| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第10-22页 |
| 1. 板蓝根研究进展 | 第10-14页 |
| ·板蓝根概述 | 第10页 |
| ·板蓝根化学成分研究 | 第10-12页 |
| ·生物碱类 | 第10-11页 |
| ·有机酸类 | 第11页 |
| ·黄酮、木质素类 | 第11页 |
| ·蒽醌类 | 第11页 |
| ·甾体、三萜类 | 第11页 |
| ·氨基酸类化合物 | 第11页 |
| ·甾醇类化合物 | 第11页 |
| ·核苷类化合物 | 第11页 |
| ·其他化学成分 | 第11-12页 |
| ·板蓝根药理作用 | 第12-14页 |
| ·抗病毒作用 | 第12页 |
| ·抗内毒素作用 | 第12-13页 |
| ·免疫调节作用 | 第13页 |
| ·抗肿瘤作用 | 第13页 |
| ·抑制单胺氧化酶作用 | 第13-14页 |
| ·致突变作用 | 第14页 |
| ·对肝脏的保护作用 | 第14页 |
| 2. 生物碱研究进展 | 第14-22页 |
| ·生物碱在植物体中的存在形式 | 第15-16页 |
| ·生物碱的分类及举例 | 第16页 |
| ·生物碱的定性鉴定（生物碱沉淀反应） | 第16-17页 |
| ·板蓝根生物碱的提取 | 第17-18页 |
| ·生物碱的分离 | 第18-22页 |
| ·总生物碱的初步分离 | 第18-19页 |
| ·生物碱单体的分离 | 第19-22页 |
| 试验一 板蓝根生物碱的提取及体外抗菌作用 | 第22-31页 |
| 1. 材料与方法 | 第22-25页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·药物和试剂 | 第22页 |
| ·指示菌种 | 第22页 |
| ·试剂和培养基的配制 | 第22-23页 |
| ·板蓝根水溶性生物碱溶液的配制 | 第22页 |
| ·板蓝根脂溶性生物碱溶液 | 第22页 |
| ·牛肉膏汤 | 第22-23页 |
| ·固体培养基 | 第23页 |
| ·生物碱鉴定试剂的配制 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-25页 |
| ·板蓝根生物碱的提取 | 第23页 |
| ·生物碱的鉴定 | 第23-24页 |
| ·板蓝根生物碱体外抑菌试验 | 第24-25页 |
| ·菌液的配制与计数 | 第24页 |
| ·最小抑菌浓度（MIC）的测定 | 第24页 |
| ·测定板蓝根生物碱对六种菌种的抑菌效果 | 第24-25页 |
| 2. 结果 | 第25-28页 |
| ·板蓝根生物碱的提取结果 | 第25页 |
| ·板蓝根生物碱的鉴定结果 | 第25页 |
| ·生物碱最小抑菌浓度（MIC）测定结果 | 第25-27页 |
| ·板蓝根水溶性生物碱对六种试验细菌最小抑菌浓度（MIC）的测定结果 | 第25-26页 |
| ·板蓝根脂溶性生物碱对六种试验细菌的最小抑菌浓度（MIC）的测定结果 | 第26-27页 |
| ·板蓝根生物碱对六种试验菌种的抑菌测定效果 | 第27-28页 |
| ·板蓝根水溶性生物碱对六种试验菌种的的抑菌测定效果 | 第27-28页 |
| ·板蓝根脂溶性生物碱对六种试验菌种的的抑菌测定效果 | 第28页 |
| 3. 讨论 | 第28-31页 |
| 试验二 板蓝根生物碱抗病毒作用 | 第31-46页 |
| 1. 材料与方法 | 第31-37页 |
| ·材料 | 第31-33页 |
| ·主要仪器 | 第31页 |
| ·药物和试剂 | 第31页 |
| ·病毒 | 第31页 |
| ·试剂的配制 | 第31-33页 |
| ·板蓝根水溶性生物碱溶液 | 第31页 |
| ·板蓝根脂溶性生物碱溶液 | 第31页 |
| ·板蓝根混合生物碱溶液 | 第31页 |
| ·细胞生长液 | 第31页 |
| ·磷酸盐缓冲盐水（PBS） | 第31-32页 |
| ·胰蛋白酶（0.25%） | 第32页 |
| ·PBS液（1000ml） | 第32页 |
| ·D-HANKS 平衡液（1000mI） | 第32-33页 |
| ·1640细胞培养液（1000 ml ） （含10%小牛血清） | 第33页 |
| ·1640维持液（1000 ml ） （含2%小牛血清） | 第33页 |
| ·PH调整液 | 第33页 |
| ·噻唑蓝（MTT）（5mg/ml） | 第33页 |
| ·方法 | 第33-37页 |
| ·PK-15 细胞的复苏、传代 | 第33页 |
| ·PK-15 细胞的复苏 | 第33页 |
| ·PK-15 细胞的传代 | 第33页 |
| ·PPV 毒株的毒力测定（采用CPE 法） | 第33-34页 |
| ·制备细胞 | 第33-34页 |
| ·接种病毒 | 第34页 |
