页 |