| ·结果处理 | 第34页 |
| ·药物对PK-15 细胞的安全浓度试验（CPE 法与MTT 法结合） | 第34-35页 |
| ·制备细胞 | 第34页 |
| ·药物处理 | 第34-35页 |
| ·接种药物 | 第35页 |
| ·数据收集 | 第35页 |
| ·统计学处理 | 第35页 |
| ·二甲基亚砜（DMSO）对PK-15 细胞安全浓度的测定 | 第35-36页 |
| ·二甲基亚砜的稀释 | 第35-36页 |
| ·接种药物 | 第36页 |
| ·药物对PPV 的抑制作用 | 第36-37页 |
| ·细胞制备 | 第36页 |
| ·药物稀释 | 第36页 |
| ·病毒稀释 | 第36页 |
| ·加药方式 | 第36-37页 |
| ·数据收集 | 第37页 |
| ·统计学处理 | 第37页 |
| 2. 结果 | 第37-44页 |
| ·病毒毒力测定结果 | 第37-38页 |
| ·药物对PK-15 细胞的安全浓度结果 | 第38-42页 |
| ·CPE 法测定结果 | 第38-39页 |
| ·MTT 法结果 | 第39-41页 |
| ·二甲基亚砜对PK-15 细胞安全浓度的测定结果 | 第41-42页 |
| ·药物对PPV 增殖的抑制作用 | 第42-44页 |
| ·生物碱对PPV 抑制作用的结果 | 第42-43页 |
| ·生物碱对PPV 阻断作用的结果 | 第43页 |
| ·生物碱对PPV 直接杀灭作用的结果 | 第43-44页 |
| 3. 讨论 | 第44-46页 |
| 试验三 SYBR Green I 实时荧光定量PCR 检测板蓝根混合生物碱抗猪细小病毒作用 | 第46-66页 |
| 1. 材料与方法 | 第46-52页 |
| ·材料 | 第46-47页 |
| ·病毒和菌株 | 第46页 |
| ·载体、主要试剂及仪器 | 第46-47页 |
| ·板蓝根混合生物碱溶液 | 第46页 |
| ·细胞生长液 | 第46页 |
| ·细胞维持液 | 第46页 |
| ·胰蛋白酶（0.25%） | 第46页 |
| ·磷酸盐缓冲盐水（PBS） | 第46-47页 |
| ·方法 | 第47-52页 |
| ·SYBR Green GreenⅠ荧光定量检测猪细小病毒方法的建立 | 第47-50页 |
| ·PPV 的培养增殖 | 第47页 |
| ·引物设计与合成 | 第47页 |
| ·病毒DNA 的提取 | 第47-48页 |
| ·感受态细胞的制备（CaCl_2 法） | 第48页 |
| ·标准品的制备 | 第48页 |
| ·PPV NS1 基因 PCR 扩增 | 第48页 |
| ·PCR 产物的回收、连接 | 第48-49页 |
| ·连接产物的转化 | 第49页 |
| ·质粒的提取与鉴定 | 第49页 |
| ·质粒浓度的测定 | 第49页 |
| ·标准曲线的建立 | 第49-50页 |
| ·实时荧光定量PCR 条件的优化 | 第50页 |
| ·引物浓度的优化 | 第50页 |
| ·退火温度的优化 | 第50页 |
| ·SYBR GreenⅠ浓度的优化 | 第50页 |
| ·特异性、重复性和敏感性试验 | 第50页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第50页 |
| ·SYBR Green GreenⅠ检测板蓝根混合生物碱抗猪细小病毒 | 第50-52页 |
| ·PPV 病毒增殖规律的测定 | 第50-51页 |
| ·接种药物 | 第51页 |
| ·荧光定量测定PPV DNA 的含量 | 第51-52页 |
| 2. 结果 | 第52-64页 |
| ·SYBR Green GreenⅠ荧光定量检测猪细小病毒方法建立结果 | 第52-57页 |
| ·常规PCR 扩增 | 第52页 |
| ·PPV 重组质粒PCR 鉴定结果 | 第52-53页 |
| ·PPV 质粒酶切鉴定结果 | 第53-54页 |
| ·紫外检测结果 | 第54页 |
| ·实时荧光定量PCR 条件的优化 | 第54页 |
| ·标准质粒的制备 | 第54-56页 |
| ·特异性试验 | 第56页 |
| ·重复性试验试验结果 | 第56-57页 |
| ·敏感性试验结果 | 第57页 |
| ·SYBR Green GreenⅠ荧光定量PCR 检测板蓝根混合生物碱抗猪细小病毒结果 | 第57-64页 |
| ·荧光定量PCR 检测PPV 在PK-15 细胞中增殖规律测定的结果 | 第57-59页 |
| ·不同时间段的PK-15 细胞培养上清液中的PPV DNA 含量测定 | 第59-60页 |
| ·荧光定量测定板蓝根混合生物碱对PPV 作用 | 第60-64页 |
| 3. 讨论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-69页 |
| 英文摘要 | 第69页 |
